3.在涂片上加2～3滴孔雀石绿染色液，然后在酒精灯上缓 缓加热（注意不能使染色液沸腾），必要时可再滴加少许 染色液。加热时间从冒蒸汽时开始计算2～3分钟。
4.倾掉染色液。等待玻片冷却后，用水冲洗至无染色液为止。
５.用番红复染１～２分钟，水洗至无染色液，用吸水纸除去 残留水分。
６.用油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
微生物学实验
实验四 细菌的芽孢染色
实验目的 1. 了解细菌的芽孢染色原理。 2. 掌握细菌的芽孢染色方法。
实验原理 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理， 用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区分。 芽孢壁厚，透性低、着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱 性染料如孔雀石绿在加热条件下进行染色时，弱碱性染料不仅可以 进入菌体，而且也可以进入芽孢。 进入菌体的染料通过水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。 用复染液（番红）染色，菌体和芽孢因呈现不同的颜色而易于 区别。
实验器材 （一） 显微镜，香柏油，二甲苯，载玻片，镊子，酒精灯，滴管，烧杯， 接种环，5%孔雀石绿染色液，番红染色液，吸水纸。 （二） 苏云金芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌
实验步骤
1. 取干净载玻片，加一滴单蒸水，然后用接种环挑取适量 苏云金芽孢杆菌涂片。
2. 将玻片反复在酒精灯上方通过几次（用手指触摸涂片反面， 以不汤手为宜），对标本进行干燥、固定。
蜡状芽孢杆菌

芽孢染色
注意事项
１.供芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢 仍保留在菌体上为宜。 ２.染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干涸。
实验思考
１.用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？为什么？ ２.芽孢染色为什么要加热?为什么芽孢和菌体能染成不同的颜色?
实验作业
１.绘出苏云金芽孢杆菌的菌体及芽孢形态，芽孢的着生位置。 2.如果土壤分离的细菌有芽孢,请绘出土壤分离细菌的菌体及 芽孢形态，芽孢的着生位置。