ｔｉｍｅ ｅｌａｐｓｅｄ ｓｉｎｃｅ ｂｅ矛ｎｎｉｎｇ ｏｆ ｉｌｌｎｅｓｓ ａｎｄ ｔｉｍｅ“ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ）ａｎｄ‘ｔｉｍｅ ｓｐｅｎｔ ｉｎ ｗａｔｅｒ’． ‘Ｔｉｍｅ ｏｆ ｄｅａｔｈ’ｉｎ
ｔｌｌｅ ｌｉｓｔ ａｂｏｖｅ ｉｓ ｔｈｅ ｃｅｎ仃ａｌ ｐｏｉｎｔ ｏｆ ｄｉｓｃｕｓｓｉｏ ｎ． Ｂｅｌｏｗ ｉｓ ａ ｂｒｉｅｆｉｎｇ ｏｆ ｓｏｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｍｅｎｔｉｏｎｅｄ ａｂｏｖｅ，
类物质。（１）Ｎａａ：主要存在于神经元及轴索，被认 为是神经元的内标志物，Ｎａａ的降低反映了神经 元的脱失，或其能量代谢障碍；（２）Ｃｈｏ：是乙酰胆 碱的前体。Ｃｈｏ峰增高。代表细胞分裂增值活跃 及细胞膜代谢异常增高，Ｃｈｏ下降则代表细胞缺 失或损伤；（３）ＰＣｒ，Ｃｒ：存在于神经元和胶质细胞 中，是细胞内的磷酸转运系统和能量缓冲系统， 作为高能磷酸盐的储备形式和ＡＤＰ及ＡＴＰ的缓 冲剂，与能量代谢有关，见图８。
积分光密度
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在肺脏中异型指数、积分光密度和平均灰度的测 量效果较好；脾脏的灰度、色度、光密度等多种参 数与死亡时间的相关性均较好。有关结果见图 １～４。¨２ｌ
此后，我单位开始收集人体标本进行实验， 分别推导出不同脏器ＤＮＡ降解程度关于死亡时 间的回归方程，【Ｂ，１４】相关结果如下：
肝平均灰度（ＡＧ）ＡＧ＝０．０１ １１ｒ１１２＋Ｏ．６２６８Ｔ＋１５２．２４ 积分光密度（ＩＯＤ）ＩＯＤ＝Ｏ．００１５１屯０．１４９９Ｔ＋１９．２８６
ｙ觎ｇ死吼￡Ｄ，喁尺ｅ凡￡泗嚼ｅ￡以，砸Ｍ缈矿而ｒｅ邶如肘ｅｄ如ｉ聊，％，珂ｉ朋ｅ如以ｃ０肌鲈矿Ｈ眦＝胁昭跏如ｅｒｓ渺矿
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ｃｅｎ衄ｌ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ １ Ｉｎ ｎｕｍｅｍｕｓ ｐｍｂｌｅｍｓ ｅｎｃｏｕｎｔｅｒｅｄ ｉｎ ｆ０Ｉｅｎｓｉｃ ｐａ山ｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｉｓｓｕｅ ｉｓ ｏｆ
ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｄｏｎｅ ｂｙ ｔｈｉｓ ｆａｃｕｌｔｙ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｐｏｓｔｍｏｒｔｅｍ ｉｎｔｅｎ，ａ１，ＤＮＡ，ＲＮＡ，Ｍａｇｌｌｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｓｐｅｃｔｍｓｃ叩ｙ
死亡时间（Ｐｏｓｔｍｏｒｔｅｍ Ｉｎｔｅｎｒａｌ，ＰＭＩ）是指死 后间隔时间。死亡时间推断（Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｉｍｅ Ｓｉｎｃｅ Ｄｅａｔｈ）是指检查尸体时距死亡时刻 的间隔时间的推测和判断，是法医实际工作中首 先要解决的重要任务之一。准确地推断死亡时 间，在为案件侦查提供线索，划定侦查范围，确定 犯罪嫌疑人有无作案时间或确定案件性质和阐 明作案过程等方面均有重要意义。传统的死亡时 间推断方法。主要是根据不同时期的尸体现象及 胃内容物消化程度来进行。近年来，随着科学技 术的不断进步。国内外许多法医学者应用物理
