Abstrac t O bjective: T o op tim ize the extraction m ethod and im prove the extraction ra tio of g insenosides from Panax quinquefoli um M ethods: Four d ifferent ex traction m ethods, including hea t reflux ex traction m ethod, ultrason ic extraction me thod, m ulti stag e counte rcurrent extraction m ethod and ultrason ic assisted mu lti stage countercurrent ex traction m ethod w ere com pared according to the ex traction ra tio of to ta l sapon ins and seven g insenosides analyzed by HPLC includ ing R b1, Rb2, R c, R d, R e, Rg1, Rg2 R esu lts: T he u l trasonic assisted mu lti stage countercurrent ex traction m ethod w as the best m ethod and had the advantages of higher e fficiency, low er ex traction tem pera ture and less so lvent consum ption Conclusion: T he u ltrasonic ass isted m ulti stage countercurrent ex traction me thod is hoped to be w idely used in the pharm aceutical industry
关键词 人参皂苷 ; 超声波提取; 组罐式超声波提取 中图分类号: R 284 2 文献标识码: A 文章编 号: 1001 4454( 2008) 12 1896 03
Com parison Resarch on D ifferen t Extraction M ethods of G insenosides from Panax qu inquefolium
L I Jian m ing, CHEN Y un, ZHANG L i juan, Q IAN Y u ( Schoo l of Chem istry and Chem ical Eng ineer ing /G uangdong K ey L ab of P roduct T echno logy o fG reen Chem istry, South Ch ina U nivers i ty of T echnology, G uangzhou 510640, China)
摘要 目的: 选择更好的西洋参提取方法, 提高人参皂苷 的提取率。方 法: 以人 参总皂苷、人参皂 苷 R b1、R b2、 R c、Rd、R e、R g1、R g2 等 7种主要单体皂 苷收率为指标, 用 高效液相 色谱法 进行含 量测定, 比较 热回流 提取、超声波 提取、罐组式逆流提取、组罐式超声波提取 四种方法各自 的优劣。 结果: 组罐式 超声波 提取是 最佳的 提取方 法, 它 可以在保证提取效率的 前提下, 减少溶剂的用量, 降低提取温度。结论: 组罐式超 声波提取法 可望广泛 地应用在制 药工业上。
2 2 4 项下处理方法制成供试品溶液, 按 2 3 1 项下的色谱条件, 分别在 0、1、4、8、12、24、36、48 h 进样测定, 测得各色谱峰的峰面积和保留时间, 7种 人参皂苷 R b1、R b2、R c、R d、R e、R g1、R g2 峰面积 的 RSD 值 分 别 为: 0 57% 、1 38% 、1 51% 、0 79% 、 1 63% 、1 61% 、0 69% , 7 种组分保 留时间的 RSD 值为 0 43% ~ 0 86% , 说明供试品溶液在 48 h内化 学性质稳定。
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Rc
Y = 2 692 107X - 692
0 9997
R b2
Y = 3 864 107X - 1127
0 9998
RdY = 3 958 107 Nhomakorabea - 31016
0 9997
2 4 方法学考察 2 4 1 精密度实验: 精密吸取上述对照品溶液, 按
2 3 1 项下的色谱条件, 重复进样 5次, 测得各色 谱峰的峰面积和保留时间, 7种人参皂苷 R b1、R b2、 R c、R d、R e、R g1、R g2 峰 面 积 的 R SD 值 分 别 为 0 25% 、0 32% 、0 36% 、0 21% 、0 34% 、0 55% 、 0 50% 、0 30% , 7 种 组 分 保 留 时 间 的 RSD 为 0 20% ~ 0 59% , 表明仪器精密度良好。 2 4 2 稳定性实验: 精密称取西洋参粉末 1份, 按
