卵磷脂的提取及其组成鉴定
• 一、实验目的 • 学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法。 • 巩固抽滤等基本操作。
二、基本原理
• 卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋 黄中含量较高，约8％。可根据它溶于乙醇、 氯仿而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离 得到。卵磷脂可在碱性溶液中加热水解， 得到甘油、脂肪酸、磷酸和胆碱，可从水 解液中检查出这些组分。其分离提取的流 程如下：
2．卵磷脂的水解及其组成鉴定
• （1）水解：取一支干燥大试管，加入提取的一半量的卵磷脂，并加 入5ml 20％氢氧化钠溶液，放入沸水浴中加热10分钟，并用玻棒加以 搅拌，使卵磷脂水解，冷却后，在玻璃漏斗中用棉花过滤。滤液供下 面检查用。 • （2）检查 • 脂肪酸的检查：取棉花上沉淀少许，加1滴20％氢氧化钠溶液与5ml水， 用玻棒搅拌使其溶解，在玻璃漏斗中用棉花过滤得澄明液，以硝酸酸 化后加入10％醋酸铅2滴，观察溶液的变化。 • 甘油的检查：取试管一支，加入1％硫酸铜溶液1ml，2滴20％氢氧化 钠溶液，振摇，有氢氧化铜沉淀生成，加入1ml水解液振摇，观察所 得结果。 • 胆碱的检查：取水解液1ml，滴加硫酸使其酸化（以石蕊试纸试之） 加入1滴克劳特试剂（碘化铋钾溶液），有砖红色沉淀生成。 • 磷酸的检查：取试管一支，加10滴水解液，加硫酸酸化，再加5滴钼 酸铵试剂，20滴氨基萘酚磺酸溶液，振摇后，水浴加热，观察颜色的 变化。
思考题：
• • • • 1．蛋黄中分离卵磷脂根据什么原理？ 2．卵磷脂可以皂化，从结构分析应作何 解释？ 3．卵磷脂可作乳化剂，这是为什么？ 4．为什么实验中要进行减压过滤？操作 时应注意哪些地方？
三、仪器和药品
• 仪器：研钵 布氏漏斗 蒸发皿 棉花 • 药品：20％NaOH溶液 10％Pb(AC)2 1％ CaSO4溶液 硫酸95％乙醇 氯仿 熟鸡蛋 黄 丙酮 碘化铋钾溶液 钼酸铵试剂 氨基 取 （1）取熟鸡蛋蛋黄2只，于研钵中研细，先加入20ml 95 ％乙醇研磨，再加入20ml 95％乙醇充分研磨，减压过滤， 布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后，移入研钵中，再加 20ml 95％乙醇研磨，减压过滤，滤干后，合并二次滤液， 如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移入蒸发皿内。 • （2）将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干，得到黄色油 状物。 • （3）冷却后，加入8ml氯仿，搅拌使油状物完全溶解。 • （4）在搅拌下慢慢加入30ml丙酮，即有卵磷脂析出，搅 动使其尽量析出（溶液倒入回收瓶内）。
[注释]
• 1. 第一次减压过滤，因刚析出的醇中不溶物很细以及有少许水份，滤 出物浑浊，放置后继续有沉淀析出，需合并滤液后，以原布氏漏斗 （不换滤纸）反复滤清。 • 2. 蒸去乙醇时，可能最后有少许水份，需搅动加速蒸发，务使蒸干。 • 3. 黄色油状物干后，蒸发皿壁上沾的油状物一定要使其溶于氯仿中， 否则会带入杂质。 • 4. 搅动时，析出的卵磷脂可粘附于玻棒上，成团状。 • 5. 加热时，会促使胆碱分解，产生三甲胺的臭味。 • 6. 加硝酸酸化，脂肪酸析出，溶液变浑浊，加醋酸铅有脂肪酸铅盐生 成，浑浊进一步增强。 • 7. 生成的氢氧化铜沉淀．因水解液中的甘油与之反应，生成甘油铜， 沉淀逐步溶解。 • 8. 克劳特试剂为含有KI－BiI3复盐的有色溶液，与含氮碱性化合物如 胆碱生成砖红色的沉淀。 • 9. 钼酸铵经硫酸酸化为钼酸，它与磷酸结合为磷钼酸，磷钼酸再与还 原剂氨基萘酚磺酸作用，生成蓝色钼的氧化物。