中国药科大学 生物制药工艺学 期末试卷A卷2014-2015学年第一学期专业班级学号姓名题号一二三四总分得分核分人：得分评卷人一、填空题（每空0.5分，共30分）1、实习时，老师给出以下螺旋藻多糖提取工艺：将螺旋藻粉在90℃热水中搅拌4h，目的是，然后离心过滤，收集滤液，将滤液浓缩，在此可使用浓缩方法，浓缩液加入3倍体积乙醇，加入乙醇的目的是，过滤后取可获多糖粗品。
2、某菌种拟保存10年以上时间，可采用方法保存。
对于动物细胞，可采用方法保存。
使用斜面保存菌种时，应放于℃的冰箱内。
3、嵌合抗体是指用替换，保留；人源化抗体是指抗体可变区中仅为鼠源，其及恒定区均来自人源。
4、常用的破乳化方法有、、、等。
5、选择性变性沉淀主要包括、和。
6、常用的吸附剂有、和等。
第1页（共8页）7、葡聚糖凝胶的孔径大小取决于 ，其越小，凝胶孔径越 ；而琼脂糖凝胶的孔径却依赖于 。
8、在采用多缓冲阴离子交换剂作固定相的离子交换聚焦色谱过程中，当柱中某位点之pH值下降到蛋白质组分 值以下时，它因带电荷而 ，如果柱中有两种蛋白组分，pI值较大者会超过另一组分，移动至柱下部pH较 的位点进行 。
9、亲和层析洗脱方法有 ， ， 。
10、亲和力大小除由亲和对本身的 决定外，还受许多因素的影响，其中包括亲和吸附剂 、 、 、 、 等。
10、实验用超滤器的类型有 ， ， ， 等。
11、利用产氨短杆菌发酵法生产肌苷酸，第一步是用诱变育种的方法筛选缺乏酶的缺陷型菌株，在发酵培养基中提供亚适量的；另外，改变细胞膜对5′-IMP的透性，选育不敏感的变异株。
12、目前临床使用的胰岛素主要三类生产方法，第一类是以 为原料提取胰岛素；第二类是酶促半合成胰岛素；第三类是采用 生产人胰岛素。
13、四环素制备工艺中，在发酵液中加入草酸的目的是 、 和 。
14、重组药物制备过程中，目的基因的获得可用 、 、 和 方法。
15、生物制品主要包括 、 和 、 、 和其他。
第2页（共8页）得分评卷人二、单项选择题（每小题1分，共20分）（从A、B、C、D四个选项中选择一个正确答案填入空格中）1、关于诱变育种的说法正确的是------------------------------------ ( )A. 激光诱变效果优于紫外诱变B. 同种诱变剂反复诱变的效果更好C. 物理诱变效果优于化学诱变D. 诱变方法不如选育方法重要2、以下阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力最强的是--------------------（）A. Al3+B.Mg2+C. Na+D.无法判断3、以下可用于蛋白质分离纯化的萃取技术是--------------------------（）A. 双水相萃取B. 有机溶剂萃取C. 反胶束萃取D. A和C都可以4、RNAi的作用机理是 --------------------------------------------（ ）A. 细胞内基因被缺陷基因所替换，从而使基因不表达或表达产物无生理活性B. 靶基因的DNA序列被RISC、Dicer等酶切断而引起基因沉默C．靶基因的mRNA序列被降解灭活D．是一种非特异性免疫过程，激活机体免疫系统，清除外源感染或肿瘤细胞 5、EGF是下面哪种药物-------------------------------------------（）A．表皮生长因子 B. 神经生长因子 C. 干扰素 D. 生长激素6、某基因工程菌在使用过程中发现蛋白表达量大幅度下降，应使用------（ ）A．平板划线分离单菌落 B. 增加培养基中抗生素的添加量C．诱导时增加IPTG的用量 D.降低培养温度7、以下能用重组DNA技术生产的药物为-------------------------------（）A、维生素B、人生长素C、肝素D、链霉素8、当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度--------------------（ ）A．增大 B. 减小 C. 先增大，后减小 D. 先减小，后增大9、用大网格高聚物吸附剂吸附的弱酸性物质，一般用下列哪种溶液洗脱----（ ）A.水B.高盐C.低pHD. 高pH10、“类似物容易吸附类似物”的原则,一般极性吸附剂适宜于从何种溶剂中吸附极性物质 ------------------------------------------------------------（ ）A.极性溶剂B.非极性溶剂C.水D.溶剂11、凝胶层析中，如对于Sephadex G25（渗入限1000，排阻限5000）氯化钠之K d为0.8，葡萄糖的K d为0.9，其作为小分子溶质的Kd都小于1，其原因是-------（）A.水合作用B.凝胶吸附C.柱床过长D.流速过低12、用钠型阳离子交换树脂处理氨基酸时，吸附量很低，这是因为---------（ ）A．选错树脂 B. 离子竞争C. 偶极排斥 D. 解离低第3页（共8页）13、亲和层析的洗脱过程中，在流动相中加入配基的洗脱方法称作---------（ ）A. 阴性洗脱B. 剧烈洗脱C. 竞争洗脱D. 