金标免疫检测试纸条的结构

主体的膜反应体系由以下部分组成：
1： 高蛋白亲和性的高分子纤维素膜（NC膜），为反应膜用来作为 系统反应的载体和显示反应结果。 2：选用有较强吸水能力的玻璃纤维，经特殊处理后，为反应系统提 供适合的反应条件，并帮助吸水。 3：吸附力较强的玻璃纤维，作为金标记物的固相载体。 4：吸收垫，吸水，牵引反应物的运动。 5：塑料基板，作为反应体系的支撑物。
检测方法对比
检测方法 样品 处理 是否 需标 准品 测 量 耗时 优点 缺陷
确认方法
液相色谱质谱联用
最复 杂
是
定 量
24小 时
仪器价格昂贵且方 法操作复杂，存在 结果准确，检 检测成本高、检测 测精度高，灵 周期长、对检测人 敏度高 员的技术要求较高， 需要较复杂的样品 处理过程 操作简单，使 用方便 具有良好的特 异性，操作简 单方便，一步 测试，用时只 需5分钟 适于实验室检测
5、中毒事件
在互联网上用“瘦肉精中毒”搜索，可以查到有6710 项的相关报道。世界上最早的“瘦肉精”中毒事件于 1990年3月在西班牙发生。我国则于1998年5月在香港 最早出现。 1、2003年8月22日，广东信宜市发生530人瘦肉精集体中 毒事件 2、2002年2月浙江省平湖市170余名群众发生瘦肉精中毒 3、2001年11月2日，北京发生14人瘦肉精中毒 4、 2001年11月，广东河源市发生484人食用含瘦肉精的 猪肉后集体中毒的事件，闻名全国 5、1999年10月，浙江嘉兴市发生57人“瘦肉精”（含盐 酸克伦特罗)集体中毒事件 6、1998年，广东高明市发现有7例因喝猪肺汤致人中毒 事件
4-氨基-α-（叔丁胺甲基）-3，5-二氯苯甲醇盐酸盐
1、药理作用
克伦特罗又名双氯醇胺，氨哮素，克喘素，是 一种人工合成的β2-肾上腺素受体激动剂（β2激动剂）。白色或类白色的结晶粉末，无臭、 味苦，熔点161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙 酮，不溶于乙醚。 具有强效松弛支气管平滑肌，扩张支气管的作 用，常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病。 当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时，又具有 能量重分配作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉 积减少，因此将其俗称为“瘦肉精”。
118 ng/g
与血浆 的比例
3~15倍 20~90倍 107倍
半衰期
第一半衰期：10h 第二半衰期：64.8h（2.5d）
用药剂量：16μg/(kg.d)
持续时间：20d
停药与残留：
停药时间 0d 15 d 35 d
肝脏残留浓度 73.8ng/g 2.4ng/g 0.7ng/g
样品中含有少量的克伦特罗时：如5ppb以下
T线
克伦特罗分子 样品中克伦特罗 分子较少时，和 交联在金颗粒上 的克伦特罗互相 竞争，有少量的 金颗粒吸附在纤 维素膜上，行成 颜色较浅的T线。 T线
因此，随着样品中克伦特罗浓度由高到低，试纸上T线上 的颜色由浅到深： >5ppb
1ppb
0.5ppb 0ppb
二、金标免疫试剂条原理介绍
两种金标检测试剂：
1、金标检测试剂条 2、金标检测卡
利用了免疫层析的技术 特点：
1：检测速度快，5－15分钟就 可知道结果。 2：不需要任何仪器设备； 3：操作简便； 4：灵敏度高，可达到ng级水 平
1、金标检测试剂的历史
★ 1971年由Faulk 和Taytor发明，目前在 医学方面得到了日益广泛的应用。 ★ 90年代传入我国，已经用于检测 HBsAg （乙肝）、HCG（早孕） 、HIV（艾滋病）、 梅毒等疾病，具有简单、快速、准确和无污 染等优点，我国已经有几十家药厂生产医学 检验用的金标试纸。 ★ 目前，该项技术已开始应用于药物残留 和疫病等的检测。
日粮中添加2mg/kg CL停药后猪尿液中CL浓度变化 用药剂量 停药时间（d） CL浓度（ng/mL） 0.5 2mg/kg拌料 181.15±7.39 1 85.45±5.26 2 32.11±2.44 4 9.9±1.23 8 3.19±0.27 16 1.15±0.33 22 0.95±0.28 25 0.48±0.21


禁忌症
心脏病、糖尿病、高血压、青光眼、甲亢
中毒剂量
人医用药量：
0.02 ~ 0.5 μg/kg 中毒一般含量： 肝脏 100 ~ 500 μg/kg 中毒极端含量： 肝脏 19 ~ 5395 μg/kg
4、代谢和残留状况
样品 含量 尿液 47±37 ng/ml 40倍 肌肉 6.1 ng/g 肝脏 39 ng/g 眼球
2、金标检测技术的基本原理

