实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）
一、实验目的与要求
1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。

2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。

二、实验原理
尿素在脲酶作用下分解生成氨。

在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。

其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2
氨
NH3+OCl-NH2Cl+OH-
次氯酸氨胺催化剂
NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2
苯酚P胺基苯酚
HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O
酚靛三、实验仪器与试剂
1 仪器
（1） AT648半自动生化分析仪1台；
（2） 4孔恒温水浴锅1个；
（3）振动摇床1台。

2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：
（1）试管架1个；
（2） 2ml试管10个；
（3） 20μl微量加样器1个；
（4） 1ml移液管1个；
（5） 5ml移液管2个；
（6）吸耳球1个；
（7）搪瓷盘1个；
（8）微量加样滴头；
（9）吸水纸。

3 本试剂盒内含5种试剂：
（1）脲酶（冻干） 2瓶
（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml
（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml
（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml
（5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml
四、实验步骤
1 血清
（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。

（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。

表131系列反应管中所加溶液的量
空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。

（4）再于37℃水浴中保温20min，取出冷却至室温，于721分光光度计/ AT648半自动生
化分析仪上550nm波长下比色。

以空白管校正“0”点、读取各管的光密度。

2 尿液用无氨水将尿液稀释20倍，再按上法测定。

五、实验结果与分析
尿素氮含量（mg/dl）=测定管吸光度标准管吸光度×稀释倍数×20mg/dl线性范围：血清中尿素氮含量为100mg/dl或尿液中尿素氮含量为2000mg/dl以内，用本试剂盒测得的结果线性良好。

六、实验报告
参照《营养学》、《生物化学》原理分析。

七、注意事项
1 试剂为空白对照；
2 每组样品做2～3个平行实验；
3 正常参考值：正常人血清尿素氮含量为5～17mg/dl；尿素氮标准液20mg/dl=7.14mmol/L。