非竞争洗脱14、在红霉素的分离工艺中，将其从碱性的丁酯洗脱液反萃取到醋酸缓冲液，醋酸缓冲液的pH应调节到------------------------------------------------（ ） A．2～3 B. 4～5 C.6～8 D. 8～915、 考虑到青霉素的稳定性，进行发酵液预处理时，应调pH至--------- ( )A. 2～3B. 5～6C.9～10D. 12～1316、NS-1是稳定的小白鼠BALB/c癌细胞株，除了能在培养基中永续生长外，还有一个重要特性，其缺乏下列哪个DNA代谢的重要酶? -------------------- (）A. 胸苷激酶B. 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶C. 胸苷激酶和次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶D. 以上都不对17、下列哪种蛋白质药物在80摄氏度下仍然很稳定，从而可以利用加热法除去其它杂蛋白？----------------------------------------------------------（ ）A.干扰素αlbB. 硫酸软骨素C. 肝素D.促红细胞生成素18、抗自身免疫疾病的英夫利昔单抗（Infliximab）Remicade是针对下列哪个蛋白抗原筛选出来的单抗？------------------------------------------------（）A. 人类表皮生长因子1B. 人血管内皮生长因子C.肿瘤坏死因子D. 人类表皮生长因子219、抗自身免疫疾病的优特克单抗（ustekinumab）是哪个物质的人源化单抗？（）A. 人血管内皮生长因子B. 白介素23C.肿瘤坏死因子D. 白介素23和白介素12的共同P40亚基20、在基因治疗中，下面哪一种载体介导的基因在细胞基因组中是位点特异性整合的？---------------------------------------------------------------（ ）A. 脂质体载体B. 哺乳动物染色体C. 逆转录病毒载体D. 腺病毒相关病毒载体得分评卷人三、名词解释（每小题2分，共16分）1、固定化酶：第4页（共8页）2、酶法破壁：3、Ks盐析：4、亲和反胶团萃取：5、浓差极化现象:6、分离度：7、核酸疫苗：8、生物制品：第5页（共8页）得分评卷人四、论述题（共34分）1、请以DEAE-C为例说明离子交换纤维素分离纯化蛋白质时的洗脱方法有哪些？并说出各种方法的洗脱原理。
（8分）2、试述速度区带离心法及其特点。
（8分）第6页（共8页）3、仔细阅读下文后回答下列问题。
(9分)步骤1． 取100kg新鲜肠粘膜（总固体5%～7%）加苯酚200ml（0.2%），气温低时可不加。
在搅拌下，加入绞碎胰脏0.5～1kg(0.5%～1%)，用10%NaOH调pH至8.5～9.0，升温至40～45℃，保温2～3h。
维持pH8.0，加入5kg NaCl（5%），升温至90℃，用6mol/L HCl调pH6.5，停止搅拌，保温20min，过滤即得。
步骤2． 取酶解液冷至50℃以下，用6mol/L NaOH调pH7.0，加入5kg D-254离子交换树脂，搅拌5h，收集树脂，水冲洗至洗液澄清，滤干，用等体积2mol/L NaCl 洗15min，过滤，取树脂再用2倍量1.2mol/L NaCl洗2次。
过滤，取树脂再用半倍量5mol/L NaCl搅拌洗1h，过滤，收集洗液，树脂再用1/3量3mol/LNaCl洗2次，过滤，收集洗液，合并2次的洗液。
洗液经纸浆助滤，得清液，加入用活性炭处理过的0.9倍量的95%乙醇，冷处沉淀8～12h，收集沉淀，按100kg粘膜加入300ml的比例，向沉淀中补加蒸馏水，再加4倍量95%乙醇，冷处沉淀6h，收集沉淀，用无水乙醇洗1次，丙酮脱水2次，真空干燥，得粗品肝素。
问题：1)请说明在上文的步骤１中，“用10%NaOH调pH至8.5～9.0，”的主要目的？2)请说明在上文的步骤１中，“加入绞碎胰脏0.5～1kg(0.5%～1%)，”的主要目的？3)请说明在上文的步骤１中，“升温至90℃，”的主要目的？4)请详细说明上文“步骤２”分离肝素的原理。
第7页（共8页）4、根据其工艺流程，在方格处补全工艺（不止一处），给出正确的方案，并简要说明纯化原理和注意事项。
(9分)[酸化处理] [过滤或离心] [中和] 发酵液—————————→酸化液————————→酸化滤洗液———————→ 1～2倍量水稀释，草酸酸化 板框过滤 冷却至15℃以下,10%NaOH[一次离子交换] [一次洗脱] [二次离子交换]饱和树脂——————→ 一次洗脱液———————→饱和树脂中和后401树脂 万单位/ml) 5～6%H2SO4洗脱 吸附(10万单位/ml)[二次洗脱] [精制] [活性炭脱色]——————————→二次洗脱液———————→精制液——————→精脱液先用无盐水挤压,再以8% NaOH中和，1×14-H型、 pH4.3～5.0,0.2～3%H2SO4单罐循环洗脱3～490%以上[薄膜浓缩] [脱色、无菌过滤、喷雾干燥]———————→蒸发浓缩液 ————————————————→硫酸链霉素成品<35℃/-0.00266mPa(24～36万U/ml)第8页（共8页）。