中国药科大学 生物制药工艺学 期末试卷A卷2013-2014学年第一学期专业班级学号姓名题号一二三四总分得分核分人：得分评卷人一、填空题（每空0.5分，共30分）1、细胞破碎包括哪三大类方法、和。
2、萃取因素也称萃取比，其定义为被萃取溶质进入的总量与该溶质在中总量之比。
3、晶体的质量主要是指晶体的大小、形状和纯度，其中影响晶体大小的主要因素有 ， ， ， 。
4、大孔网状聚合物吸附剂是在树脂聚合时加入 致孔剂，待网格骨架固化和链结构单元形成后，用溶剂萃取或蒸馏水洗将致孔剂去掉，形成不受外界环境条件影响的 ，其孔径远大于2～4nm，可达 ，故称“大孔”。
5、在作分级分离时，为了提高分辨率，多采用比样品体积大倍的柱体积，的柱比，较吸液量、较粒的凝胶固定相。
6、写出下列离子交换剂类型：732 ，724 ，717 ，CM-C ,DEAE-C ，PBE94 。
7、请写出下列药物英文的中文全称：IFN（Interferon）、第1页（共8页）IL(Interleukin) 、 CSF（Colony Stimulating Factor）、rhGH（Recombinant Human Growth Hormone）、Ins（Insulin）。
8、生物药物的分类：、、、。
9、在生化制药工艺中干燥的方法主要包括：、、。
10、疫苗制备时，可用 、和 方法扩增病毒。
11、各向异性膜分为两层，一层是，厚度为0.1~1μm，决定了膜的性质，另一层是，厚度约0.1mm，作用是。
12、制备型高效液相色谱的重要参数有、、、。
13、密度梯度离心常用的介质有、、。
14、用100μmol/L NADH使乳酸脱氢酶吸附在固定化丙酮酸类似物上，若NADH从洗脱液中去除，则脱氢酶被洗脱，这种洗脱方法称为。
15、生化药物的主要资源有 、 、 和 。
16、粘多糖是一类含有 和 的多糖。
17、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)脂质是 ，临床应用效果 ，原因是 。
从发现年代上看,该物质 于青霉素被发现。
第2页（共8页）得分评卷人二、单项选择题（每小题1分，共20分）（从A、B、C、D四个选项中选择一个正确答案填入空格中）1、蛋白质工程技术改造的速效胰岛素机理是-----------------------------（ ）A. 将人胰岛素B28位与B29位氨基酸互换，使之不易形成六聚体B. 将A21位替换成甘氨酸，B链末端增加两个精氨酸，使之在pH4溶液中可溶C. 将B29位赖氨酸用长链脂肪酸修饰，改变其皮下扩散和吸收速度D. 将猪胰岛素B30位改造为丙氨酸，使之和人胰岛素序列一致2、能用于防治血栓的酶类药物有------------------------------------（）A、SODB、胰岛素C、L-天冬酰胺酶D、尿激酶3、以下可用于菌种纯化的方法有-------------------------------------（）A、高温灭菌B、平板划线C、富集培养D、诱变处理4、 如果重组DNA药物以包涵体表达，其最大的缺点是------------------ ( )A. 无法工业化B. 易被胞内酶水解C.蛋白表达量低D. 需复性5、基因治疗中，哪一种载体介导的基因在细胞基因组中是随机整合的？----（）A. 脂质体载体B. 哺乳动物染色体C. 逆转录病毒载体D. 腺病毒载体6、下列哪一个是腺病毒载体的使用特点？ -----------------------------（ ）A. 位点特异性整合至基因组中B. 位点非特异性整合至基因组中C. 有可能导致恶性肿瘤D. 宿主范围广7、实验室中使用基因工程技术表达的胞内蛋白，可用以下哪种方法破壁------（）A. 碱裂解法B.高压匀浆法C.超声波法D.干燥法8、盐析法与有机溶剂沉淀法比较，其优点是-----------------------------（ ）A.分辨率高B.变性作用小C.杂质易除D.沉淀易分离9、将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物，该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来，此方法称为-----------------------------（）A．亲和沉淀B．聚合物沉淀C．金属离子沉淀D．盐析沉淀10、“类似物容易吸附类似物”的原则, 一般非极性吸附剂适宜于从下列何种溶剂中吸附非极性物质。
---------------------------------------------- （ ）A.极性溶剂B.非极性溶剂C.三氯甲烷D.溶剂11、在凝胶层析中Sepharose的基本骨架是-----------------------------（ ）A.琼脂糖B.半乳糖C.葡聚糖D.丙烯酰胺12、下列关于离子交换选择性的说法不正确的是------------------------------------（）A.水合离子半径小更容易被吸附B.在稀溶液中树脂吸附高价离子的倾向很大第3页（共8页）C.有机溶剂存在时离子交换树脂倾向于吸附无机离子D.树脂交联度降低，交换选择性增加13、一般可以选用哪种细菌检查孔径为0.45 μm的滤膜 --------------------------（）A.灵杆菌B.绿脓杆菌C.金黄色葡萄球菌D.