一、实验室器具洗涤工艺流程:浸、刷、冲、涮、干、存。
洗净判定标准:透明锃亮,内外壁水膜均一,无成股的水流或不挂水珠。
二、无菌室及培养室的日常维护方法:1 启用时清扫擦拭灰尘;2 定期、不定期给予紫外线照射,用来苏尔、福尔马林、双氧水、漂白粉等消毒房间。
三、外植体消毒的一般程序(菊花为例):选取幼苗——切下合适外植体——流水冲洗10-30min——75%酒精泡30s(倒入废液桶)——0.1%升汞泡10min(倒入升汞回收瓶)——无菌水洗三至五遍。
四、与固体培养基凝固有关因素:1 琼脂浓度过高或用量不足;2 灭菌时间过长或灭菌时未排气;3 灭菌温度过高;4 ph值过酸或过碱;5、操作失误。
五、无菌操作技术要点:1 组培室消毒处理;2 超净工作台开紫外线照射10-20min送风;3 严格消毒外植体;4 已消毒的外植体接触的所有工具、器皿,包括空气均须是无菌的。
六、高压灭菌锅的使用方法:1 开盖:向左旋转移动手轮数圈,直至移动到顶,使锅盖充分提起,拉起左力柱上的保险栓,侧向推开横梁; 2 通电:插好插头,将控制面板上的电源开关按至on处;3 加水:加入约8L淹没发热管;4 堆放:各包之间应留有一定的间隙,勿将灭菌包堵住安全阀气孔;5 密闭:使锅盖与锅体充分密合,绿灯亮时,表示容器密闭到位;
6 灭菌:控制面板上的加热灯亮,待指针指向0.05mp时打开排气阀让少量蒸汽排除,待排尽后关闭排气阀,可以达到灭菌温度均衡的目的;
7 排气:灭菌完成,关闭电源开关,拔掉插头,待压力表指示为零后,开启安全阀,放尽气体;
8 起盖。
七、污染率=100%污染数/总接种数成活率=100%成活的/未污染的
八、继代培养的目的:愈伤组织在培养基上生长一段时间后,营养物枯竭,水分散失,并已经积累了一些代谢产物,此时需要将这些组织转移到新的培养基上,为植株生长提供营养物质。
九、菊花快繁生根培养,选择1/2MS作为培养基的原因:选择1/2MS作为培养基,即降低了无机盐的含量,降低了渗透压,有利于芽系从培养基中吸水,促进根的生长。
十、大蒜脱毒的方法及原理:方法:选择品种和母株——获取茎段——芽段消毒——剥离茎尖接种—分化成苗——保存无毒试管苗——扩展或试管诱导——原种——生长种。
原理:由于病毒在植株体内分布不均匀,存在于根尖,茎尖部分病毒含量低,或无病毒,以茎尖作为外植体,能获得脱毒植株,供繁种、生产使用。
十一、配方1/2MS+BA2.0+NAA0.05+蔗糖3%+琼脂0.7%+PH5.4的含义:1/2MS:降低了无机盐的含量,降低了渗透压,有利于芽系从培养基中吸水,促进根的生长;BA2.0+NAA0.05:即BA=2.0mg/L,NAA=0.05mg/L,Ni=BA/NAA=40,根据植物生长激素CTK/AUK生长调控理论,Ni值越大,越有利于跟的生长。
配置方法:1、洁净的白色搪瓷杯,取蒸馏水700ml,待冒白气加入7g琼脂搅拌至溶化后,加30克蔗糖溶解;2、移取母液(1/2MS):用移液管分别量取MSI 25ml、MSII 5ml、MSIII 5ml、MSV 5ml、MSIV 5ml,取1mlNAA 加入其中;3、将上述溶液定容至1000ml调节ph至5.8; 4、趁热分装,包扎封口;5、高压灭菌锅灭菌15-20min,降温冷却,备用。
十二、快繁的技术路线:取植物外植体——(j1)-诱导丛生芽——(j2)-丛生芽增值——(j3)生根——再生根
十三、大蒜脱毒的工艺流程:选择品种和母株——获取茎段——芽段消毒——剥离茎尖接种—分化成苗——保存无毒试管苗——扩展或试管诱导——原种——生长种。
十四、大蒜脱毒效果检测方法:
十五、简述配500mlMS+BA0.5+NAA0.2+蔗糖3%+琼脂0.7%+PH5.6的过程:1、洁净的白色搪瓷杯,取蒸馏水300ml,待冒白气加入3.5g琼脂搅拌至溶化后,加15克蔗糖溶解;2、移取母液(1/2MS):用移液管分别量取MSI 25ml、MSII 5ml、MSIII 5ml、MSV 5ml、MSIV 5ml,
取2.5mlBA,1mlNAA 加入其中;将上述溶液定容至500ml调节ph至5.6;4、趁热分装,包扎封口;5、高压灭菌锅灭菌15-20min,降温冷却,备用。
十六、组培中外植体污染原因及预防措施:原因:1、培养基灭菌不彻底;2、外植体、工具器皿、空气中本身带毒;3、操作不规范。
预防:1、保持已消毒的外植体接触的所有工具、器皿。
包括空气均是无菌;2、操作规范、认真对待;3、外植体取材要正确小心,消毒时应该彻底。
十七、菊花快繁实验中,请写出所用到的三种培养基,并用器官分化理论简单作出分析
十八、某组培公司计划扩繁非洲菊,拟用配方为:MS+BA2.0+NAA0.1,年计划生产试管苗12万只,请计算出拟购BA的用量(单位:g)。
(注:每升培养基可以分装60只试管):解:BA2.0即每升要使用2mg;而每升可以分装60支试管故需要120000/60=2000升;因此至少需要拟购2000*2.0/1000g=4g的BA。
十九、某公司经初步实验表明:玫瑰每四周扩繁一次,增殖倍数为4。
现有玫瑰试管苗200只,试计算该公司年产玫瑰苗的数量
产玫瑰苗134.22亿。