培养基模拟灌装试验验证方案(10ml)2011年08月培养基模拟灌装试验验证方案(10ml)验证方案的起草与审批验证小组成员方案起草验证委员会审阅会签方案批准目录1概述 (3)2.验证目的 (3)3风险评估 (4)4验证参考标准 (5)5.验证范围 (4)6.验证职责 (5)7验证前提条件 (5)8 验证批次和时间 (7)9 验证步骤 (8)10培养基的培养和检查 (14)11试验结果评价 (14)12试验结果分析 (15)13风险的评估与接受 (15)14验证结果评审和结论 (15)15方案修改记录 (14)16再验证周期 (14)17附件 (14)1概述本次培养基模拟灌装试验验证是以灭菌的乳糖粉末分装到10ml西林瓶中，整个过程模拟正常的粉针剂品种的分装状态，在盖塞前将胰蛋白胨大豆肉汤培养基灌入瓶内，压塞轧盖后进行培养，确认无菌分装工艺的无菌可靠性。
2.验证目的在各种干扰和最差条件下，评估灭菌工艺、人员更衣、行为习惯、A/B级气流模式、无菌环境的建立、消毒维持方法和物料的传递控制等整个流程的无菌保证水平。
3风险评估经验证小组人员共同对培养基模拟灌装试验验证进行风险评估，对存在的质量风险提出了预防和纠正措施建议，具体见下表：评估人年月日4.验证参考标准4.1 药品生产质量管理规范（2010年版）4.2 药品生产质量管理规范（2010年版）指南4.3 中国药典2010年版（二部）4.4 药品生产验证指南（2003年版）5.验证范围本方案适用粉针车间生产的全过程。
包括：人员更衣、各房间的清洁消毒、物料传递、容器工具的处理、内包材的处理、中控取样、动态下环境监测、无菌分装、轧盖过程，并在分装过程中模拟正常与非正常干扰活动。
方案中还规定瓶子、胶塞和铝盖灭菌后存放有效期的验证。
6.验证职责6.1验证委员会6.1.1负责验证方案的审批，质量副总进行批准。
6.1.2负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。
6.1.3负责验证数据及结果的审核。
6.1.4负责验证报告的审批。
6.1.5验证证书由验证委员会主任批准后，由质量管理部发放，验证文件由质量管理部归档保存。
6.1.6负责再验证周期的确认。
6.2验证小组6.2.1负责验证方案的起草和验证实施。
6.2.2负责验证数据、记录及结果的收集、整理。
6.2.3负责起草验证报告，报验证委员会批准。
6.3设备部6.3.1.负责组织所需仪器、设备的验证。
6.3.2负责设备的维护保养。
6.3.3.负责验证所需设备和HVAC系统、水系统及其他公用工程系统正常运行。
6.3.4.负责生产辅助设施和公用工程系统的操作和清洁。
6.4质量管理部6.4.1负责验证方案的审核。
6.4.2负责生产过程的监控和取样计划的制订。
6.4.3负责取样及对样品的检验并发放检验报告。
6.4.4负责收集验证记录，并加以分析。
6.5粉针车间6.5.1负责组织验证方案的实施。
6.5.2负责合理安排验证生产人员。
7验证前提条件7.1验证中使用的文件是最新版本并已生效(见下表)。
7.2参与验证实施人员都已接受相应的培训和本方案的培训，并考核合格。
7.3粉针车间洁净空调净化系统、纯化水系统、注射用水系统、纯蒸汽系统、压缩空气、车间生产设备、称量衡器及培养室温度分布等已经过验证。
7.4相关物料的准备。
注：乳糖经过辐射灭菌。
8验证批次和时间按本方案连续进行三批培养基模拟灌装，每批灌装的数量大于5000瓶。
9验证步骤9.1模拟灌装试验前确认9.1.1模拟灌装用无菌乳糖溶解性试验称取模拟灌装用乳糖10g，于含胰蛋白胨大豆肉汤培养基为3％的100ml溶液中，在20～25℃的温度条件下，经轻微地振摇应全部溶解。