金标免疫检测试纸条系统使用一种特殊 的多孔膜（NC膜）作为固相载体。该膜 具有很强的蛋白吸附功能，抗体抗原吸 附于NC膜并经干燥处理后即作为固相， 可与液相中的相应标记了胶体金的抗原 抗体快速结合。
在湿润状态下，液相中的抗原抗体免疫金可因 “灯芯引流现象”作快速定向泳动并与固相另一抗原 决定簇单抗结合，形成特异的金标记抗体－抗原－抗 体红色沉积线，表现出抗原抗体的特征反应。
农业部1025号公告-6-2008动物性食品中莱克多 巴胺残留检测 酶联免疫吸附法 NY/T1460-2007饲料中盐酸克仑特罗的测定 酶 联免疫吸附法 农业部1025号公告-18-2008动物源食品中β-受 体激动剂残留检测 液相色谱-串联质谱法 农业部1063号公告-6-2008饲料中13种β-受体激 动剂的检测 液相色谱-串联质谱法

在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为 一种生长促进剂添加到动物饲料中，用以 改善胴体的品质；

同时也造成动物性食品中盐酸克伦特罗 （瘦肉精）的残留。 当人们食用含有盐酸克伦特罗（瘦肉精） 残留的产品后会产生一定的中毒症状。
பைடு நூலகம்
3、克伦特罗的毒性

心血管系统：
心悸、心慌、头晕头痛等临床症状 神经系统 恶心、呕吐、肌肉疼痛、肌肉颤抖、兴奋、不自主 地颤抖、运动障碍
2、克伦特罗（瘦肉精）的同化作用
β-激动剂对畜禽生长作用的影响
动物种类
牛 鸡 猪 绵羊 体增重 （%） ＋10 ＋2 ＋4 ＋15 采食量 （%） －5 — －5 ＋2 肉料比 （%） ＋15 ＋2 ＋5 ＋15 肌肉增加 （%） ＋10 ＋2 ≥＋18 ＋25 脂肪减少 （%） －30 －7 －20 －25
金标检测技术的基本原理
氯金酸(HAuCl4)在还原剂 （柠檬酸）作用下，可使金离子 还原成金原子，并聚合成一定大 小的金颗粒，形成一种胶体溶液。 把这种溶液称为胶体金。
胶体金具有很大的表面积， 可将抗原、抗体等蛋白质吸附到 胶体金颗粒表面。
吸附的机理是胶体金颗粒表面
带负电荷，与蛋白质的正电荷基团
金颗粒上的克伦特罗 和纤维素膜上的抗体 结合，金颗粒聚集在 一起，形成红色的条 带，结果为阴性。
T线
样品中有高浓度的克伦特罗时：
由于样品中克伦特 罗的分子数量很多， 大大多于金颗粒上 的克伦特罗，抗体 上都结合了样品中 的克伦特罗，而金 颗粒不能结合到抗 体上，造成金颗粒 穿过抗体条带到滤 纸上，纤维素膜上 为白色。
--克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的检测
--农业部畜禽产品质量安全监督检验测试中心（石家庄） 李志平
饲料中添加β-兴奋剂的原因
β-兴奋剂的危害
中国政府监控情况
β-兴奋剂的使用现状
β-兴奋剂检测方法
国标方法：仪器分析方法（液相串联质谱\气质联用\液相 色谱方法等） 兽药残留酶联免疫(ELISA方法)检测试剂盒 胶体金快速检测卡
在医学上使用的各种金标试纸条，如艾滋病、乙 肝、海洛因等检测试纸条，要求非常严格。纤维素膜
上除喷上抗体形成T线（Test）外，还喷有形成C线
（Control）的抗体。 C线应在检测过程中的任何情况下都应该出现， 否则就证明试纸条在运输、保存等过程中发生了意外
情况，如高温、潮湿等，导致试剂条失效。这样就有
金标试剂条示意图
样品吸收垫 玻纤
纤维素膜
滤纸
塑料底板
金颗粒上标记抗原
克伦特罗分子 BSA 金颗粒
在玻纤上喷抗原标记的金颗粒
标记抗原的金颗粒
玻纤
在纤维素膜上喷克伦特罗抗体
抗体
纤维素膜
试剂条组装
样品垫
被标记的 金颗粒
抗体
滤纸
克伦特罗金标试纸条的工作原理
加入样品
样品流动
样品中没有克伦特罗时：
因静电吸附而形成牢固的结合。

用还原法可以方便地把氯金酸制备成各种不 同大小直径的金颗粒、金颗粒的大小不同， 颜色也不同。
金溶胶颜色 蓝 紫 紫红 红 橙红 橙 吸收峰(nm) 220 240 535 525 522 518 直径(nm) 147 97.5 71.5 41 24.5 15
一般使用40 nm的金颗粒，因为灵敏度较高。

克伦特罗金标检测试剂条 的原理和使用
一、盐酸克伦特罗简介
二、金标免疫试剂条原理
三、金标快速检测试剂条检测操作步骤 四、注意事项
五、样品的提取方法
六、其它类金标速测试剂条简述
一、盐酸克伦特罗简介
何为“瘦肉精”？
Cl H 2N H 3C HN OH CH3 CH3
Cl
盐酸克伦特罗（Clenbuterol Hydrochloride ，CL）

β2-肾上腺素受体激动剂

β2-肾上腺素受体激动剂（β2-激动剂）包 括：克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、 特布他林、西马特罗、菲诺特罗、氯丙 那林、妥布特罗、喷布特罗、奇帕特罗、 西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布 特罗等十几种。我们目前监测的主要是 克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇（有 快速检测方法的）。
猪尿中CL的消除曲线
2.5
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