• 大多数骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白
本周氏蛋白
起因 结果
浆细胞增生症
血液中出现游离轻链 尿液中出现
影响
骨髓瘤 巨球蛋白血症 CLL慢性白血病 MGUS .....
肾小管损伤 淀粉样病变 轻链沉淀病
本周氏蛋白阳性患者
• 多表现为肾脏损害 • 极易误诊为慢性肾炎 • 轻链有3种形式出现在血清或尿中
– 正常的轻链过剩
– 其他系统性疾病 (自动免 疫系统, 癌症,…)
– 中毒现象 (重金属, 药物 中毒,…)
• 此时, 我们可以在尿蛋白中发 现白蛋白和其他大分子量蛋白 (大于 67 kDa)。
肾小管的再次吸收功能
• 在肾小球中被过滤掉的小分子蛋白， 分子量小于 67 kDa, 将会在肾小管内被重新吸收 (内吞作用).
尿蛋白检测
初级分析是否有蛋白增加
-直接进行总尿蛋白浓度测定
进一步分析:
蛋白尿类型 本周氏蛋白类型 特异蛋白定量
定量分析蛋白尿
• 筛查
- 溴酚蓝试纸条检测(> 150 - 200 mg/L ):蛋白尿阳性变蓝， 本周氏蛋白时会产生假阴性
• 定量检测方法
- 比浊法（不建议使用） - 建议采用比色法（焦性没食子酚红，考马斯蓝）
99% 的在肾小球内被过滤的蛋白, 都将会被重新吸收利 用. 例如, 18 g/24-h 白蛋白将会被过滤掉;
30 mg/24-h 白蛋白在人的尿液中被发现.
肾小管损伤
• 肾小管损伤将会改变其对小蛋白 分子的重新吸收能力 (小于67 kDa 的蛋白)
• 产生原因
– 遗传原因 (Fanconi syndrome) – 代谢性疾病 (糖尿病, 草酸中毒) – 免疫球蛋白单克隆扩增(myeloma,
Waldenström) – 药物作用(氨基甙类抗生素 ) – 中毒 (金属中毒,氨基甙类)
• 白蛋白 (<30%) 及其它小分子蛋白 (小于 67 kDa) 都将会在尿液中被找 到。
> 67> 6k7Da
kDa
<<6677kDa
kDa
混合性损伤
• 混合性蛋白尿
> 67kDa
< 67kDa
• 肾脏病变同时或相继
累及肾小球和肾小管
时而产生的蛋白尿。
• 各组分所占比例因病 变损害部位不同而不 一致。
尿液的收集和保存
•尿液收集:
- 24小时尿
- 晨尿中段
•要注意是否为间歇性蛋白尿 •保存
- 新鲜尿液 - 4°C保存最多一周 - 注意防腐，避免反复冻融（导致IgG浓度降低） - 检测前离心(10min 3000 rpm）
本周氏蛋白电泳检测对象
• 肾病 • 不明原因水肿 • 尿蛋白阳性 • 血清蛋白电泳提示“M蛋白” • 尿SDS蛋白电泳提示“轻链”存在 • 骨髓瘤患者 • 其他淋巴系统恶性增殖性疾病
– 淋巴细胞白血病 – 浆细胞型白血病
kob-khun
寇布库恩
本周氏蛋白（Bence-Jones
• Henry Bence JPonreost于ei1n8s4,4B年JP在)一个骨髓瘤患者
尿中发现的一种具有特殊凝溶性质的蛋白
• 该种蛋白40－60℃发生沉淀，加热煮沸时溶解， 冷却后又沉淀。后被证明是单克隆的免疫球蛋白轻 链二聚体。
室温
90~100℃
50~60℃
参考泳道 重链 复合轻链
游离轻链
免疫球蛋白
• 免疫球蛋白是机体的正常生理成分
• 多克隆
• 分类
抗游离轻链抗血清结合位置，
不能与完整抗体的轻链结合
– 重链：IgG、IgA、IgM 、 IgD、IgE
– 轻链：κ、λ
– 10种类型
抗复合轻链抗血清结合位置
本周氏蛋白检测结果解析
游离kappa 复合kappa
r
r
肾小管性蛋白
( 67kDa<)
临床病例
MW
2 : Light chain myeloma轻链性骨髓瘤 4 : Macroscopic Hematuria肉眼血尿
5: Overload Proteinuria
with polymerised BJ 本周氏蛋白多聚体
非浓缩尿蛋白电泳的优点
本周氏Bence-Jones蛋白 检测
游离lambda
Lambda Bence Jones protein
(G, A or M) kappa kappa Bence Jones
2 different levels of polymerization
Bence Jones?
