板时所用稀释液的体积为0.1ml）
(B )
A. 2.34×108
B. 2.34×109
C. 234
D. 23.4
每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M
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(三)设置对照实验
设置对照的目的： 排除实验组中非测试因素对试验结果的影响，提 高实验结果的可信度。
阅读P22～23页“（三）设置对照”一段讨论教材中提出 的问题。
使耐热的Taq细菌ppt课保件.留下来。
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2 实验室中微生物的筛选原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、 温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
思考：
该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和 氮源的分别是什么物质？
碳源：葡萄糖、尿素 ppt课件. 氮源：尿素
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此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 原则上能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而 生存。
白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起
到了选择作用。
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（三）样品稀释涂布平板
稀释倍数为 101 ～106。每个稀释度均用3个选择培养
基和1个蛋白胨培养基。 ppt课件.
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（四）微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。
细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
菌落
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三、操作提示
[一]无菌操作
1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形 瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。
[二]做好标记
注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。
[三]制定计划
课题背景
尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 只有被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用
脲酶 CO(NH2)2 + H2O ppt课件.
CO2 +2NH3 1
课题2 土壤分解尿素的细菌的分 离与计数
课题目的
1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌
2.统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
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一、研究思路
(一)筛选菌种
1 实例：寻找耐高温的DNA
聚合酶
PCR技术：要求使用耐高温（930C） 的DNA聚合酶。
Taq细菌
寻找
寻找
耐高温的酶
耐高温生物体
耐高温环境（热泉、火山口）
启示：寻找目的菌种时要根据它对_生__存__环__境__的__要__求__，到 相应的环境中去寻找。
筛选原因: 因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进 行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。
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这个实例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少
二、实验设计
实验流程：
土壤取样
制备培养基 样品稀释涂布平板
微生物的培养与观察
菌落计数
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（一）土壤取样
“微生物的天然培养基” 数量最大、种类最多 大约70%—90%是细菌
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看课本P22，并讨论你认为这两位同学的作法正确吗？如 果有问题，错在哪？
第一位同学：没有重复实验（至少涂布3个平板）
第二位同学：A组结果误差过大，不应用于计算平均值
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计算公式：
某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数
的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平
3 选择培养基： 在微生物学中，将允许_特__定__种__类__的__微__生__物__生__长___，同 时_抑__制__或__阻__止__其__他__种__类__微__生__物__生长的培养基。
结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂 布平板等方法对它进行纯化培养分离。
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如何对细菌进行计数？
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养
时间不足而导致遗漏菌落的数目。
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不同种类的细菌形成的菌落，在大小、形状、光 泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一度的特 征，菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。
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菌落
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1 显微镜直接计数：Fra bibliotek利用血球计数板(血细 胞计数板），在显微 镜下计算一定容积里 样品中微生物的数量。
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2 稀释涂布平板法（间接计数）
101
102
103
104
105
106
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(二)统计菌落数目
方法 运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。
原理
1个菌落←1个活菌
注意事项
①选择菌落数在30～300的平板上计数。 ②需培养计算出三个或三个以上的平板菌 落求平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
(1)A同学出现此结果的可能原因？
⑴土样不同 ⑵培养基污染 (或混入了其他的含氮物质)
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(2)设置对照实验，帮助A同学排除上述两个可能影响实 验结果的因素？
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明_A__无_误__； 如果结果不同，则证明A同学存在培__养__基__的__配__________ 制__有__问__题__。__
从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去 表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信 封中。
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（二）制备培养基 制备选择培养基（尿素为唯一氮源） 制备牛肉膏蛋白胨培养基
思考？为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？ （对照作用）
相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落
数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋
相接近，说明操作成功。
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五、课题延伸
1.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养 某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能 够分解尿素。
2.测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用 细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红-美蓝 培养基上 培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大 肠杆菌的数量。
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四、结果分析与评价
1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是 否筛选出菌落？
对照的培养皿无菌落说明培养基没有污染。 牛肉膏培养基的菌落数目多余选择培养基的菌 落数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。
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四、结果分析与评价
2.获得某一稀释度下，菌落数30～300的平板， 在这以稀释度下是否至少有两个平板的菌落数相 接近？