补体实验报告篇一：补体结合实验第二节补体结合实验补体结合实验（complementfixationtest，cft）是用免疫溶血机制做指示系统，来检测另一反映系统抗原或抗体的实验。

早在1906年wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反映。

这一传统的实验经不断改良，除用于传染病诊断和流行病学调查之外，在一些自身抗体、肿瘤相关以原和hla的检测和分析中也有应用。

一、类型及原理自身免疫性溶血，若是有补体参与时，补体通过一系列的激活，最后形成膜解决复合物（membrane attack complex），它可以直接解决红细胞膜，致使红细胞破裂，这就是所谓“血管内溶血”。

而没有补体参与的免疫性溶血，抗体与红细胞膜上抗原结合后，没有直接把红细胞破坏，而是把红细胞“致敏”，致敏RBC在通过脾脏等网状内皮系统时，被吞噬细胞“吃掉”，这就是所谓“血管外溶血”。

该实验中有5种成份参与反映，分属于3个系统：①反映系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，即srbc与相应溶血素，实验时常将其预先结合在一路，形成致敏红细胞。

反映系统与指示系统争夺补体系统，先加入反映系统给其以优先结合补体的机缘。

若是反映系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反映后可结合补体；再加入指示系统时，由于反映液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合实验阳性。

若是反映系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合实验阴性（图14-2）。

因此补体结合实验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。

图14-2补体结合实验示用意二、实验方式补体结合实验的改良方式较多，较常常利用的有全量法(3ml)、半量法(1.5ml)、小量法(0.6ml)和微量法（塑板法）等。

目前以后两种方式应用较为普遍，因为可以节省抗原，血清标本用量较少，特异性也较好。

以下叙述以小量法为例，即抗原、抗体、溶血素、羊红细胞各加0.1ml，补体加0.2ml，总量为0.6ml。

（一）试剂1．抗原实验顶用于检测抗体的抗原应适当提纯，纯度愈高，特异性愈强。

如利用粗制抗原时，须经一样处置的正常组织作抗原对照，以识别待检血清中可能存在的、对正常组织成份的非特异性反映。

2．抗原和抗本的滴定补体结合实验中，抗原与抗体按必然比例结合，因此应通过实验选择适宜的浓度比例。

多采用方阵法进行滴定，选择抗原与抗体二者都呈强阳性反映（100％不溶血）的最高稀释度作为抗原和抗体的效价（单价）。

滴定方式举例如表14-4。

在试管中加入不同稀释度的抗原，配加不同稀释度的抗血清，另作不加抗原的抗体对照管和不加抗血清的抗原对照管。

依如实验方式加补体和指示系统，温育后观察结果。

在表14-4中可见1:64抗原和1:32抗体各作为1个单位。

在正式实验中，抗原一般采用2～4个单位（1:64～1:32），抗体采用4个单位（1:8）。

表14-4抗原和抗体的方阵滴定抗原1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 抗体对照抗血清稀释倍数1:4 4 4 4 4 4 4 3 0 01:8 4 4 4 4 4 2 1 0 01:16 4 4 4 4 4 1 0 0 01:32 4 4 4 4 ④0 0 0 01:64 4 4 3 3 2 0 0 0 01:128 4 3 2 1 ±0 0 0 01:256 3 2 2 ±0 0 0 0 01:512 2 1 ±0 0 0 0 0 0抗原对照0 0 0 0 0 0 0 0注：一、二、3、4别离表示溶血反映强度＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋；0为不溶血。

3．补体滴定按表14-5慢慢加入各试剂，温育后观察最少量补体能产生完全溶血者，肯定为1个实用单位，正式实验中利用2个实用单位。

如形14-5中的结果为1:60的补体0.12ml可产生完全溶血，按比例公式0.12×2:60＝0.2:x计算，x＝50；即实际应用中的2个补体实用单位应为1:50稀释的补体0.2ml。

表14-5补体的滴定管号1:60补体（ml）缓冲液（ml）稀释抗原（ml）致敏srbc （ml）1 2 3 4 5 60.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.140.26 0.24 0.22 0.20 0.18 0.160.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1浴30min 37℃水置放0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2浴30min 37℃水置放不溶血不溶血微溶血微溶血全溶血全溶血结果（二）血清标本收集血液标本后及时分离血清，及时查验或将血清保留于－20℃。

血清在实验前应先加热56℃30min（或60℃3min）以破坏补体和除去一些非特异因素。

血清标本遇有抗补本现象时可做下列处置之一：①加热提高12；②－20℃冻融后离心去沉淀；③以3mmol/l盐酸处置；④加入少量补体后再加热灭活；⑤以白陶土处置；⑥通入co2；⑦以小白鼠肝粉处置；⑧用含10％新鲜鸡蛋清的生理盐水稀释补体。

