组织培养法制备食用菌母种
一、实验目的
1、学会母种培养基的配制方法。

2、掌握组织分离的方法和技术。

3、掌握无菌操作技术。

二、实验内容
1、母种培养基（马铃薯综合培养基）的配制。

2、菌种分离和培养。

三、实验材料
材料：白玉菇、杏鲍菇、金针菇。

仪器：超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、培养皿、解剖刀、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管、止水夹、牛角勺、棉花、纱布、酒精灯、镊子。

试剂：75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1等。

四、实验步骤
1、母种培养基的配制
培养基配方：
马铃薯200g、葡萄糖20g、磷酸—二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B1 5mg~10mg、琼脂18～20g、水1000ml，Ph5.5～6。

培养基配制：
（1）首先给马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200g，放入铝锅中用1000ml 清水加热煮沸，维持20min左右，煮到软而不烂为止，用双层湿纱布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。

再加入琼脂继续加热，待琼脂熔化后，添加葡萄糖及其他成分，搅拌均匀后装入三角瓶中，塞上棉塞，棉塞上方用牛皮纸包好，用高压灭菌锅进行灭菌。

用牛皮纸包好9个培养皿，一起进行灭菌。

0.1MPa,121℃,30min.
（2）在超净工作台上，将已灭菌的三角瓶中的培养基趁热倒入9个已灭菌的培养皿中，等待凝固之后就可以进行接种了。

2、菌种的分离与培养
（1）种菇的选择与消毒：
选择出菇早，菇形正，菇盖肥厚，具有该品种特征，无病虫害，无杂菌污染，子实体八九分成熟的作为种菇。

种菇选定后，用75%酒精进行表面消毒。

（2）组织块的切取：
将平板培养基放进超净工作台内，用紫外灯（或化学药品）消毒0.5小时以上，关闭紫外灯20min后，再开始进入接种室内进行接种。

用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀，然后用手将菇体掰成两半，在菌柄和菌盖交界处用刀切取0.3—0.5cm3的小方块组织，将其移接到平板培养基上，移植3—4块组织块，要分布均匀。

注：金针菇的菌柄较细，菌盖较小，故可用这种方法分离组织块：左手抓住菌柄，右手持长柄镊子沿菇柄方向去掉菌盖，这时菌柄顶端露出弧形的生长点，取生长点的组织块。

（3）菌丝培养：
接种后置于25℃恒温箱中培养，2—3天后可见组织块周围产生白色绒毛状菌丝，此时每天都要检查杂菌污染情况。

培养7—10天后，菌丝即可长满平板，菌丝长满平板即为一级种（母种）。