43
抗Thy1肾炎
Thy-
造模机制
2
Thy1是鼠类胸腺细胞表面糖蛋白，也存在于
大鼠肾小球系膜细胞表面。利用大鼠胸腺细胞作抗
原免疫家兔，制备的兔抗大鼠Thy1抗血清（ATS）
可直接与系膜细胞表面抗原结合，固定补体形成膜
攻击复合物，使细胞溶解，继而引起残存的系膜细
胞增生，制备系膜增生性肾小球肾炎。
44
造模机制
抗Thy1肾炎
大鼠肾小球系膜细胞表面 与
大鼠胸腺细胞表面
具有相同的抗原
(糖蛋白)
大鼠胸 腺细胞
新西兰家兔，
收集家兔血清
大鼠
45
实验动物
雄性成年新西兰家兔； 体重150g左右雄性SD大鼠。
抗Thy1肾炎
46
抗Thy1肾炎
操作步骤
1. 制备大鼠胸腺细胞悬液 2. 兔抗大鼠Thy1.1抗血清（ATS）制备
第3d系膜细胞开始增生； 至第7d增生明显； 第4、5周系膜细胞增生的同时伴有系膜基
质增多，部分毛细血管襻呈分叶状。
50
模型特点
抗Thy1肾炎
1. 本模型与人类系膜增生性肾小球肾炎相似。
2. 单次注射ATS后肾脏病变常为可逆性的，反 复注射后出现明显肾小球硬化和慢性肾功 能衰竭。
51
系膜增生性肾小球肾炎 左：正常； 右：系膜细胞和基质增生， 电子致密物（D）沉积。
65
嘌呤霉素致肾病模型
[方法]-2 一次注射：
用体重280~300g雄性大鼠，静脉或腹 腔注射嘌呤霉素，剂量为130~150mg/kg体 重。10d左右出现蛋白尿。
66
嘌呤霉素致肾病模型
[方法]-3 一次注射：
用体重150~200g雄性SD大鼠，麻醉下行左侧颈 静脉插管，缓慢注射嘌呤霉素生理盐水溶液，剂量 为80mg/kg体重，5min内注完。蛋白尿于注射后3~5 天开始升高，9~11天达高峰，约14天开始下降，至 28天恢复正常。
抗肾小球基膜肾炎模型 月体形成）
相当人类肾炎的类型 增生性肾小球肾炎（新
Heymann肾炎模型
膜性肾小球肾炎 （膜性肾病）
阳离子化牛血清清蛋白肾炎模型 膜性肾病
血清病肾炎模型
链球菌感染后肾炎
抗胸腺细胞抗体肾炎
系膜增生性肾小球肾炎
第二节 肾病动物模型
63
一、嘌呤霉素致大鼠肾病模型
嘌呤霉素致肾病模型
7
与肾小球肾炎发病有关的抗原
肾小球性抗原 (基膜、Heymann、Thy1) 内源性
非肾小球性抗原 (核抗原、肿瘤抗原及甲状球蛋白 )
外源性 包括病原生物的成分、药物、外源性凝集素
及异种血清等
8
发病机制
可溶性抗原抗体复合物在肾小球内沉积引起损 伤；
抗体在肾小球内直接与抗原发生反应形成原位 免疫复合物引起损伤
小结
兔
肾小球基膜
大鼠肾 皮质匀浆
大鼠肾 皮质匀浆
大鼠胸 腺细胞
同种大鼠
大白兔
大鼠
肾小管刷状 缘与足突膜
新西兰家兔
大鼠
胸腺细胞表 面与系膜细 胞糖蛋白
小结
四、阳离子化牛血清清蛋白诱发家兔肾炎模型
造模机制
肾小球基膜富含负电荷，用带正电荷的阳离子 化异种蛋白（抗原或抗体）通过电荷结合而沉积在 基膜上，吸引血循环的相应抗体或抗原，导致肾脏 局部免疫复合物形成。本模型为原位免疫复合物性 肾炎模型。
抗Thy1肾炎
为系膜增生性肾炎，病理特点为系膜 细胞增生及系膜基质增多。本型肾炎在我 国非常常见。
42
抗Thy1肾炎
胸腺细胞抗原（Thy1抗原）分为Thy1.1和 Thy1.2两种，大鼠仅有Thy1.1抗原。大鼠 Thy1.1抗原是分子量为18kD的糖蛋白，分布于 早期胸腺细胞、未成熟的淋巴细胞、成纤维细 胞和肾脏系膜细胞等细胞的表面，在肾脏系膜 细胞含量较高。
9
一、家兔Masugi肾炎模型
Masugi肾 炎
本模型属于抗肾小球基膜肾炎模型，动物模 型称马杉（Masugi）肾炎（抗肾抗体性肾炎和肾 毒血清性肾炎）。研究增生性肾小球肾炎的常用 动物模型。此型肾炎在人类肾炎中的比例不到5%。 抗原成分主要定位于基膜Ⅳ型胶原α3链羧基端非 胶原区。
10
区别
人类抗肾小球基膜肾炎由抗肾小球基膜的 自身抗体引起
第粉6剂周，注保射存剂于量－4加0℃倍备。用。
（4）取上述粉剂，加适量pH 7.4磷酸盐缓冲液，即成C-BSA （等电点从4.4提高到8.6，在pH 7.4生理条件下，带阳离 子）。59 Nhomakorabea结果
C-BSA大鼠肾炎模 型
本模型的特点是在肾小球基膜上直接形 成免疫复合物，病理类型属于膜性肾病。
免疫荧光显微镜检查可见IgG沿肾小 球毛细血管壁呈均匀一致的颗粒状荧光。
47
抗Thy1肾炎
操作步骤
1. 制备大鼠胸腺细胞悬液 2. 兔抗大鼠Thy1.1抗血清（ATS）制备
48
抗Thy1肾炎
操作步骤
1. 制备大鼠胸腺细胞悬液 2. 兔抗大鼠Thy1.1抗血清（ATS）制备 3.大鼠Thy1.1肾炎模型的制作
