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二、分析方法验证 3、分析方法验证范围

1.采用新的检验方法； 2.检验方法需变更的；


3.采用《中华人民共和国药典》及其他法定标准未收载的
检验方法；

4.法规规定的其他需要验证的检验方法
二、分析方法验证

4、需验证的检验项目 1）鉴别试验 2）杂质的限度检查
3）杂质的定量测定
至少标示量（100% 溶液）的80 -120%
98.0 -102.0% (n=9，3个浓度，每个浓度三份样品） ≤2.0%(n ≥9，至少3个浓度，每个浓度测3次) 规定时间内变化≤2.0% 系统适用性实验通过
需验证项目
项目内容 准确度 精密度 专属性② 检测限 定量限 线性 范围 耐用性 鉴别 否 杂质测定 定量 是 限度 否 否 含量测定 是
5）精密度
6）检测限 7）定量限 8）耐用性 9）系统适用性
采用的技术
检测方法
确定具体方法拟订验证的内容
1）专属性

定义：是指在其他成份（如：杂质、降解产物、辅料等）
可能存在的情况下，采用的方法能正确测定出被测物的特
性；能反映该分析方法在有共存物时对供试物准确而不受 干扰的测定能力。

通常，鉴别试验、杂质检查、含量测定均应考察其专属性。 一种分析方法不太可能对某一特定的被分析物具有专属性 (完全辨别)，在此情况下，建议采用两种或两种以上的分 析方法以达到所需的辨别水平。
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1）专属性
含量测定目的是得到样品中被分析物的含量或效价的准确 结果。 对于色谱法和其他分离方法来说，应当用具有代表性的色
谱图来证明专属性，并在图上适当地标出每一种成分。色谱
法的分离度应符合要求。

1）专属性
已知杂质：对于主成分含量测定可在供试品中加入杂质
或辅料，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质和辅料的
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5）精密度
精密度系指在规定的测试条件下，同一均匀供试品，经多 次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、 标准偏差或相对标准偏差表示。
5）精密度
名称
重复性
定义
验证方法
在相同条件下，由一个 在规定的线性范ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ内至少测定9次(例如3 分析人员测定所得结果 种浓度／每种浓度3次)，或在100％的实 的精密度称为重复性。 验浓度下，至少测定6次。
重复性 中间精密度
否 否
是 否 否 否 否 是
是 是① 是
是③ 是 是 是 是
是 是① 是
否 否 是 是 是
否
是 是 否 否 否 是
注意：“否” 表示通常不需要做的项目： “是”表示通常需要做 的项目。 ①假如已做了重现性，就不需再做中间精密度； ②分析方法缺乏专属性，可以由其他分析方法来补充； ③视具体情况予以验证，有些情况下可能需要。
三、分析方法验证常见问题

样品的选择问题 供试品溶液制备考察不全面 对照品溶液浓度与供试品不匹配 标准曲线的制备 样品测定不在线性范围之内取样、范围 太小、单位等问题 色谱条件的选择 对照品溶液的制备 回收率测定问题 应详述理由并附相关图谱 对照品称量难以达到精密称定的要求 方法改变后应与原方法作比较
在同一个实验室，不同 时间由不同分析人员, 用不同设备测定结果之 间的精密度，称为中间 精密度。 应根据方法使用的环境而定，确定随机 事件对分析方法精密度的影响。 变动因素为：不同日期 不同分析人员 不同设备
中间 精密度
重现性
在不同实验室由不同分 析人员测定结果之间的 精密度
通过实验室之间的检测来评价； 如果方法需要标准化如收载到药典中的 方法，则应考虑重现性。这些资料不是 申请上市文档的三部分。 协作标定 能力验证 药品标准的实验 复核
人用药品注册技术要求 国际协调会（ICH） 《中国药典》2010年版
二、分析方法验证
1、方法验证的定义：是根据检测项目的要求，预先设置一定的 验证内容和验证标准要求，并通过设计合理的实验来验证所采用 的分析方法能否符合检测项目的要求。


2、分析方法验证的目的：
是判断采用的分析方法是科学、合理，是否能控制产品的内在质 量，证明分析方法适合相应检测要求。

如在六个空白样品中，分别加入已知浓度的样品（浓度范 围为含量测定浓度的80%-120%）
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4）准确度
加样回收:在已准确测定含量为P的样品中+已知量为A 的对照品或标准品测定，测定值为M。
4）准确度

