当前位置:文档之家› 细胞因子的ELISA方法检测

细胞因子的ELISA方法检测

实验报告
1.取已包被抗体并完成封闭的酶标条2条,分别装于酶标架上。

在每条酶标条的1~6孔分别加入稀释液100微升。

2.向第6、7孔加入分别加入2000pg/ml PGFβ1标准品100微升。

3.用加样枪吹吸混匀第6孔的液体,注意避免气泡形成。

混匀后其浓度约为1000pg/ml。

4.再吸出100微升加入第5孔,吹吸混匀。

其浓度变为500pg/ml。

以此类推,一直加到第2孔。

吸去多余的100微升。

5.向第8、9孔各加入100微升样品1。

10、11孔加入100微升样品2.
6.封口膜覆盖酶标板,防止水分挥发。

7.将酶标板置于37℃温箱孵育120min。

8.取出孵育后的酶标板,揭开封口膜,甩去孔中液体,注意甩动方向,避免液体流入相邻酶标孔,造成交叉污染。

9.加入洗涤液,注意不要溢出至相邻孔,造成交叉污染。

静置3min后甩去孔中液体,重复以上洗涤过程4次。

在吸水纸上拍干孔中液体。

10.每个孔各加入酶标记抗体100微升。

封口膜覆盖酶标板,将酶标板置于37℃温箱孵育60min。

11. 取出孵育后的酶标板,揭开封口膜,甩去孔中液体。

再加入洗涤液,静置3min后,甩去孔中液体,重复以上洗涤过程4次。

在吸水纸上拍干孔中液体。

12. 每个孔各加入底物A 100微升,再加入底物B各100微升。

晃动酶标板混匀。

将酶标板放入37℃温箱孵育15min显色。

13. 取出孵育后的酶标板,见酶标板孔中液体呈蓝色。

14. 每个孔各加入终止液100微升,可见液体变成淡黄色。

15.用酶标仪在450nm处测OD值。

结果如下:
16. 分析结果:
将2组标准品的OD值和标本1、标本2的4个副本的OD值合并得到平均值。

根据各自的OD值,在半对数坐标上标出62.5、125、250、500、1000、2000这6个不同稀释度标准品所处的位置,将6个点连线集会成标准曲线。

根据2个标本的OD值标出其在OD值普通坐标上的位置,虚线连接其在标准曲线上的位置,再用虚线连接确定其在浓度坐标上的位置。

推算出浓度分别为300pg/ml和400pg/ml。

相关主题