（三）正式实验以小量法测定抗体的补体结合实验为例。

按表14-6慢慢加入各类试剂，温育后先观察各类对照管，应与预期的结果吻合。

阴性、阳性对照管中应别离为明确的溶血与不溶血；抗体或抗原对照管、待检血清对照管、阳性和阴性对照的对照管都应完全溶血。

绵羊红细胞对照管不该出现自发性溶血。

补体对照管应呈现2u为全溶，1u为全溶略带有少量红细胞，0.5u应不溶。

如0.5u补体对照出现全溶表明补体用量过量；如2u对照管不出现溶血，说明补体用量不够，对结果都有影响，应重复进行实验。

补体结合实验结果，受检血清不溶血为阳性，溶血为阴性。

表14-6测定抗体的补体结合实验操作程序反映物（ml）待检血清管测定稀释血清抗原缓冲液2u补体1u补体0.5u补体致敏红细胞混匀，置37℃30min后观察结果0.1 0.1 －0.2 －－0.2对照0.1 －0.1 0.2 －－0.2阳性对照管测定0.1 0.1 －0.2 －－0.2对照0.1 －0.1 0.2 －－0.2阴性对照管测定0.1 0.1 －0.2 －－0.2对照0.1 －0.1 0.2 －－0.2抗原对补体对照管照管－0.1 0.1 0.2 －－0.22u －0.1 0.1 0.2 －－0.21u －0.1 0.1 －0.2 －0.20.5u －0.1 0.1 －－0.2 0.2－－0.4 －－－0.2红细胞对照管混匀，置37℃1h或4℃16～18h三、应用和评价补体结合实验是一种传统的免疫学技术，能够沿用至今说明它本身有必然的长处：①灵敏度高。

补体活化进程有放大作用，比沉淀反映和凝集反映的灵敏度高得多，能测定0.05μg/ml的抗体，可与间接凝集法的灵敏度相当。

②特异性强。

各类反映成份事前都通过滴定，选择了最佳比例，出现交叉反映的机率较小，尤其用小量法或微量法时。

③应用面广，可用于检测多种类型的抗原或抗体。

④易于普及，实验结果显而易见；实验条件要求低，不需要特殊仪器或只用光电比色计即可。

补体结合实验可应用在以下几方面：①传染病诊断。

病原性抗原及相应抗体的检测。

②其他抗原的检测。

例如肿瘤相关抗原、血迹中的蛋白质鉴定、hla分型等。

③自身抗体检测。

可是补体结合实验参与反映的成份多，影响因素复杂，操作步骤繁锁而且要求十分严格，稍有疏忽便会得出不正确的结果，所以在多种测定中已被其他更易被接受的方式所取代。

但对于免疫学技术的大体训练仍是一个很好的实验。

篇二：医学免疫学CDC实验报告CDC实验一.实验原理细胞表面抗原与相应的抗体（IgG1~3或IgM）特异性结合形成的免疫复合物，可通过经典途径激活补体形成攻膜复合体而致使细胞膜穿孔。

因此，水溶性染料如台盼蓝可进入受损细胞，染成蓝色，为阳性反映；不带抗原的细胞，未损伤，不染色，为阴性反映。

二. 实验步骤1.胸腺细胞悬液制备颈椎脱臼法处死小鼠↓暴露胸腔，分离出胸腺↓镊子夹住胸腺反复轻轻研磨↓单个细胞PBS洗２次，1000rpm，10min↓加入5%小牛血清PBS制备细胞悬液调节细胞浓度至3-4×107/ml三.结果判断①细胞膜穿孔的细胞呈蓝色，细胞膜完整的活细胞不着色。

②细胞毒性作用的判断标准如下：阴性反映( －) 死细胞占0-10% 可疑阳性反映( ±) 死细胞占11-20% 弱阳性反映( + ) 死细胞占21-50% 阳性反映( ++ ) 死细胞占51-80% 强阳性反映(+++ ) 死细胞占81-100%四.结果记录1.表格记录2.照片展示五.讨论①.第①组成阳性的原因：实验中加入抗原、抗体、补体、LC。

抗原抗体能形成抗原抗体免疫复合物，通过经典途径激活补体，形成攻膜复合物，从而致使细胞膜穿孔，细胞受损，台盼蓝进入细胞，染成蓝色，呈阳性反映。

说明CDC实验必需要有抗原、抗体、补体一路参与。

②.第②组成阴性的原因：实验中加入抗体、LC。

因为无抗原和补体，不能形成抗原抗体免疫复合物，也无补体，因此不能形成攻膜复合物，不能使细胞膜穿孔，细胞无损伤，台盼蓝无法进入细胞，不能被染成蓝色，呈阴性反映。

说明CDC实验必需要有补体的参与。

③.第③组呈阴性的原因：实验中加入LC和补体，因为无抗原抗体，所以没有抗原抗体免疫复合物的形成，补体不能被激活，不能形成攻膜复合物，细胞无受损，台盼蓝不能进入而不被染色，呈阴性反映。

说明CDC实验必需要有抗原、抗体的参与。

④.第④组呈阴性的原因：实验中只加入LC，既无抗原抗体免疫复合物的形成，也无补体，细胞无受损，台盼蓝不能进入而不被染色，呈阴性反映。

说明CDC实验必需要有抗原、抗体、补体的一路参与。

篇三：实验三补体溶血实验实验三补体溶血实验一、实验目的：了解溶血反映的原理，掌握溶血反映的大体操作方式二、实验原理：将绵羊红细胞做抗原注射家兔体内，经必然暗藏期，家兔血清中即出现特异性抗体，此种抗体称溶血素，它可以与绵羊红细胞结合，此时若加入补体，即可激活补体的经典途径，则呈现溶血现象。

三、实验材料一、溶血素（1：1000)、补体（1：30)、绵羊红细胞（1%)、生理盐水二、试管、吸管、试管架等四、实验方式一、按下表将试管4支排成一排，二、震荡混匀，37℃水浴30分钟。

五、实验结果实验管因发生溶血而变红色透明，其余管为红细胞悬液。

六、注意事项一、取样品的吸管不可混用；加样力求准确；二、SRBC吹匀后再加；3、补体稳定性差：T、pH、持续吹打等都使活性下降，所以置于冰浴中，历时再取；加入补体后轻轻吹打。