三、盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查
1、杂质来源： 水解产生对氨基苯甲酸，进一步脱羧、氧化成有色杂质， 使注射剂颜色变黄、疗效下降、毒性增加。
NH2 [H2O] NH2 - CO2 NH2 [O] O
COOCH2CH2N(C2H5)2
COOH
O
检查方法 ： TLC法（杂质对照法）
实验原理
1、杂质对照法： 杂质已知且有杂质对照品 对照品：对氨基苯甲酸 供试品：盐酸普鲁卡因
薄层色谱操作要点
薄层板的制备 点样 展开 斑点确定
G板和H板的制备
玻璃板洗净，吹干，待用。 G板：玻璃背面先贴上标签（G板），取硅胶G粉5g，加18毫 升水，向同一个方向研磨混合，去除表面气泡，从中心倒入洁 净玻璃板，研钵棒助涂布均匀(快速)，拍板，转向，再拍板， 平推，勿动！！，晾干，用前烘干活化。 H板：玻璃背面先贴上标签（H板），取硅胶H粉5g，加18毫 升CMC-Na，同上法制板，平推，勿动！！ 制板完让老师看板，认可后方能离开。每人一个G板一个H板
薄层板的制备
点样
展开
斑点确定
1、先放入板，再加展开剂15mL，浸没0.5-1cm，样品点不得浸 入展开剂。 2、薄层板先置于盛有展开剂的色谱缸中饱和3-5min，使得展 开剂蒸汽，缸内大气，薄层达到平衡，避免边缘效应 3、待展开至10cm~15cm，取出，晾干，按规定方法检测。 4、层析缸必须密闭，否则影响分离效果。相邻两组互换层析 缸，实验完毕，展开剂应回收。 展开中 预饱和
实验原理
2010版用HPLC法
水杨酸对照液 阿司匹林
阿司匹林无游离酚羟基，不与Fe3+ 作用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇
色，可检出1μg的游离水杨酸。
+Fe3++H2O
Fe ↓硫酸铁铵
OH
合格
对照液颜色 > 供试液颜色
紫堇色
实验步骤
1、样品前处理 取本品30片（0.025g/片），研细，用乙醇15ml分次研磨，并 移入50ml量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即滤 过，取续滤液。 样品管 对照管 4.50mL0.01%水杨酸标液 50ml 2.00mL续滤液 3mL 乙醇 纳氏 水稀释至50mL 1.00mL酒石酸溶液 比色 3mL硫酸铁铵 水稀释至50mL 管 3mL硫酸铁铵 比较颜色，不得更深（1.5%）
不合格
实验步骤
1. 供试品溶液和对照品溶液的制备 取本品，加氯仿-甲醇（9:1）制成每1ml中含3.0mg的溶液， 作为供试品溶液。精密量取适量，加氯仿-甲醇（9:1）制成每 1ml中含60mg的溶液，作为对照品溶液。 2. 检查 吸取上述两种溶液各5μl （毛细管高度约1.5cm）， 分别 点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（385： 60：30：2）为展开剂，展开后，晾干，在105℃干燥10min， 放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液如显 杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照溶液的主斑点比较， 不得更深。
解褪色。
二、氢化可的松中有关物质的检查 甾体激素中的有关物质： 1、杂质来源 原料、中间体、异构体、降解产物 2、特点 （1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似 本实验中，氢化可的松中“其他 甾体” 的检查采用TLC法（自身稀释 对照法）。 2010版用HPLC法
O HO H
CH2OH OH
H O
H
氢化可的松 天然皮质激素
实验原理
方法：
溶剂溶解 S 供试品溶液
一定量供试品溶液 对照溶液
一定比例稀释
杂质 主药 杂质
供试品溶液所显杂质斑点颜色不 得深于对照溶液的主斑点 四氮唑比色法： 肾上腺 皮质激 素药物 四氮唑盐 OHˉ 紫色斑点
供 试 品 溶 液 对 照 溶 液
本次实验内容
1
阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查
2
氢化可的松中有关物质的检查
3
盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查
(CH
生产工艺：
ONa ONa OH COONa H+ COOH
O
OCOCH O C 3 CH3
3 CO
O
OCOCH O ONa C ONa 3 CH3
COONa COOH H O CO 2+ H 2 加压，
薄层色谱操作要点
薄层板的制备 点样 展开 斑点确定 不要划线， 以免破坏硅 胶表面，毛 细管轻触表 面，不要捅 破硅胶。 2cm
1、点样工具为点样毛细管
2、点样时，宜分次点加，每次 点加后，待其自然干燥。
3、点样基线距底边2.0cm，样点 一般为圆点，直径2mm~4mm， 点间距离可视斑点扩散情况以不 影响检出为宜，一般约为 1.5cm~2.0cm。
实验二：
药物中特殊杂质的检查
药品中的杂质
一般杂质：
自然界中分布较广，在多种药物的生成和贮存过程中容 易引人的杂质，如氯化物，硫酸盐，铁盐，重金属，砷盐等。 特殊杂质：
指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质， 如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素 中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药 品的质量标准中。
注意事项： 1. 在阿司匹林中游离水杨酸的检查中，制备供试品溶液 所用的比色管须经干燥后使用，且供试品须用乙醇溶解 后才可加水稀释至刻度，否则供试品难以溶解。 2. 游离水杨酸检查时，供试品溶液要临用现配，避免阿 司匹林水解造成的误差。
3. 进行水杨酸检查时，应在中性或弱酸性溶液（pH4~6）
中进行。若在强酸性溶液中，生成的紫兰色配合物会分
杂质 主药
合格
薄层板：硅胶H板
展开剂：苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4） 显色剂：对二甲氨基苯甲醛
供 试 品 杂 质 对 照 品
杂质斑点与对照品主斑点比较，不得更深。
2010版用HPLC法
实验步骤
吸取盐酸普鲁卡因供试液和对氨基苯甲酸对照液各10μl （毛细管高度约2.0cm），分别点于同一含有羧甲基纤维素 钠为粘合剂的硅胶H薄层板上。以苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14： 1：1：4）为展开剂，展开后，晾干，用对二甲氨基苯甲醛 溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸 5ml制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质 斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
H2 S
贮藏水解：
ONa OH COONa COOH OH
O
(CH
O4 ,
70~ 75 C
。 CO2 加压，
)2 O
(CH3CO)2O
COOH
O2 ，
[O] H+
COOபைடு நூலகம் [O]
COOH
OH
O
H2 S
O4 ,
1、杂质来源
3 CO
70~ 75 C
)2 O
一、阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查
。
比色法：