拟南芥种植方法
This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
培养基上点种子:
1.种子处理
1.1 种子消毒处理
在培养基中点样前,必须对种子进行消毒,防止感菌,具体方法为:先将种子倒在干净的纸上,挑去大的杂质,再将种子倒入EP管中,加入1mL70%酒精,振荡10min,将种子放在超净台中吹干。
1.2 点样
将消毒处理后的种子,可以利用牙签点到培养基上,每次仅点一粒种子,根据培养皿的大小,确定一个里面能够点多少个种子,每个90mm培养皿上大约种30粒种子,防止植株长大后影响根与子叶的发育。
1.3 春化
种子点样完毕后,将培养基密封,置于4℃冰箱里放置72h后,放回温室。
土培法:
1.种种子前,要将营养土用自来水混匀后,121℃灭菌30min,待土冷却后,装入种植拟南芥的方盒中,再将方盒放入红色托盘中。
2.将要点的种子平铺在称量纸上,用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记,以免遗种某个盒子。
(每个小盒子种5粒种子,每个大方盒子种9粒种子)
3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室,并用一个干净的托盘盖在上面,大约两天后
就可以打开上面的托盘,待植物长出4片叶子时,可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。
4.植株生长条件的控制
幼苗移植后将花盆置于温室内,保证温室温度恒定在22℃,空气湿度70—80%,光照强度100—150μmol/m2/s,每天浇两次纯净水,上午9点左右一次,下午5点左右一次;一周浇一次营养液(1平匙溶于1L水中),营养液要灌在盆底。
浇水注意事项:
1)水不可以浇的过多或过少,用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿;
2)水要浇均匀,托盘四个角的方向如果喷壶喷不到,可以用挤瓶均匀地喷一些水;
3)用喷壶浇水时,喷壶的水柱不可以太大,以免把植物连根拔起;
4)当植株出现花芽时,一定要保证水分的供应,促进果实的发育。
当植株结有豆荚时,可以适当的减少供水量,每两三天浇一次水便可,以利于种子的成熟。
开花后的植物不能再用喷壶浇水,要从盆底灌水,但不可以一次性灌太多水;
5)在盆底灌水后,待植物吸收完水后,可以将盆底多余的水分倒出来;
6)拟南芥受到胁迫判断标准:叶柄发紫,叶片发黄,开花期提前等;
7)如果做生理实验,植物一旦受到胁迫,需要把植物丢弃,重新种植,以免实验数据不准确。
注:温室202光照时间:9:00—19:00为短日照,有利于营养生长
温室203光照时间:6:00—22:00为长日照,有利于生殖生长
5.种子的收集和保存
6.拟南芥种子处在长角果中,当逐渐成熟时,长角果由绿变黄,最后成褐色。
当长角果变黄时,可以开始单个采集长角果,但此时种子中含有较多的生长抑制剂。
因而,当长角果变褐时及时采集,可得到成熟又易发芽的种子。
收获的种子应立即脱粒、清洁、干燥。
种子的收集:在桌面上铺几张干净的纸,戴上手套,将要收种的植物的花序用手将种子搓揉到纸上,再将纸上的大的杂质挑去后,将种子装到信封中,密封后将装有种子的信封置于干燥环境下,在室温条件下放置 2-3 周便可进行储藏。
种子的贮存可根据贮存的目的不同,分为短期、中期、长期贮藏。
一般短、中期贮藏是将种子贮存在4℃,而长期贮藏是保持在-20℃温度下。
当取用长期贮藏的种子前,先将贮存种子的容器预热到室温,或者将其置于37℃水浴 10min,以尽量使冰害降至最低。