6、2-3滴0.2%考马斯亮蓝R250染色5-10min。
7、用4ml蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上，加盖玻片， 于光学显微镜下观察。
细胞生物学实验
注意事项
1. 用滴管吸取溶液时要小心，不要把表皮洗掉；
2. TritonX-100处理时间太短，没有去除细胞器膜上的蛋白，
会造成很深的背影颜色，干扰细胞骨架观察，如果处理时 间太长，会破坏骨架蛋白使骨架纤维断裂，应控制在2030mmin. 3. 每次加液或染色后，应洗净漂洗液，用纸吸干。 4. 加3%戊二醛对细胞骨架和细胞形态的维持很重要，固定时 间不少于20min.
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实验步骤
1、取1小烧杯加约10ml磷酸缓冲液,用镊子撕取洋葱鳞叶内侧
的表皮若干片(约0.5cm2大小)放入小烧杯中,使其下沉；
2、弃磷酸缓冲液，加3ml 1% TritonX-100处理20min； 3、弃处理液，用2ml的M缓冲液洗3次，每次3分钟； 4、用3ml 3%戊二醛溶液固定10min； 5、移出固定液，用2ml磷酸缓冲液洗2次，每次2分钟；
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植物细胞骨架微丝结构图
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细胞骨架观察结果（40倍镜下）
•可清楚观察到蓝色的网状结构是由线性纤维交织成，纤维间的结
合点稍膨大。相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁。
•细胞边缘骨架较稀疏，但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的细
胞质膜的轮廓，与细胞内部的纤维通过纵向的纤维相连。 •调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化，表 明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。
一、实验材料：洋葱鳞叶内表皮 二、实验试剂: 1)2%考马斯亮蓝R250染色液 2)6mmol/L磷酸缓冲液： 3)M缓冲液(pH 7.2） 4)1% TritonX-100： 5)3% 戊二醛（用pH6.5的PBS配制） 三、实验仪器：
显微镜，50ml烧杯，滴管，载玻片，盖玻片，镊子，
（铅笔和橡皮擦自备）
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细胞骨架观察结果
•光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见（如图），细胞 壁及其分界明显。10×10倍镜下可粗略观察到细胞内粗细不等的
蓝色纤维、团块形成的网状结构。同一细胞内各处骨架的密集度
不均匀，细胞核区域的纤维相对密集，蓝色浓重，甚至分辨不出 网络结构，另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布；相邻细胞 的密集程度基本一致，但有少数细胞有较大不同。
细胞生物学实验
实验四、细胞骨架的观察
实验目的：
掌握植物细胞骨架的主要成分和制备的原理及方法。
观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。
细胞(cytoskeleton)，是以蛋白质纤维组成的网状结构， 根据蛋白质纤维的直径、组分和组装结构的不同可分为微管、 微丝和中等纤维。 细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、 能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。
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作业： 1.描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图；
2.说明Triton X-100、戊二醛、考马斯亮蓝在本实验中的
作用。
细胞骨架的研究已成为当今细胞生物学研究的重要领域之一
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非离子型去垢剂TritonX-100 ，可将细胞的膜结构和大
部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的纤维蛋白却被保 存下来； 用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一种网 状结构，即为细胞骨架。
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实验材料、试剂和仪器