9.1.2模拟灌装用乳糖微生物生长性试验的确认。
9.1.3胰蛋白胨大豆肉汤培养基的无菌试验的确认。
9.1. 4 胰蛋白胨大豆肉汤培养基的灵敏度试验的确认。
9.2灌装前准备9.2.1培养基灌装试验生产操作流程9.2.2 工衣清洗灭菌，瓶子、胶塞、铝盖、分装机部件和器具按相应岗位SOP的要求进行清洗灭菌后进入分装间。
9.2.3培养基配制：培养基由操作人员按《一般区物料传递岗位标准操作规程》(SOP -0203-ps-001/01)传至器具清洗间，取胰蛋白胨大豆肉汤培养基5瓶（250g/瓶），分成两桶配制，先量取10000ml的注射用水（约70℃）加入洁净的密封桶（65L），缓慢加入培养基1000g，搅拌10分钟，再量取15000ml的注射用水（约70℃）加入密封桶中，再搅拌10分钟。
取第二只洁净的密封桶（65L），先加入6700ml的注射用水（约70℃），缓慢加入培养基750g，搅拌10分钟，再量取10000ml的注射用水（约70℃）搅拌10分钟。
配制后培养基pH值应在7.3±0.2之间。
将胰蛋白胨大豆肉汤培养基溶解完全稀释至浓度为30g/L溶液。
按《XG1.D脉动真空灭菌器标准操作规程》(sop-0203-E-002/01)操作，121℃、20分钟灭菌后，传入分装间A级区。
9.3模拟灌装过程9.3.1培养基冷却至室温后，按《分装岗位标准操作规程》(SOP -0203-ps-007/01)和《KFG300D 抗生素瓶螺杆分装机标准操作规程》(SOP-0203-E-007/01)进行操作，将无菌乳糖按每支0.5g 分装于10ml西林瓶中，按《BT300-1F蠕动泵标准操作规程》(SOP -0203-E-010/01)进行操作，将灭菌的胰蛋白胨大豆肉汤培养基按每支灌装7ml，扣好胶塞后按《ZG300C型抗生素瓶轧盖机标准操作规程》(SOP -0203-E-008/01)轧盖密封，在轧盖后缓冲间收集到不锈钢盘中（每个收集盘装载200支左右）。
按分装时间对每个盛装培养基小瓶的托盘编号，并记录每盘的分装时间。
9.3.2模拟最差生产条件：人数最多，时间最长。
分装人数为8人，轧盖4人；为加大操作人员疲劳程度和考察对产品的影响，模拟灌装超过工艺规程规定时限，时间为8小时，正常生产中午休息1小时。
9.3.3培养基模拟灌装试验操作过程9.3.3.1 7：30至8：30装机。
9.3.3.2灌装量：每支西林瓶分装无菌乳糖0.5g，灌装培养基7ml。
9.3.3.3 8：30装机后装原粉桶，按照《分装岗位标准操作规程》和《BT300-1F蠕动泵标准操作规程》调节装量0.5小时。
9.3.3.49：00开始以2000支/小时速度分装无菌乳糖和灌装培养基30分钟。
9.3.3.5 轧盖爆瓶停机15分钟。
9.3.3.6 中间模拟运行1小时。
9.3.3.7 以2000支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基30分钟。
9.3.3.8 拆装原粉桶0.5小时。
9.3.3.9 以2000支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基30分钟。
9.3.3.10 12：15至13：15操作人员出来吃饭。
9.3.3.11 模拟设备维修1小时，之后用消毒剂对分装机台面上各部件进行擦拭10分钟，调整装量5分钟，自净15分钟，继续分装。
9.3.3.12 以2000支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基30分钟。
9.3.3.13 分装机拨瓶盘错位调整15分钟。
9.3.3.14 模拟运行0.5小时。