大肠杆菌14、在微滤过程中，主要的推动力是 ----------------------------------------------------（）A. 浓度差B. 压力差C. 电位差D. 气压差15下列转子中“壁效应”最强的是------------------------------------------------------（）A.水平转子B.角度转子C.区带转子D.细胞洗脱转子16分离多糖时常用的检测器是------------------------------------------------------------（）A.紫外检测器B.荧光检测器C.示差检测器D.质谱检测器17、下列哪个部分是制备型色谱配备而分析型色谱没有的-------------------------（）A. 色谱柱B. 输液泵C. 检测池D. 电导检测器18、金属离子亲和层析中，不可以和固定化金属离子特异结合的基团是-------（）A.Ser的羟基B. His的咪唑基C. Cys的巯基D. Trp的吲哚基19、蛋白类物质的分离纯化往往是多步骤的，下列哪类方法是在分离纯化的前期、中期和后期都常常会被选用的方法。
--------------------------------------------------（）A. 离子交换法B. 凝胶过滤法C. pI沉淀法D. 盐析法相20、利用产氨短杆菌发酵法生产肌苷酸，第一步是用诱变育种的方法筛选缺乏下列哪一种酶的缺陷型菌株。
---------------------------------------------------------------（）A. SAMP合成酶B. PRPP转酰胺酶C. SAMP裂解酶D.AMP脱氢酶得分评卷人三、名词解释（每小题2分，共16分）1、RNA干涉2、蛋白质工程药物第4页（共8页）3、HAT选择培养基4、自杀基因疗法5、全排阻：6、双水相萃取：7、类分离：8、截留分子量第5页（共8页）得分评卷人四、论述题（共34分）1、以下为利用蛋清制备溶菌酶的部分过程，请写出分离过程中吸附与洗脱的原理，为什么选用724树脂？（9分）蛋清准备：由4～5只新鲜鸡蛋中小心取出蛋清约80～100ml，充分打匀，用纱布滤去杂质，计量体积，用冰块预冷至0℃备用。
树脂吸附：将处理好的“724”树脂用布氏漏斗抽干，取湿树脂20g，在不断搅拌下加入预冷的蛋清中，再继续搅拌3h使充分吸附，静置过夜（0～5℃）。
洗涤：倾出上层蛋清，用蒸馏水清洗树脂二、三次，再用pH6.5的0.15 mol ／L磷酸缓冲液40ml搅拌清洗两次，用布氏漏斗抽干．洗脱：将树脂移入烧杯，取10％硫酸铵溶液30～40ml分三次加入搅拌（15min）洗脱，抽干树脂，合并洗脱液，得含有溶菌酶的溶液，待后续纯化。
2、什么是亲和层析技术？亲和层析中选择配基时应注意什么？（8分）第6页（共8页）3、仔细阅读下文后回答下列问题。
（9分）步骤1.取新鲜羊血，5000ｒ·ｍｉｎ－１离心15ｍｉｎ收集红血球．后加2倍体积0.9％ NaCl溶液，5000ｒ·ｍｉｎ－１离心10ｍｉｎ，重复3次，得洁净红血球．步骤2.取洁净红血球100ｍＬ，加等体积去离子水搅拌,４℃放置12ｈ。
按体积的0.25倍缓慢加入预冷至４℃的95％乙醇，再按溶血体积的0.15倍缓慢加入预冷的氯仿，搅拌15ｍｉｎ，静置２ｈ，离心除去沉淀，得上清液．步骤3.将上述上清液加1.5倍体积的冷丙酮，搅拌均匀，静置20ｍｉｎ，离心收集沉淀物，加适量去离子水，离心除去不溶性蛋白，收集上清液．步骤4.上清液于60 ℃热处理15ｍｉｎ，离心除去沉淀，收集上清液．步骤5.将上清液置于透析袋中，在磷酸钾盐缓冲液中动态透析6~8h．步骤6. ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－50柱层析: 将透析液小心加入已用2.5ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｐＨ7.6磷酸盐缓冲液平衡好的ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０层析柱中，然后用ｐＨ7.6的2.5～50ｍｍｏｌ·Ｌ－１磷酸钾盐缓冲液，以流速0.5ｍＬ·ｍｉｎ－１进行梯度洗脱，收集具有ＳＯＤ活性部分的洗脱液，浓缩后冷冻干燥得到淡蓝绿色产品即为ＳＯＤ．（1）请说明在上文的“步骤1”的主要目的。
（1分）（2）请说明上文“步骤2”的目的和原理。
（2分）（3）请说明上文“步骤4”的目的和原理。
（2分）（4）请详细说明上文“步骤6”的原理。
（4分）第7页（共8页）4、在链霉素纯化实验中，某学生没有得到产品，以下是该学生的实验操作记录：离子交换法纯化链霉素实验记录：，搅拌溶1）取150ml发酵液放入干净的250ml烧杯，加入4.5g ZnSO4解，然后在70℃加热2min,迅速冷却后过滤，取滤液备用；2）用1mol/L NaOH将pH调到7.0，上1×14-Na型离子交换树脂，树脂饱和后用大量软水洗净树脂，然后用5%~7%低温硫酸洗脱；3）一次洗脱液用NaOH调pH7.0，上330树脂，树脂饱和后用大量软水洗净树脂，然后用8%低温硫酸洗脱；4）二次洗脱液用NaOH调pH7.0后，快速分别通过110和401树脂柱，得到精制液；5）精制液用活性炭脱水，35℃下减压浓缩蒸干。
结果：没有得到链霉素产品。
根据其实验记录，从工艺上判断存在错误的地方（不止一处），给出正确的方案，并简要说明纯化原理和注意事项。