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高效液相色谱法(High Performance Liquid Chro-matography,HPLC) 是在20世纪60年代末, 以经典液相柱色谱法为 基础,引入气相色谱法 的理论发展而成的分离 分析方法。该方法以高 压泵输送流动相,采用 高效固定相,实现了仪 器在线化,自动化,使分 离效率大大提高。
• 操作：线图表示 • 将老年蜂蜜用乙醇水溶液沉降大分子多糖和较高聚 合度低聚木糖,而后进行硫酸水解,低聚木糖组分水解 为木糖。高效液相色谱测定老年蜂蜜水解前后木糖 含量的差值,即为低聚木糖含量。色谱图见图3、4。 （图片）
• 本方法测定低聚木糖终端产品中低聚木糖含量,操作简 便可行,结果准确,尤其适合缺少低聚木糖标准对照品情 况下定量测定低聚木糖含量。该方法可应用于企业产品 质量控制及主管部门质量监督。 实验分析： ： 1、如果测定样品里含有大量的蔗糖或乳糖也会产生干扰,在此情况下,
应对样品进行水解。由水解前后木糖含量的差值求出低聚木糖的 样品含量。 2、针对添加了低聚木糖后的产品中低聚木糖的相对含量少，且受其 他成分的干扰，常用氢氧化铜沉降样品中脂肪蛋白、用乙醇沉降大分 子多糖、高聚合度低聚糖等办法将干扰成分从样品中分离出来，不同 的样品选择不同的处理方法后，用酸解法以木糖为唯一的标样就可以 计算出低聚木糖的含量（以木糖计）。这种方法简单易操作，测定结 果重现性好，处理成本低，可以被各大实验采用室采用。 3、通常功能性低聚糖的检测器不选择紫外检测器,而是示差折光检测 器、蒸发光散射检测器及荧光检测器等。
优点：测定低聚糖的方法很多, HPLC具有快速方便,分 辨率高,分离效果好,重现性好和不破环样品等优点。 HPLC是目前在检测低聚糖中应用最为广泛的一种方 法
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其他分析方法：
• 质谱连用 • 毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE) 作为经典电泳技术和现代微柱分离相结 合的产物,是近年来发展起来的一种高效、 快速的分离技术。
内容简介：
1、功能性低聚糖定义及功能
2、功能性低聚糖的分析方法 3、功能性低聚糖的种类 4、低聚木糖的介绍 5、硫酸水解-高效液相色谱法间接测定蜂蜜中的低聚木糖 6、参考文献
功能性低聚糖的定义
据996年国家公布《功能性低聚糖通用技术规则 行业标准》，功能性低聚糖定义为：
•功能性低聚糖是由2-10个相同或不同单糖聚合 而成； •具有糖类的某些特性，可直接代替蔗糖，作为 甜味配料，但不被人体胃酸、胃酶降解，不在 小肠吸收，可到达大肠；
•具有促进人体双歧杆菌增殖等生理特性。
功能性低聚糖的功能
间接功能：主要指人体服用 后，能促进肠道内双歧杆菌 的显著增殖，从而对机体产 生积极的生理作用的功能。
降血脂； 改善和防 止便秘， 抑制肠内 腐败产物 的生成；
直接功能
提高机体 免疫力， 抗肿瘤；
促进矿物 质的吸收； 抑制病原 菌等

低热量， 难消化； 有水溶性 纤维素的 作用；
• 高效液相色谱与基质辅助激光解析接口 飞行时间质谱分析(matrix-assistedlaser desorption/ionization time-of-flightmass spectrom-etry, MALDI-TOF-MS)联用技术 已被广泛应用于功能性食品成分检测领 域,特别是在低聚糖的检测和分析中有重 要用途。
参考文献
• 龚芳红,张德纯，功能性低聚糖及其检测方法研究的 现状，中国微生态学杂质，2009（2）：177-180 • 刘红梅，刘聚胜，功能性低聚糖的研究及在食品中 的应用现状，食品与微生物，2012（4）：15-19 • 王良东，陈建文，吴嘉麟，功能性低聚糖的制备， 粮食与油脂，2008（7）38-42 • 何国亮,肖 林,李吉平,孙文亮,程少博,白庆林，硫酸 水解—高效液相色谱法间接测定蜂蜜中低聚木糖， 2008（2）：64-67 • 宋新，高效液相色谱法对保健食品中低聚木糖的分 析，中国卫生检验杂志，2008，18（1）：178--179
抗龋齿性；
促进肠道 中双歧杆 菌的增殖 等
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薄层色谱法是在纸色谱 的基础上发展起来的, 以薄层吸附剂为固定 相,溶剂为流动相的分 离分析技术。 缺点：
优点： 该法成本低,速度快,展 开所需时间短。
薄层色谱做糖的分离鉴定只 有在负荷量很小的条件 下才能达到满意效果。, 它的测定误差较大,不易 进行定量分析,所需测定 样品量较多。该法成本 低,速度快,展开所需时间 短。
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缺点：因气相色谱用气体流动 相,被分析样品必须有一定 蒸汽压(在-190~500℃温度 范围内有0.2~10 mmHg柱蒸 汽压),汽化后才能在柱上分 析。糖类没有足够的挥发性, 测定时要预先将其制备成易 挥发,对热稳定的衍生物。
气相色谱法该是在固定 相(stationna-ry phase) 与流动相(mobile phase)所组成的体系 中,利用混合物中各个 组分与两相相互作用 的不同,使其达到相互 分离,从而对各种成分 进行定性、定量测定 的系统分离分析方法。 优点：该技术具有高效、 高速、高灵敏度、样 品用量小等优点。
功能性低聚糖的种类
1、低聚异麦芽糖 2、大豆低聚糖 3、低聚果糖 4、低聚半乳糖 5、低聚木糖 6、其他
低聚木糖
与其他低聚糖相比低聚木糖具有明显双歧杆菌、 乳酸菌增殖效果,是目前发现有效用量最小的低聚 糖(0.7g/ 日) ,因而被称为超强双歧因子或益生元。 低聚木糖是2～6个木糖以糖苷键连接而成的低聚 糖,以木二糖和木三糖为主
• 操作：线图表示 80%乙醇水溶液溶解 1、 取样
减压挥去乙醇水溶液 2、 水解管（内含H2SO4） 冷却定容 定容 水浴水解
离心，取清液
过滤，取清夜，加无水 乙醇定容 水溶过滤
冷却,NaOH 中和 沉淀， 膜过滤
上机检测
滤液吹氮挥去乙醇
• 色谱条件:carbohydrate(WatersNova2pak250×3.9mmi. d4μm) ; 流动相: 乙腈∶水(75∶25v/ v) ; 流速:1.0mL/ min;柱 温:35℃;示差检测器温度:35℃;20μL进样
硫酸水解—高效液相色谱法间接测定蜂蜜中低聚木糖
• 背景：自然界,只发现竹笋和 木薯中天然存在低聚木糖。 功能性低聚糖已添加到多种 食品基质中,形成丰富多样的 低聚糖终端产品。老年蜂蜜 是在蜂蜜中添加3%左右低聚 木糖,一种为防治老年人便秘 而研制的功能食品。 • 原理：建立了蜂蜜中低聚木糖的高效液相色谱测定方 法。用乙醇/ 水沉降蜂蜜中较大分子低聚木糖后,进行 硫酸水解;使用氨基柱,乙腈/ 水为流动相,示差检测器检 测,外标法定性定量分析,同一样品水解前后木糖含量差 值,即为样品中低聚木糖的含量。