基金项目: 广东省绿色化学产品技术重点实验室开放基金 ( GC200706) 作者简介: 李建明, 男, 在读硕士, 研究方向为中药有效成分的提取分离; E m ai:l l i jianm ing@ m ai l scu t edu cn。 * 通讯作者: 陈赟, 男, 讲师; E m ai:l yunchen@ scut edu cn。
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Journa l o f Ch inese M ed icina lM a teria ls 第 31卷第 12期 2008年 12月
西洋参中皂苷类成分提取方法对比
李建明, 陈 赟* , 章莉娟, 钱 宇 (华南理工大学化学与化工学院 /绿色化学产品技术重点实验室, 广东广州 510640)
罐式超声波提取是一种更为新颖节能的中药提取方 法。 1 材料、试剂与仪器 1 1 材料与试剂 西洋参主根, 吉林产, 购自广州 清平药材市场, 并经山东中医药大学李凌军副教授 鉴定为正品; 人参皂苷标准品 R b1、R b2、R c、R d、R e、 R g1、R g2购于浙江美迪康医药贸易服务 部 ( 供含量 测定用 ); 无水乙醇、磷酸为分析纯; 乙腈、甲醇为色 谱纯。 1 2 仪器 Varian 210 型高效液相色 谱仪 ( 美国 VARIAN ) ; KQ 600KDE型高功率数控超声波清洗器 ( 昆山超声仪器有限公司 ); 旋转蒸发 仪 ( 瑞士 BU CH I); 电子天平 ( 上海精密科学仪器有限公司 ) ; 高 速万能粉碎机 ( 天津泰斯 特仪器有限公 司 ) ; HH 4 数显恒温水浴锅 (常州澳华仪器有限公司 ) ; 循环水 真空泵 (巩义英峪予华仪器厂 ) 。 2 方法与结果
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2 1 样品处理 样品 ( 西洋参根 ) 粉碎后过 60目 筛, 置 60 真空干燥箱内干燥 24 h至恒重。 2 2 供试品溶液的制备 2 2 1 热回流提取: 称取 10 00 g 西洋参粉末于 250 m l锥形瓶内, 在 90 水浴条件下, 用 70% 的乙 醇溶液提取 3次, 每次 30 m in, 每次溶剂用量为 60 m l。合并 3次提取液, 待测。 2 2 2 超声波提取: 称取 10 00 g 西洋参粉末于 250 m l锥形瓶内, 在 60 条件下, 用 70% 的乙醇溶 液在超声波清洗器中提取 3次, 每次 30 m in, 每次溶 剂用量为 60 m 。l 合并 3次提取液, 待测。 2 2 3 罐组式逆流提取: 罐组式逆流提取详细操 作方式参考文献 4, 5 。采用三效罐组 式逆流提取, 每罐装药材 10 00 g, 用 70% 的乙醇溶液在 90 水 浴中连续逆流提取。每次提取 30 m in, 每次新鲜溶 剂用量为 60 m 。l 2 2 4 组罐式超声波提取: 组罐式超声波提取采 用类似组罐式逆流提取装置, 是将各提取罐置于超 声环境下。具体操作 方式则与罐组 式逆流提取相 同。采用 3 次 组 罐 式 超 声 波 提 取, 每 罐 装 药 材 10 00 g, 用 70% 的乙醇溶液在 60 超声波条件下 提取。超声波的功率为 600W, 频率 40KH z, 每次的 提取时间为 30 m in, 每次新鲜溶剂用量为 60 m 。l 2 3 含量测定 2 3 1 色谱条 件: 色谱 柱: V arian C18 ( 4 6 mm 250 mm, 5 m ); 柱温: 室温; 检测波长: 203 nm; 进样 量: 20 :l 流速: 1 1 m l /m in; 流动相为 0 05% 磷酸 水溶液和乙腈组成; 梯度洗脱程序为: 0~ 40 m in, 乙 腈的体积分数为 20% ; 40~ 70 m in, 乙腈的体积分数 为 20% ~ 35% ; 70 ~ 85 m in, 乙腈 的 体 积 分 数为 35% ~ 45% ; 85~ 90 m in, 乙腈的体积分数为 45% ~ 20% , 所有组份均在 90 m in内出完。 2 3 2 标准 曲线的制备: 分别称取 人参皂苷 Rb1 4 9 m g、R b23 7 m g、R c 4 8 m g、R d 4 9 m g、R e 5 6 m g、R g15 4 m g、R g2 5 2 m g, 移至 5 m l的容量瓶 内, 加 2 m l甲醇后超声振荡 2 m in, 定容刻度。分别 称取对照 品的储备 液 0 08、0 16、0 32、0 64、1 28 m l至 2 m l容量瓶, 定容至刻度, 摇匀, 得到系列浓度 的对照品混合液。分别进样 3 针, 每次 20 ,l 记录 色谱图。图 1是上述色谱条件下测得的某个混合标 准溶液的 H PLC 图谱。以对照品的浓度 ( mg /m l) 为 横坐标 ( X ), 对照品的峰面积为纵坐标 ( Y ), 进行线 性回归计算, 得到回归方程及相应的相关系数见表 1。