1. Bence Jones suspected 1. Bence Jones lambda (polymeri 2. No Bence Jones suspected 2. No Bence Jones 3. Bence Jones suspected 3. Bence Jones lambda 4. Bences Jones suspected 4. Bences Jones kappa (polymeri
溢出性蛋白尿
血浆中相对分子质量较小或阳 性电荷蛋白异常增多
经肾小球滤过，超过肾小管重 吸收能力 形成蛋白尿。
肾小球滤过、肾小管重吸收均 正常。
> 67kDa
< 67 kDa
肾前性(溢出)蛋白尿
常见蛋白种类及疾病
游离轻链
见于多发性骨髓瘤
ß2微球蛋白 见于淋巴组织增生综合征
溶菌酶 见于部分急性粒细胞白血病
注 : (Cystatin C),血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C
5 PROTEINURIE
14.3 KDa 26.6 KDa
67 KDa 150 KDa
肾小球性蛋白尿
血清
Glomerular proteins ( > 67kDa) 肾小球性蛋白
肾小管性蛋白尿
Se
Se
Tubular proteins
尿蛋白电泳 提供更全面的蛋白信息
在 HYDRAGEL 5 PROTEINURIE 凝胶上 主要的尿蛋白 电泳条带区域分析
起源于肾小管 的各类蛋白
(分子量 < 67 kDa)
白蛋白(分子量 : 67 kDa)
起源于肾小球 的各类蛋白
(分子量 > 67 kDa)
Cystatin (MW : 11 kDda) b2-微球蛋白 (MW :12 kDa) 溶菌酶 (MW : 15 kDa)
血红蛋白 溶血性疾病,血型不合输血
α1酸性糖蛋白 见于支气管肺癌
肌红蛋白
……
挤压伤,心肌梗死
7
肾后性蛋白尿
• 来源于肾小管代谢产生的、组织破坏分
解的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋 白质，进入尿液而形成的蛋白尿。
肾性蛋白尿
• 肾小球性蛋白尿 肾小球滤过膜因炎症、免疫、代谢等因素损伤后滤过膜
孔径增大、断裂和（或）静电屏障作用减弱。 根据滤过膜损伤程度及尿蛋白的组分，尿蛋白分为2类：
肾小球过滤
• 大分子量蛋白（主要为＞67kDa）无法透过肾小球进入 肾小管
• 其他决定各种蛋白被过滤的因素 : 分析形状, 带电量, 血 浆浓度.
• 还有一些血液动力学因素可影响蛋白的过滤.
肾小球损伤
• 原因
– 糖尿病
– 感染性损伤 (细菌感染, 乙肝患者, 水痘, 梅毒, 单 核白血球增多症 ,…)
（1）选择性蛋白尿（selective proteinuria）：相对分子质量 中等的清蛋白为主
（2）非选择性蛋白尿（non-selective proteinuria）：以相对 分子质量较大和中等的蛋白质同时存在为主。反映肾小球毛细 管壁有严重断裂和损伤。 • 肾小管性蛋白尿
肾小管在受到感染、中毒损伤或继发于肾小球疾病时， 因重吸收能力降低或抑制，而出现的以相对分子质量较小的蛋 白为主的蛋白尿。
• 慢性肝病、红斑狼疮等多克隆增殖ห้องสมุดไป่ตู้疾病
– 伴随轻链 – 单一轻链
本周氏蛋白免疫固定电泳方法
仪器： Sebia 琼脂糖凝胶电泳仪 试剂：本周氏蛋白电泳试剂
方法： 点样，电泳，加抗体反应， 条带检测
ELP 泳道: 固定液 GAM 泳道： 抗IgG .A.M重链抗血清 K 泳道： 抗 轻链抗血清 L 泳道： 抗 轻链抗血清 Kfree 泳道： 抗游离 轻链抗血清 L free 泳道： 抗 游离轻链抗血清
视黄醇结合蛋白(MW : 21 kDa)
游离轻链 (MW 25 kDa) a1-微球蛋白 (MW : 33 kDa) 游离轻链的二聚体
(MW 50 kDa)
转铁蛋白 (MW : 80 kDa)
Ig G (MW : 160 kDa) Ig A (MW : 165 kDa) 结合珠蛋白
a2-巨球蛋白 (MW :900 kDa) 加样位置
尿中总蛋白的定量分析 无法检测到
低浓度的本周氏蛋白
特异蛋白测定
•免疫法定量测定
▪ 肾小球性标志蛋白:
Albumin, IgG, Transferrin
▪ 肾小管性标志蛋白:
b 2 microglobulin, RBP, a1 microglobulin
如果需要更多的特异蛋白信息，需要 更多的测试