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Ｅ、，ｊ缸ｅｌ虻ｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｖ０１．１６ Ｎｏ．２ ２００８
死亡时间——当今中国法医病理学研究的热点及难点
刘 良＋
杨天潼 任亮
朱少华
陈晓瑞
刘茜
（华中科技大学同济医学院法医学系。武汉４３００３０）
易少华
【摘 要】在法医病理学研究的诸多重要问题中，时间问题无疑是其中的一个热点问题，同时也是一个 难点问题。法医病理学中的时间问题主要包括：死亡时间、损伤时间、猝死者病理学标本能够诊断的时间（包
ｈ眦咖轴ｂｊｅｃｔ ａｆｔｅｒ ｄ朗ｍ·ａｆｋｒ ｄ髓ｍ ｏｆ
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温度下对方程进行校验。最终将得到的方程集成 于电脑软件程序，以便于推广和应用，见图５。限１４】
二、ＲＮＡ降解与死亡时间的关系
随着分子生物学的发展，时间依赖性的核酸 降解逐渐成为关注的焦点。相对于ＤＮＡ而言，一 般认为ＲＮＡ在死后会迅速降解。然而近年的研 究揭示．在某些组织器官内ＲＮＡ具有相当高的 稳定性。
括发病多久可以诊断及保存多久可以诊断）、水中经过时间等，其中尤其以死亡时间为研究热点。现结合本单
位的研究结果．就死亡时间推断问题做一介绍。
【关键词ｌ死亡时间；ＤＮＡ；ＲＮＡ；磁共振波谱
【中图分类号】Ｄ９１９．１
【文献标８）０２—０２３４—０８
Ｐｏｓｎｎｏｎ哪ｈｌｔｅｒ、，ａｌ徂砌ｆ砌缸口耐珑舷掰摩而跏ｆ盯月甜唧℃＾伽肋彤瑚缸肭口魄ｙ加硼妇．￡ｉｕ￡面粥
。刘良，华中科技大学同济医学院法医学系教授，博士生导师。
秘据率怿２００８年第１６卷（第２期）
逐渐降解，呈现下降的趋势，并表现出一定的规 律。某些位于体内的脏器和组织，死后变化受环 境因素的影响较小，在一定的时间内其细胞的变 化和ＤＮＡ的降解呈现一定的稳定性，这种现象 为通过“对ＤＮＡ降解规律的研究来判断死亡时 间”提供了客观基础。
脾异形指数（ＩＤ）Ｔ＝１１．３３４ＩＤ一３３．３３９ 平均灰度（ＡＧ）ＡＧ＝１．３５９Ｔ＋８２．４８５ 平均光密度（ＡＯＤ）ＡＯＤ＝一０．００５２Ｔ＋０．４６１８ 积分光密度（ＩＯＤ）１０Ｄ＝一０．１３８９Ｔ＋１３．８９
脑平均灰度（ＡＧ）７ｒ－一８７．７６７＋０．７８３ＡＧ 平均光密度（ＡＯＤ）Ｔ＝６３．７２５—１０６．２３７ＡＯＤ 积分光密度（１０Ｄ）Ｔ＝８４．４３４—４．１０３ＩＯＤ
我单位利用ＲＴ—ＰＣＲ技术检测２０℃环境下 大鼠死后的组织样本管家基因ｍＲＮＡ的含量。 发现在死后相当长一段时间内。管家基因ｍＲＮＡ 可被检测到扩增产物。大鼠死后２８ ｈ内仍能检 测到视网膜组织管家基因Ｂ—ａｃｔｉｎ、印１４、ｐｇｋｌ ｍＲＮＡ有效扩增产物，且其产物含量随着死亡时 间的延长而减少，见图６。
Ｆｉｇ．３ Ｃｈｎ薛ｉｎＤＮＡ ａ嘲（Ａ）ｉＩＩ ＵＶｅｒ ｃｅｕｓ唧ｄｅｉ耐ｔｈＰＭＩ，３６ ｈ ａｆｋｒ ｄ∞也０ｆｈ岫蛆辄ｂｊｅｃｔ
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三、利用磁共振波谱技术推断死亡时间
磁共振波谱技术（Ｍａｇｎｅｔｉｃ ＲｅｓｏｎａＩｌｃｅ Ｓｐｅｃｔｌｌｌｍ，ＭＲＳ）是一种利用磁共振现象和化学位 移作用进行一系列原子核和化合物分析的新技 术，它不破坏被检查组织，可检查至生化代谢及 基因水平，是目前惟一无创显示组织的影像学方 法，可以在同一实验条件下，一次性检测多种代 谢物。核磁共振的这种技术特点，能够尽可能避 免在不同实验平台、不同实验技术条件下，多次 检测多种物质所带来的实验误差，见图７。
国内也有人利用ＲＴ—ＰＣＲ技术对２０℃环境 下大鼠死后的组织样本Ｂ—ａｃｔｉｎ ｍＲＮＡ的含量变 化情况进行观察，结果显示胸肌、膈肌在死后６ ｄ 内Ｂ—ａｃｔｉｎ ｍＲＮＡ都可以检测，而肺脏、心脏Ｂ— ａｃｔｉｎ在死后１２ ｄ也可以检测，且扩增产物呈下 降趋势。
