系统适用性试验
杂质对照液10ml + 内标溶液 10ml 100ml（1） 供试品溶液10ml + 内标溶液10ml 100ml（2） R——取溶液（1）重复进样6次，间氨基酚峰与内标 磺胺峰的分离度应大于2.5； RSD——小于7%（按A杂/A内比值计算）
测定方法
取溶液（1）和（2）分别进样，记录色谱, 计算tR内/tR杂，应为0.66 间苯氨酚含量%=10（C对/C样）（R样/R对）
限量0.25% 讨论:离子对试剂和其他附加剂的选用规则
R:样品或对照品与内标的峰面积之比. “10”从何而来?
三.羟基乙酯中有关物质的检查
色谱条件 薄层板——GF254C18化学键合硅胶 展开剂——甲醇-水-冰醋酸(70:30:1) 检测——254nm紫外光下检视 测定方法 样品液1——1.0%丙酮溶液 样品液2——0.01%丙酮溶液 点样——各2µl
五.氯贝丁酯中特殊杂质的检查
合成工艺
CH3 Cl OH [缩 ]， 解 合 [水 ] Cl CH3COCH3， CHCl3， NaOH O C CH3 CH3 [酸 化] HCl Cl O C COOH CH3 [酯 化] Cl C2H5OH， 2SO4 H CH3 CH3 O C COOC2H5 COONa
乙酰水杨酸苯酯
原理——根据这些杂质与阿司匹林的酸性强弱， 利用它们在碳酸钠溶液中的溶解度差异，规 定一定量样品在碳酸钠溶液中应澄清。
水杨酸
限量计算
C×V L= × 100% S 来源--原料残存（生产过程中乙酰化不全） =(0.1g/1000ml×1m)/0.1×100% 水解产生（贮存过程中水解产生) =0.1% 原理--水杨酸有游离酚羟基，可与高铁离子反应，产生紫 堇色,而阿司匹林不含游离酚羟基，无此反应。 方法--取一定量样品和水杨酸对照品与硫酸铁铵反应，比 较紫色深浅，规定样品液颜色不得较对照品颜深。 应用范围—原料,片剂 限量 原料：0.1%； 阿司匹林片：0.3%； 阿司匹林肠溶:1.5%； 阿司匹林栓：1.0%（HPLC法）
Cu2+
Na
调节pH值 测定吸收 度A435nm
二乙基二硫代氨基甲酸钠
规定——A值不得大于0.35 2.原子吸收分光光度法
取1g样品测定，以铜标准液为对照，限量10ppm。
有关物质——TLC法
薄层板——硅胶GF254 展开剂——异丁醇-浓氨水(3:1) 检测——254nm紫外光下检视 样品液1——25mg/ml 样品液2——50 µg/ml 点样——各20µl 规定——样1杂质斑点强度不得超过样2主斑点 限量——0.2%
NH2 HCl OH OH NH2 HCl
乙醚相
水相
检查方法2.高效液相色谱法 检查方法 高效液相色谱法
分析柱——C18硅烷键合硅胶； 流动相——磷酸盐缓冲液-甲醇-氢氧化四丁基铵 流速——1.5ml/min 检测波长——254nm 内标溶液——磺胺溶液（5µg/ml） µ 杂质对照液——间氨基酚溶液（12µg/ml） 供试品溶液——对氨基水杨酸钠样品 （6.9mg/ml）
二.对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查
合成工艺与降解反应
NH2 NH2 NH2 - CO2 H 2O OH COONa
合成
OH
NH2
降解
OH
OH
氧化成联苯醌
红棕色
间氨基酚
检查方法1.双相滴定法与原理
来源--为反应中间体和降解产物 原理--利用杂质易溶于乙醚，用乙醚提取，使两者分 离，再用盐酸滴定,以甲基橙为指示剂。 规定—消耗盐酸滴定液不得超过0.30ml.
一.阿司匹林中特殊杂质检查
合成工艺
ONa CO2 COONa ONa COOH H+ OH
COOH （CH3CO）2O OCOCH3 + CH3COOH
溶液的澄清度 检查--酚、苯酯类杂质
OH
CH3COO
COO OH
这些杂质是怎么 产生的?还有其 他杂质吗?
COO OCOCH3
酚
乙ห้องสมุดไป่ตู้苯酯
水杨酸苯酯
对氯酚
对氯酚——GC法
色谱条件：分析柱——5%SE-30（甲基硅橡胶），2m玻璃 柱；载气——氮气；柱温——160°C；检测器——FID 杂质对照液——0.0025%对氯酚溶液 供试品溶液制备： 样品10g +NaOH 水层 + HCl 氯仿洗涤（弃取） 用氯仿提取 加氯仿至10ml
进样——取对照液和样品液分别进样测定， 规定——样品中对氯酚峰不得大于对照品峰（0.0025%）
对氯酚—高效液相色谱法
色谱条件: 色谱柱—氰化丙基硅烷化硅胶;柱温—室温; 流动相—己烷-异丙醇-冰醋酸(1970:30:1); 检测波长—274nm 内标溶液: 对-羟乙基酚 供试品制备: 流动相 4.0g样品+4mL内标溶液 20ml 测定: 供试品和对照品分别注入液相色谱仪测定 规定:QT不得大于QS
思考题
1.根据阿司匹林的合成工艺以及化学结构,说明游离水杨酸是 如何引入的,其检查原理是什么. 2.对氨基水杨酸钠的主要杂质是什么?简述检查方法和原理. 3.选择题 用柱分配层析-紫外分光光度法,检查阿司匹林中水杨酸杂 质时,含有氯化铁-尿素试液的硅藻土为固定相,用氯仿洗脱 时,哪个先洗脱 A.水杨酸 B.阿司匹林 C.其中杂质 D.尿素 E.三氯化铁 4.比较选择题 A.甲酚那酸 B.阿司匹林 C.两者都是 D.两者都不是 (1)水解后与三氯化铁试液反应,产生紫色 (2)水解后有重氮化-偶合反应 (3)检查铜盐 (4)检查碳酸钠试液中不溶性物质
方法—反相薄层色谱法
判断:
① 控制杂质斑点个数， 控制杂质种类 ②样1杂质斑点强度不得 超过样2主斑点
样 1
样 2
四.甲芬那酸中特殊杂质的检查
合成工艺
邻-氯苯 甲酸
2，3-二 甲基苯胺
甲芬那酸
检查项目：铜盐、 有关物质
铜盐检查法
1.分光光度法（比色法） 样品
Cu
炽灼+ H2SO4
C 2 H5 N C 2 H5 C S S