人参与西洋参皂苷类成分的比较研究
【摘要】目的：研究人参和西洋参中人参皂苷含量的差异性。
方法：采用高效液相法测定人参与西洋参中的各单体皂苷含量。
结果：西洋参中人参总皂苷大约是人参中的2倍以上；西洋参中人参皂苷rb1含量远高于人参中rb1的含量，人参皂苷re含量是人参中re 的4.8倍，人参皂苷rd含量是人参中rd的2倍。
而人参中人参皂苷rg1含量是西洋参中rg1的2.4倍，人参皂苷rf、rg2、rb2的含量明显高于西洋参中相应单体皂苷的含量，而人参单体皂苷rc、rb3在人参和西洋参中的含量相差不大。
结论：人参与西洋参的总皂苷和各单体皂苷的含量差异性较大，期望结合人参单体皂苷的药理活性，更合理地指导临床应用。
【关键词】人参；西洋参；人参单体皂苷；hplc法
人参(panax ginseng c.a.mey.)和西洋参(panax quinquefolius l.)均为五加科人参属植物，具有大补元气、补脾益肺、生津、安神益智的功效[1]。
人参和西洋参均为同科同属不同种植物的根，而且主要活性成均分为人参皂苷类物质，但两者的皂苷类成分存在差异性，致使人参和西洋参的药效也不相同。
陈英杰等[2]研究表明人参的特征性成分为人参皂苷rf，而西洋参的特征性成分为拟人参皂苷f11。
西洋参中人参单体皂苷rb1为首，且含量远高于人参，致使西洋参具有明显的抑制中枢神经的作用[3]。
人参中人参单体皂苷rb2、re、rg1的含量明显高于西洋参中相应的单体皂苷，研究证明其与人参具有兴奋中枢神经，强壮筋
骨及抗疲劳的作用相关[4]。
人参和西洋参现广泛应用于临床，本实验对两者的单体皂苷类成分做进一步深入的比较研究，期望作为人参和西洋参鉴别的一项重要手段，同时为人参和西洋参的活性成分和药理作用的研究提供理论依据，更合理地指导临床用药。
1实验材料、仪器及试剂
1.1实验材料：人参( panax ginseng c. a. mey )和西洋参（panax quinquefolius l.）的3批样品均为4年生园参，于2009年10月采集，经吉林农业大学中药材学院张连学教授鉴定均为人参和西洋参正品，样品洗净烘干至恒重，并粉碎过60目筛，备用。
1.2主要实验仪器及试剂：re-52aa旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；tg628a分析电子天平(上海皖衡电子仪器有限公司)；
kq-250b超声波清洗器(昆山市超声仪有限公司）；lc-2010aht高效液相色谱仪(日本岛津公司)；人参皂苷rb1、rb2、rb3、re、rg1、rg2、rf、rc、rd对照品（中国药品生物制品检定所），甲醇、乙醇、正丁醇、三氯甲烷、香草醛、高氯酸和浓硫酸等均为分析纯，色谱甲醇、色谱乙腈为色谱纯。
2 实验方法
2.1对照品溶液的制备：将人参皂苷对照品rb1、rb2、rb3、rg1、rg2、rc、rd、re、rf于60℃干燥至恒重，精密称定各单体皂苷分别为10.00mg，置10ml容量瓶中，加适量色谱甲醇，超声溶解，冷却后定容，配制成1.0mg/ml的人参皂苷对照品贮备液。
2.2 标准曲线的制作：精密量取上述混合对照品溶液0.05、0.1、
0.2、0.5、1.0ml，分别置1ml容量瓶中，加色谱甲醇定容至刻度，摇匀，即得系列浓度为0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml的混合标准品溶液。
分别取上述标准品溶液0.5ml过0.45μm滤膜，取续滤液，备用。
进样3次，每次20μl，记录色谱图。
2.3供试品溶液的制备：取人参样品3份，每份各lg，精密称定，置于索式提取器中，用三氯甲烷加热回流3h，弃去氯仿。
挥干药包，甲醇回流提取10h，回收甲醇。
残渣用水溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，将其蒸干得总皂苷，用色谱甲醇溶解，定容至10ml容量瓶中，摇匀，取溶液1 ml过0.45μm滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。
进样3次，每次20μl，得到色谱图。
2.4高效液相色谱分析条件：色谱柱nucleosilc18(4.6mm×
150mm,5μm)；柱温30℃；流速1.0ml/ min；检测波长203nm；进样量20μl；分析时间65min。
流动相为乙腈(a)和水(b)，梯度洗脱。
b相含量随时间的变化：18%—22%(0-24min)，22%—
26%(24-26min)，26—32%(26-30min)，32—33.5%(30-50min)，33.5%—38%(50-65min)。
2.5精密度实验：精密量取人参皂苷对照品溶液0.1ml，置1ml
容量瓶中，加色谱甲醇溶液定容至刻度，摇匀，即得系列浓度为0.1mg/ml的人参皂苷对照品溶液，重复进样6次，人参各单体皂苷rb1、rb2、rb3、rc、rd、re、rf、rg1、rg2峰面积的rsd%分别为0.93%、0.77%、1.45%、1.27%、1.32%、1.14%、0.72%、1.08%、1.04%，结果rsd%均小于2.0%，表明精密度良好。
2.6稳定性实验：精密称取人参供试品1.0mg，并制备溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h进样，人参各单体皂苷rb1、rb2、rb3、rc、rd、re、rf、rg1、rg2峰面积的rsd%分别为1.23%、1.578%、1.48%、0.93%、1.03%、1.26%、1.45%、1.64%、1.31%，结果表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.7重复性实验：精密称取人参样品5份，每份各1g，制备供试品溶液。
人参中各皂苷rb1、rb2、rb3、rc、rd、re、rf、rg1、rg2峰面积的rsd%(n=5)分别为0.23%、1.63%、1.50%、1.24%、0.63%、0.98%、1.45%、1.82%、1.69%，结果表明方法的重复性良好。
2.8加样回收率实验：精密称取人参样品3份，每份各1.0g，分别加入1.0mg/ml的人参皂苷对照品贮备液1ml，置室温挥干，并制备样品溶液。
人参各单体皂苷rb1、rb2、rb3、rc、rd、re、rf、rg1、rg2的回收率分别为1.21%、1.09%、0.54%、0.95%、0.79%、1.08%、1.05%、1.07%、1.11%，结果表明人参各单体皂苷回收率良好。
3结果与分析
选用上述流动相进行梯度洗脱，九种人参单体皂苷按出峰时间顺序为rg1、re、rf、rg2、rb1、rc、rb2、rb3、rd，人参与西洋参的色谱图见图1和图2。
3.1人参各单体皂苷回归方程：根据标准曲线测定结果，得到人
参各单体皂苷回归方程。
rg1 y=0.00000015156x+0.0041383（r=0.9999） re y=0.00000015116x-0.0027521（r=0.9998）rf
y=0.00000013589x-0.0085187（r=0.9992） rb1
y=0.00000011465x-0.0017978（r=0.9997）rg2
y=0.00000019365x-0.0047921（r=0.9999） rc
y=0.00000018233x+0.0035113（r=0.9993）rb2
y=0.00000017150x+0.0017069（r=0.9996）rb3
y=0.00000016599x+0.0010782（r=0.9998）rd
y=0.00000015003x-0.0027963（r=0.9995）。