作者认为，死后尸体的不同器官组织ｍＲＮＡ 分解时间规律不同：而同一器官的ｍＲＮＡ在不 同时间点的降解程度也有差别，呈逐渐下降趋 势：同一器官组织的不同ｍＲＮＡ具有类似的降 解程度。
其变化趋势为：不同温度下（１０℃及３０℃） Ｎａａ／Ｃｒ、Ｃｈ／Ｃｒ之间无显著性差异，说明Ｎａａ／Ｃｒ、Ｃｈ／ Ｃｒ变化对温度不敏感，检测Ｎａａ／Ｃｒ、Ｃｈ，Ｃｒ可消除 温度对死亡时间推断的影响，见图９、１０，表１。
考虑到温度对ＤＮＡ降解速率的影响．作者 将收集的人体标本分为两份分别置于４℃和室 温状态下，测定不同温度下ＤＮＡ降解程度，并根 据这些资料推导计算死亡时间的回归方程。
我单位目前正在进行多个脏器ＤＮＡ降解程 度的死亡时间多参数方程方面的研究。并在不同
０ｈ
６ｈ ｌＯｈ １６ｈ ２４ｈ ２６ｈ ２８ｈ ３０ｈ
ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ
ａｎｄ ａｌｓｏ ａ ｄｉｍｃｕｌｔ ｐｏｉｎｔ ｔｏ ｅｌａｂｏｍｔｅ．‘Ｔｉｍｉｎｇ’ｉｎ ｆｏｒｅｎｓｉｃ ｐａｔｈｏｌｏｇ）ｒ ｍａｉｎｌｙ ｉｎｖｏｌｖｅｓ‘ｔｉｍｅ ｏｆ ｄｅａｔＩｌ’，‘ｔｉｍｅ ｏｆ ｉｎ－
ｊｕｒｙ’，‘ｐａｔｈ０１０９ｉｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｉｍｉｎｇ ｏｆ ｓｕｄｄｅｎ ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ ｎａｔｕｒａｌ ｄｅａｔｈ’（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ
学、化学、生物物理学、生物化学、组织化学、免疫 组织化学及分子生物学等诸多学科的新仪器和 技术，研究尸体冷却规律和体液、组织及细胞的 各种指标变化，提出了多种推断死亡时间的方 法，开辟了许多死亡时间推断新的领域。
一、图像分析ＤＮＡ降解推断死亡时 间
ＤＮＡ作为生物体的遗传物质。具有稳定性 好、受外界影响小等特点。目前研究表明，机体死 亡后，细胞内ＤＮＡ的含量随着死后时间的延长
．…一…………～………………一。 死亡时闻
－…ｒ’’实测值——趋势线｝
图１大鼠死后３２ ｈ内脾细胞核积分光密度参数
ｐａ咖ｅｔｅｒ 矾ｇ．１ Ｔｌｌｅ ｉｎｔｅｇ聃ｌ叩廿ｃａｌ ｄｅＩｌｓｉｔｙ
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ｍｅ髓ｔｗｉ伽ｎ ３２ｈ ａｆ时ｄ衄ｍ
图３人死后３６ ｈ肝细胞核ＤＮＡ面积（Ａ）随ＰＭＩ变化的趋势
ｐ０｜ｓｔｍｏｎｅｍ
大鼠死后４０ｈ内的肾、脾组织及死后４８ｈ 内的肝组织样本。仍能检测到管家基因ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ有效扩增产物，其产物含量随着死亡时间 的延长而减少。大鼠死后４８ｈ的肾、脾组织。７２ｈ 的肝组织，Ｂ—ａｃｔｉｎ ｍＲＮＡ有效扩增产物仍能检 测到，其产物含量随着死亡时间的延长而减少。
图４人死后３６ ｈ肝细胞核ＤＮＡ平均光密度（Ａｖｅ陋ｇｅ
图２大鼠死后２４ ｈ内肝细胞核异形指数
ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓ时，ＡｏＤ）随ＰＭＩ变化趋势
研昏２ Ｔｈｅｊｎｄ麟０ｆｄ蛐西１）ｒ ０ｆｌｉＶｅｒ ｃｅ№０ｆｍｅ抛ｔ ｗｉ￡岫ｎ ２４ｈ
ｎ昏４ Ｃｈａｎ薛ｏｆＡｏＤ聊咀Ｅ刑Ａｆｈｍ ｎｖｅｒ∞Ⅱｓ ｎｕｄｅｉ ３６ｈ
在利用ＭＲＳ检测脑物质含量的死后变化规 律时。我单位初步研究了氮一乙酰天门冬氨酸 （Ｎａａ）、胆碱（Ｃｈｏ）、磷酸肌酸和肌酸（ＰＣｒ／Ｃｒ）等３