从土壤中分离分解纤维素的微生物
实验目的
1、利用特定的选择培养基和鉴定培养基从土壤中分离分解纤维素的微生物；
2、掌握刚果红染色的机理和操作。

实验原理
1、以纤维素喂唯一碳源的选择培养基能选择分离分解纤维素的微生物；
2、刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，而不与水解后的纤维二塘和葡萄糖发生这种反应。

实验仪器与用具
除实验五中用到的外，还需要恒温振荡培养箱
实验材料和试剂
取自湿地或原生林地的土样（大于20g）
羧甲基纤维素钠，酵母粉，磷酸二氢钾，蛋白胨，琼脂粉，氯化钠，刚果红，硝酸钠，硫酸亚铁，硫酸镁，磷酸氢二钠，纤维素粉，蔗糖（也可以用廉价的秸秆磨成粉末代替纤维素粉）
实验步骤
将称量好的0.1g蔗糖，0.002g硫酸亚铁，0.1g硫酸镁，0.2g磷酸氢二钠，0.2g硝酸钠，2g纤维素粉（秸秆粉）倒入500ml锥形瓶内，再加入200ml蒸馏水，给锥形瓶封口，充分振荡摇匀，得选择培养基，备用。

讲称量好的1.5g羧甲基纤维素钠，0.2g蛋白胨，0.1g酵母粉，0.25g 氯化钠，0.2g磷酸二氢钾，0.1g硫酸镁，4g琼脂粉加入另一个500ml 锥形瓶内，再加入200ml蒸馏水，给锥形瓶封口，充分振荡摇匀，得鉴定培养基，备用。

用5ml微量可调移液器向编号为1--5号的试管内分别加入9ml蒸馏水，塞上棉塞，备用。

讲配制好的选择培养基，鉴定培养基，5支装有蒸馏水的试管，包好的培养皿（最少9个），枪头放入灭菌锅内在121度下灭菌20min。

灭菌后，取出灭菌锅内物品，放入超净台内，用酒精棉球擦拭超净台面和实验者的双手，点燃酒精灯，在酒精灯火焰附近将称量好的20g 土样加入到选择培养基中，给锥形瓶封口，充分振荡摇匀。

将选择培养基放入恒温振荡培养箱内培养48h（震动培养箱转速为200r/min，控制温度为30度）。

等鉴定培养基冷却到不烫手时，在超净台内酒精灯火焰附近往每个培养皿内倒入20ml左右鉴定培养基，在超净台面轻轻摇匀，熄灭酒精灯，等培养基凝固后，将培养基平板倒置于超净台上。

48h后从恒温振荡培养箱中取出选择培养基，置于超净台上点燃酒精灯，再用1ml微量可调移液器移取1ml选择培养基的菌液到1号试管内，得到稀释10-1的稀释液，并用此方法依次稀释10倍，在5号试管内得到10-5的菌液稀释液，再用1ml微量可调移液器移取3号试管中的菌液，滴加2滴到平板上，用涂布器在平板上均匀涂布（注意
涂布器要灼烧一下），依照此方法同样将4号5号试管内的菌液涂布到培养皿中，不同菌液每个涂2--3个平板，将涂布好的平板倒置放入恒温培养箱内，30度培养1--2d,1-2d后取出恒温培养箱内的平板。

用100ml容量瓶配制1mol/L氯化钠溶液和1mg/ml的刚果红溶液，（注意刚果红溶液要现配现用）。

解开培养好的培养皿的上盖，滴入2滴管左右的刚果红溶液，轻轻摇晃平板，使溶液均匀涂在培养基上，盖上平板盖染色10min，染色后倒去刚果红溶液，向平板中加入2滴管左右氯化钠溶液，轻轻摇晃平板，使溶液均匀涂在培养基上，盖上平板盖，浸泡15min，15min后倒去氯化钠溶液，这时可以从培养基上长了菌落的周围看到明显的透明菌圈。