9.3.3.15 以3000支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基至结束。
9.3.4灌装培养基的过程中进行各种正常干扰和非正常干扰的模拟。
9.3.4.1正常干扰因素9.3.4.1非正常干扰因素9.4试验过程监测9.4.1西林瓶的无菌检查及有效期验证西林瓶按《KQCL60抗生素瓶立式超声波清洗机标准操作规程》(SOP-0203-E-003/01)进行清洗，按《KSZ620/60型隧道式灭菌干燥机标准操作规程》(SOP -0203-E-006/01)进行灭菌后进入分装间。
9.4.1.1测试方法：每次取6只西林瓶按直接接种法，其中3支放入300ml硫乙醇酸盐流体培养基中、3支放入300ml改良马丁培养基中，同时做阴性对照，分别在23-28︒C和30-35︒C培养14天；逐日观察并记录。
9.4.1.2.判定标准：全部样品和阴性对照管培养14天后液体澄清，不得有菌生长。
9.4.1.3取样时间：试验前（9点取样，存放8h）、试验中（12点取样，存放6h）、试验后（16点取样，存放4h）。
9.4.2.胶塞的无菌检查及有效期验证胶塞按《KJCS-10ES全自动湿法超声波胶塞清洗机标准操作规程》(SOP -0203-E-005/01)清洗、灭菌后出料存放于分装间A级区。
9.4.2.1.测试方法：每次取20只胶塞按直接接种法，其中10只放入100ml硫乙醇酸盐流体培养基中、10只放入100ml改良马丁培养基中，同时做阴性对照，分别在23-28︒C和30-35︒C培养14天；逐日观察并记录。
9.4.2.2.判定标准：全部样品和阴性对照管培养14天后液体澄清，不得有菌生长。
9.4.2.3取样时间为：试验前（8点取样，存放36h）、试验中（11点取样，存放40h）、试验后（15点取样，存放44h）。
9.4.3铝塑盖的无菌检查及有效期验证铝塑盖按《KJSL-12ES全自动湿法铝盖清洗机标准操作规程》(SOP-0203-E-004/01)清洗、灭菌后出料存放于轧盖间A级区。
9.4.3.1.测试方法：每次取20只铝塑盖按直接接种法，其中10支放入300ml硫乙醇酸盐流体培养基中、10支放入300ml改良马丁培养基中，同时做阴性对照，分别在23-28︒C和30-35︒C培养14天；逐日观察并记录。
9.4.3.2.判定标准：全部样品和阴性对照管培养14天后液体澄清，不得有菌生长。
9.4.3.3取样时间为：试验前（8点半取样，存放36h）、试验中（11点半取样，存放40h）、试验后（15点半取样，存放44h）。
9.4.4生产过程环境监测及表面微生物监测9.4.4.1测试方法：参见《浮游菌测试标准操作规程》（SOP-0102-T-005/01）、《沉降菌测试标准操作规程》（SOP-0102-T-006/01）、《悬浮粒子测试标准操作规程》（SOP-0102-T-007/01）、《表面微生物监测标准操作规程》（SOP-0102-T-047/00）。
9.4.4.2.判定标准9.4.4.2.1悬浮粒子9.4.4.2.2微生物动态监测标准9.4.4.3取样计划及取样点取样点见下表。
取样操作参见《洁净区监测管理规程》（SOP-0101-ZL-028/01）。
分装流程图：进瓶转盘（处理倒瓶）分装（上料、装量检查、添加胶塞、卡瓶、堵塞、停机维修、人员进出、环境监测）轧盖（添加铝塑盖、堵盖、环境监测）10.试验样品的培养和检查10.1将试验正常样品和不良样品先置23～28℃培养7天，再置30～35℃培养7天，培养时一半正立，另一半倒置，第7天后交换；第7天观察培养基灌装品的微生物生长情况，并对污染的瓶中的微生物进行总结其特点。