49
结果
抗Thy1肾炎
末次注射ATS后
第1d出现系膜溶解，系膜细胞数减少，部 分毛细血管扩张；
注射后40~60天 慢性改变，肾小球纤维化。
21
急性弥漫增生性肾小球肾炎
弥漫性毛细血管内增生性肾小球肾炎
弥漫性新月体性肾小球肾炎
弥漫性新月体性肾小球肾炎
慢性硬化性肾小球肾炎
慢性硬化性肾小球肾炎
原位免疫复合物形成模式图
抗肾小球基膜肾炎
二、大鼠Heymann肾炎模型
分型
主动型：主动免疫。用自体或同种动物肾皮质 匀浆（含近端小管刷状缘成分）与弗氏佐剂混合后 给同种动物腹腔注射而引起
19
肾脏组织病理学检查
Masugi肾 炎
在光学显微镜下，每只动物各选30个最 大切面的肾小球，测量肾小球直径、截面积 并计数细胞数，计算肾小球体积。
20
病变
Masugi肾 炎
注射抗肾血清的第10~12天后 出现明显蛋白尿和管型
注射后10天 急性改变，肾小球肿大，渗出性变化；
注射后20天 急进性改变，出现新月体或环状体；
17
检测指标
尿蛋白； 血肌酐及血尿素氮； 病理形态学观察； 电镜、免疫荧光等。
Masugi肾 炎
18
结果
Masugi肾 炎
1．连续静脉注射抗肾血清3~5次后，家兔可出现 蛋白尿。大多数动物于注射抗肾血清的第12 天出现明显蛋白尿和管型尿。
2．光镜检查可见呈急性、亚急性（以形成新月 体、环状体为主）或慢性（纤维化为主）的 肾小球肾炎病变。免疫荧光检查发现，沿基膜 有特征性连续线状IgG沉着，绝大多数有C3 同时存在。
60
C-BSA大鼠肾炎模 型
PASM染色切片光学显微镜检查： 早期可见“钉突”和上皮下沉积物； 中期可见肾小球囊内大量蛋白性渗出物； 晚期可见GBM增厚、新月体形成及肾小球硬
化。电镜检查可见GBM弥漫增厚，上皮下多数电 子致密物沉积，上皮细胞足突融合。
61
肾炎动物模型模拟的人类肾炎类型
肾炎动物模型
第九章 泌尿系统疾病动物模型
1
复习 肾小球模式图
复习
正 常 肾 小 球
复习
滤过屏障 模式图
胶状铁实验 等电点4.6
复习
PAS染色
第一节
肾小球肾炎动物模型
6
肾小球肾炎（glomerulonephritis）是 一组以肾小球损害为主的疾病，病因、发病 机制、病理改变、病程和预后不尽相同，多 数肾小球肾炎的发病与免疫反应有关。
34
Heymann肾炎
操作方法
抗近端小管刷状缘抗原（Fx1A）的制备 皮质匀浆后依次通过80、100和220目筛网
抗Fx1A血清的制备 大鼠尾静脉注射抗Fx1A血清5mg/kg
35
结果
Heymann肾炎
蛋白尿；
光镜下可见肾小球体积增大，基膜局部增厚，第8、 12周末，肾小球基膜全长增厚，系膜细胞增多；
肾小球系膜增生模式图。 从左至右：轻度、中度和重度
系膜增生。
轻度系膜增生性肾小球肾炎 （PASM，×400）
中度系膜增生性 肾小球肾炎 （PASM， ×400）
重度系膜增生性肾小球肾炎 （PASM，×400）
系膜增生性肾小球肾炎 IgG在系膜区团块状沉积 （荧光， ×400）
兔肾皮 质匀浆
绵羊
造模机制
嘌呤霉素或阿霉素等均具肾脏毒性，可 损害肾小球滤过膜结构。
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操作步骤
嘌呤霉素致肾病模型
可用下列几种方法制备肾病模型
[方法]-1 多次注射
用体重100~150g雄性大鼠，每天皮下注射0.5% 嘌呤霉素1次（15mg/kg体重），连续10天，一般 5~7天出现蛋白尿，2周达高峰，4周达稳定。
2.蒸肾馏炎水模中型，复加制入上述液体中，搅拌后，再加1.8 g碳化二亚
胺（EDC），维持25℃，持续搅拌2 h，保持pH 4.75。最
后加家4兔m静ol/L脉（注pH射4C.7-5B）SA醋酸10盐m缓g冲，液每3日0 m1l次，，终止共反5周应。，
（3）将上述溶液冷冻干燥，4℃双蒸馏水中透析48 h，得BSA
（一）大鼠主动型Heymann肾炎模型
造模机制
用近端小管刷状缘成分为抗原免疫大鼠， 使大鼠体内产生相应抗体，抗体与Heymann抗原 形成免疫复合物，引起膜性肾小球肾炎。
大鼠 肾皮质匀浆
同种大鼠
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Heymann肾炎
（一）大鼠主动型Heymann肾炎模型
操作方法
将多只大鼠处死后取出肾脏，从肾动脉插 入导管，用生理盐水反复冲洗后，取皮质5g研 成匀浆，与弗氏完全佐剂充分混匀成10ml，加 生理盐水20ml，给同种大鼠腹腔注射，每2周1 次，每次2ml，经3~6次注射可出现蛋白尿，说 明模型成功。