第二章
菌种的扩大培养
定义：菌种的扩大培养就是把保藏的 菌种，即砂土管，冷冻干燥管中处 于休眠状态的生产菌种接入试管斜 面活化，再经过扁瓶或药瓶和种子 罐，逐级扩大培养后达到一定的数 量和质量的纯种培养过程。这些纯 种的培养物称为种子。
பைடு நூலகம்
种子必须具备的条件
①菌种细胞的生长活力强，接种后在发酵罐 菌种细胞的生长活力强， 中能迅速生长 ②生理性状稳定 ③菌体总量和浓度能满足大容量发酵罐的要 求 无杂菌污染（不带杂菌） ④无杂菌污染（不带杂菌） ⑤生产能力稳定
(250ml 500ml麦麦 麦) 2d
1000ml 三三 三
25 oc
5 10 L 麦麦 麦
发酵酵 3 5d
实验室种子制备
在砂土管或冷冻干燥管内保藏的菌种以 无菌的方式接至适合的斜面培养基上， 无菌的方式接至适合的斜面培养基上， 培养成熟后挑选正常的菌落再接一次试 管斜面并至摇瓶。 管斜面并至摇瓶。
生产车间种子制备
实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接 到种子罐进行扩大培养 种子罐培养一方面使菌种获得足够的 数量， 数量，另一方面种子罐中的培养基更接 近发酵罐培养的醪液成分和培养条件， 近发酵罐培养的醪液成分和培养条件， 譬如通无菌空气，搅拌形式等等， 譬如通无菌空气，搅拌形式等等，以使 菌体适应发酵环境
种子制备过程
实验室种子制备阶段：琼脂斜面至固体 培养基扩大培养（如茄子瓶斜面培养等 或液体摇瓶培养 生产车间种子制备阶段：种子罐扩大培 养
摇三 砂砂 （ 冷 试 试 冷冷 冷 ） 斜斜 固体斜斜
摇 三 种种酵 固 体 发 酵 酵
25
斜斜 15 20 oc
10ml 试 试
27oc 3d
2
500
种子罐级数的确定
种子罐的级数是指制备种子需逐级扩大 培养的次数 对于生长快的细胞， 对于生长快的细胞，种子用量的比例 即需要的接种量少， 少，即需要的接种量少，所以相应的种 子罐也少
接种种龄和接种量
接种龄 种子罐中培养的菌体从开始移入下一级种子 罐或发酵罐时的培养时间 接种量 接种量指的是移入的种子悬浮液体积和接种后 培养液体的体积的比例 种子质量的判断
种子质量的控制措施
菌种稳定性的检查 将保藏菌株溶于无菌的生理盐水中，逐级稀释， 将保藏菌株溶于无菌的生理盐水中，逐级稀释， 然后在培养皿琼脂固体培养基上划线培养， 然后在培养皿琼脂固体培养基上划线培养，长出 菌落， 菌落，选择形态优良的菌落接入三角瓶进行液体 摇瓶培养， 摇瓶培养，检测出生产率高的菌种备用 杂菌检查 显微镜观察，或平板培养试验， 显微镜观察，或平板培养试验，即将种子液涂在 平板培养皿上划线培养，观察有无异常菌落， 平板培养皿上划线培养，观察有无异常菌落，定 时检查， 时检查，防止漏检