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芽孢染色法

0.1Schaeffer-Fulton氏染色法
5.20.1.1试剂:
5.20.1.1.1 5%孔雀绿水溶液:
孔雀绿5g
蒸馏水100ml
5.20.1.1.2番红水溶液:
番红0.5g
蒸馏水100ml
5.20.1.2操作方法:
5.20.1.2.1制片、染色
将涂片在火焰上固定,滴加孔雀石绿染液,用木夹夹住载玻片一端,在微火上加热至染料冒蒸汽并开始计时,维持5min,(注意:加热过程中要及时补充染液,切勿让涂片干涸)。
5.20.2.1制备菌悬液:
加1~2滴水于小试管中,用接种环挑取2~3环菌苔于试管中,搅拌均匀,制成浓的菌悬液。(所用菌种应掌握菌龄,以大部分细菌已形成芽孢囊为宜;取菌不宜太少)
5.20.2.2染色:
加孔雀绿染液2-3滴于小试管中,并使其与菌液混合均匀,然后将试管置于沸水浴的烧杯中,加热染色15-20分钟。
5.20.1.2.2水洗:
待玻片冷却后,用缓流自来水冲洗,直至流出的水为无色。(注意:勿用瀑水对着菌膜冲洗,以免细菌被水冲掉。)
5.20.1.2.3复染:
用番红染液复染2分钟
5.20.1.2.4水洗:
用缓流水洗后,吸干。
5.20.1.2.5镜检:
干后用油镜观察。芽孢呈绿色,芽孢囊及营养体为红色。
5.20.2改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
5.20.2.3涂片固定
用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上,涂成薄膜,然后将涂片通过火焰3次温热固定。
5.20.2.4脱色
水洗,直至流出的水无绿色为止
5.20.2.5复染
用番红染液染色2-3分钟,倾去染液并用滤纸洗干残液(不水洗)
5.20.2.6镜检
干燥后用油镜观察。芽孢呈绿色,芽孢囊及营养体为红色。
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