• 记录 OD’（实验组）与OD’0（对照组）。
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步骤4、a-萘胺含量测定
• 取2 mL培养液加10 mL水混匀，再顺次加入1 mL 对氨基苯磺酸溶液与1 mL亚硝酸钠溶液，混匀， 观察溶液颜色变化，再定容至25 mL。
• 室温25min后，于510nm处测定吸光度（OD）值。
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步骤5．标准曲线制作：
植物生物学实验(二) 植物生理学基础与综合实验
实验二、根系活力的测定 ——a-萘胺氧化法
南京师范大学生命科学学院
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一、实验目的
• 了解根系活力的生理意义； • 掌握a-萘胺氧化法, 测定根系活件
二、实验原理
（一）植物根系的生理功能: 吸收：水分、无机盐、CO2。 输导 固着 合成 贮藏
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注意：
• OD510越大→α-萘胺剩余越多→根系活力越弱
• 反应液的酸度大则增加重氮化作用的速度，但降 低偶联作用的速度，颜色比较稳定。增加温度可 以增加反应速度，但降低重氮盐的稳定度，所以 反应需要在相同条件下进行。
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三、实验材料与仪器设备
（一）实验材料
水稻(Oryza sativa L.)等水生植物的须根系。
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7．计算根系活力
• 根据实验结果计算不同植株根系对α-萘胺 的生物氧化强度（mg α-萘胺/gFW·h）， 并与植物生长势比较，分析它们之间的关 系。
• -萘胺生物氧化强度= 48mL×（C-C′）-48mL×（C0-C0′） 2g×1h
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五、思考题
1. 为什么利用a-萘胺氧化法测定植物的根系 活力时需要在5min后作第一次测定？
• 以50 μg/mL的α-萘胺溶液为母液，配置 40、30、20、10、5、0 μg/mL的溶液各10 mL。
• 各取2 mL，按照步骤3分别反应，并测定OD 值。以OD值为纵坐标，浓度为横坐标，绘 制α-萘胺溶液的标准曲线。或者根据浓度 与OD值关系直接计算回归方程。
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6．换算浓度
• 分别查对标准曲线，或利用回归方程直接 计算出实验组与对照组溶液实验前后对应 的α-萘胺浓度（ C、C’与 C0、C’0 ）。
• 植物根系中的过氧化物酶能氧化α-萘胺，生成 红色的α-羟基-1-萘胺，并沉淀于根表面，将根 系染成红色。
• 一般来说根呼吸强度越大，即该酶的活力越强， 对α-萘胺的氧化力也越强，染色也越深。
• 可以根据根系表面着色深浅，定性观察并判断根 系活力大小，也可通过测定溶液中未被氧化的 α-萘胺的量，以定量测定根系活力。
小，并与植物生长势比较，分析植物生
长势与根系活力之间的关系。
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（二）定量测定
步骤1、实验处理
• 取50 μg/mL 的α-萘胺溶液和0.1 mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液各25 mL，置于三角瓶 中，混匀。
• 称取根系2 g浸没于三角瓶中的溶液中。 • 同样地，取50 μg/mL的α-萘胺溶液和0.1
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四、实验步骤
（一）定性观察：
1. 处理：
2.
挖取处
于不同生长状态的须
根系植株（如水稻、
豌豆苗根系等）数株，
洗净根部后再用滤纸
吸去根上附着的水分。
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2.观察
1.
将植株根系浸入盛有25
μg/mL α-萘胺溶液并用黑纸包裹的容
器中，静置24-36小时后观察根系着色情
况。
2.
比较不同植株根系活力大
2. 测定根系活力时最好选择根的哪个部位？ 为什么？
3. 3. 简述分光光度计使用过程及注意事 项。
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4、在使用分光光度计时，为什么每改变一次 波长，就需要重新调零和调透光率100%？
5、为什么在测定时需要洗净比色皿？洗净的 比色皿在倒入提取液时为什么还要用提取 液洗2-3遍？
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定性观察
• 根系表面红色越深，说明根系活力越强。
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定量测定
• 剩余的α-萘胺在酸性环境中可与对氨基苯 磺酸（sulfanil-amide）和亚硝酸盐作用 生成稳定的红色偶氮染料。
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定量测定
对-苯磺酸-偶氮-α-萘胺
•生成的红色偶氮化合物在pH 7.0时在510 nm处有最大吸收峰，可用分光光度法测定光 吸收值，从而利用此反应来间接测定溶液中 α-萘胺的量。
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根系吸收无机盐的过程：
• 部位：根尖，根毛区最 活跃。
• 步骤
1.呼吸释放CO2； 2.形成H2CO3； 3.H+与HCO3 -吸附在根表
面。
4.溶液中阴阳离子分别与
HCO3
、
H+交换。
5.吸收，进入根内部。
6.运输。
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（二）根系活力的意义与测定方法
• 根系活力即根的生长情况和代谢水平。它直接影 响植物地上部的生长和营养状况以及产量。
（二）仪器与用品 分光光度计、天平、恒温培养箱、三角烧瓶、量筒、移
液管、剪刀、玻棒。 （三）试剂
α-萘胺溶液：先用少量的95%酒精溶解，然后加水定容。 分别配制50 μg/mL、25 μg/mL溶液。 • 0.1 mol/L磷酸缓冲液，pH 7.0。 • 1%对氨基苯磺酸溶液：溶解于30%的醋酸溶液中。 • 0.01%亚硝酸钠溶液。
mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液各25 mL，置于 另一三角瓶中，混匀，不放根系作为对照。
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步骤2、实验初始值测定
• 5min后，分别从两瓶中各取2 mL溶液，按 照步骤4作第一次测定。
• 记录OD（实验组）与OD0（对照组）。
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步骤3、实验终了值测定
• 将两三角瓶置于25℃恒温箱中避光保温 60min后，各取2 mL ，按照步骤4作第二次 测定。