方法 准确度应在规定范围内建立，至少用9个测定结果进行评 价。


例如：测定含量的准确度，按标示量的80%，100%和120%
配制三个浓度的溶液，每个浓度各配制3份供试品溶液， 进行测定。
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4）准确度
数据要求：
需报告已知加入量的回收率（%），或测定结果平均值与
真实值之差及其相对标准偏差。 一般推荐含量（HPLC、GC、UV）的回收率（平均值）要 求在98.0%-102.0%范围内。 杂质的定量测定的回收率（平均值）：限度＜0.5%，在 80%-120%范围内；0.5%≤限度＜5%，在90%-110%范围内；限 度≥5%，在95%-105%范围内。
3）范围
含量测定时，范围通常为测试浓度的80%-120%。
4）准确度
定义：系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近 的程度。一般用回收率(%)表示。 一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测 定的检测项目均需对准确度进行验证。
4）准确度
测定回收率R一般采用空白回收法和加样回收法。 空白回收：已知量为P的对照品。测定值为A。
测定和含量定量测定均需验证线性。
2）线性

试验方法 应在规定的测定范围内测定线性关系。 可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列


样品的方法进行测定，至少制备5个浓度的供试样品，每个
浓度各一份，每份供试样品检测3次，以测得的响应信号最 为被测被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，用最小二 乘法进行线性回归。
试样比较测定结果。 未知杂质：可以通过测定含有杂质或降解产物的试样， 与另一已验证的方法或药典方法比较结果。或进行破坏性试 验证明，在相对激烈的条件下：光热、酸碱、氧化、还原等， 比较破坏前后的结果的差异。
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2）线性
线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物浓度 直接呈正比关系的程度。 线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量

谢谢！
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5）精密度
系统重复性：相同条件下，同一分析人员对同一样品溶液多 次测试结果的接近程度。 同一均匀标准样品溶液，连续重复测定六次，计算各组分响
应值与平均值之间的相对标准偏差。
方法重复性：相同条件下，同一分析人员对同一个均匀样品 ，多次取样测定所得结果的接近程度。 同一样品，至少称取六份，再测定每一份样品含量，计算每 一次测定的含量与平均含量间的相对标准偏差。
分析方法的验证
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内容：

一、介绍
二、分析方法验证


三、常见问题
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一、介绍

方法分析：是为完成检验项目而设定和建立的测试方法，它
详细描述每一个分析试验所必须的步骤。

一般包括分析方法原理、仪器及仪器参数、试剂、供试品溶
液与对照品溶液等的制备、测定、计算公式及限度要求等。
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一、介绍 分析方法确认或验证相关指南

2.HPLC法中典型的变动因素： 流动相pH值变化的影响； 流动相组分变化的影响；



不同色谱柱(不同的批号和／或供应商)；
柱温； 流速。


8）耐用性--考察因素

3.GC法中典型的影响因素： 不同色谱柱(不同的批号和／或供应商)； 柱温



流速
固定相 不同类型的载体


8）耐用性--考察因素
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2）线性

一般配制方法： 在含量测定浓度的80%-120%均匀选择至少五个不同的浓度

点配制溶液各三份。
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2）线性
数据要求： 应列出回归方程、相关系数和线性图。 推荐接受标准：




相关系数R≥0.998
其截距不应明显地偏离零点。

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3）范围
范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法 适用的高低限浓度或量的区间。 范围通常与分析方法的测试结果相同的单位表达。涉及 到定量测定的检测项目均需对范围进行验证。
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6）检测限（LOD或DL)
检测限系指供试品中被测物能被检测出的最低量。 常用方法如下： 1.直观法 用已知浓度被测物的样品，试验出能被可靠地检测出的 最低浓度或量。用于非仪器分析法(目视法)，也可用于仪器 分析法。
6）检测限（LOD或DL)
2.信噪比法：仅适用于能显示基线噪音的分析方法。即把已知低浓度试样的测试信号与空白样品的测试信号进 行比较，计算出能被可靠地检测出的最小浓度。
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二、分析方法验证
6、验证接受标准（含量-HPLC,GC,UV）
验证内容 精密度/重复性 接受标准 RSD≤2.0%，n≥6
中间精密度
专属性 线性 --相关系数 --截距 --剩余标准差