菌株：菌株又称品系，表示任何由一个独
立分离的单细胞(或单个病毒粒子)繁殖而成的 纯种群体及其后代。因此,一种微生物的每一个 不同来源的纯培养物均可称为该菌种的一个菌 株。
3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培 养基：
KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O
葡萄糖
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
①在此培养基中哪些作为碳源、氮源？

碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
②从物理性质看此培养基属于哪类？功能上 属于哪类？
固体培养基、选择培养基
此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？
原则上能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而 生存。但实际实验中有些细菌可以以其他细菌代谢产生 的废物生长，因此需进一步鉴别
注意：◆应在火焰旁称取土壤10g。
◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 ◆稀释倍数为 101 ～106。初次范围宽些稀释101 ～107， 稀释试管按梯度排序,并编号
㈣.取样涂布
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
细菌 放线菌
真菌
稀释倍数
104、105、106
103、104、105 102、103、104
设置对照的目的：
排除实验组中非测试因素对试验结果 的影响，提高实验结果的可信度。
阅读P22～23页“（三）设置对照”一段讨论教材中提出 的问题。
(1)A同学出现此结果的可能原因？
⑴土样不同 ⑵培养基污染 (或混入了其他的含氮物质)
(2)设置对照实验，帮助A同学排除上述两个可能影响实验 结果的因素？
目的
保证获得菌落 数在30～300 之间、适于计
数的平板
原因：不同微生物在土壤中含量不同
看课本P22，并讨论你认为这两位同学的作法正确吗？如 果有问题，错在哪？
第一位同学：没有重复实验（至少涂布3个平板） 第二位同学：21个结果误差过大，不应用于计算平均值，
应取30——300的平板进行计数
(三)设置对照实验
本实验放在30℃培养，比较牛肉膏蛋 白胨培养基和选择培养基中菌落数量、形 态并记录
（六）菌落计数
1、在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 2、选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养 时间不足而导致遗漏菌落的数目。 3、在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数然后 求平均值。 4、对于不同稀释度下按下面情况计算：选择平均菌落数 在30-300之间的， ①当只有一个稀释倍数的平均菌落数符合此范围时，则 以该平均菌落乘以稀释倍数即得 ②若有两个平均数在30-300之间，则按两者比值来决定， 比值小于2，算平均数。若比值大于2取较小的菌落总数
（二）制备培养基
制备选择培养基（尿素为唯一氮源） 制备牛肉膏蛋白胨培养基
思考？为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？ （对照作用）
相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目 应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨 培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了 选择作用。
[三]样品稀释
实验流程：
土壤取样 制备培养基 样品稀释涂布平板 微生物的培养与观察
菌落计数
（一）土壤取样
“微生物的天然培养基” 数量最大、种类最多 大约70%—90%是细菌
从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲 去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好 的信封中。 注意◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用 前都要灭菌。操作要在火旁（称、装、稀释等）
课题2 土壤中分解尿素的细菌的
分离与计数
一、课题背景(理论基础)
1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之 后才能被植物利用。
2、细菌利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
CO(NH2)2 + H2O
脲酶
2NH3 + CO2
3、课题目的
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 结果预测：如果结果与A同学一致培，养则基证的明配_A__无_误__；
如果结果不同，则证明A同学存在__________________ 制__有__问__题__。__
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进 行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。
培养基选择分解尿素的微生物的原理：
培养基中尿素为唯一氮源，只有能合成脲酶 分解尿素的微生物才能生长、发育、繁殖
4 选择培养基： 在微生物学中，将允许_特__定__种__类__的__微__生__物__生__长___，同 时_抑__制__或__阻__止__其__他__种__类__微__生__物__生长的培养基。
启示：寻找目的菌种时要根据它对_生__存__环__境__的__要__求__，到 相应的环境中去寻找。
筛选原因: 因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物， 使耐热的Taq细菌保留下来。
2、实验室中微生物的筛选原理（同实例）：
人为提供有利于目的菌株生长的条件( 包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其 他微生物生长。
结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂 布平板等方法对它进行纯化培养分离。
5、怎样证明此培养基具有选择性呢？
培养基类型
是否 接种
目的
结果
实验组
以尿素为 唯一氮源
是
分离 只生长尿 尿素 素细菌
的培养基
细菌
牛肉膏 对照组 蛋白胨
培养基
是
判断该 培养基 有无选
生长多种 微生物
择性
二、实验设计
每个稀释度均用3个选择培养基和1个牛肉膏蛋白胨培养 基（原因？）。初次范围宽些稀释101 ～107，涂布平板选 103 ～107 ，取小于0.1ml, 注意◆实验时要对培养皿作好 标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。
㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样
的细菌
一.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
一、研究思路
(一)筛选菌种
1 实例：寻找耐高温的DNA
聚合酶
PCR技术：要求使用耐高温（930C） 的DNA聚合酶。
Taq细菌
寻找
寻找
耐高温的酶
耐高温生物体
耐高温环境（热泉、火山口）