五、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备：
• 用5ml移液管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入 100ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血 液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。
• 再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀 ，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可 再加0.33mol/L H2SO41-2滴）。
馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀， 静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入 225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。 • 置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀， 用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
三、实验仪器
1、25mL血糖管×3支； 3、沸水浴小锅×1个； 5、电炉×1个； 7、吸耳球×2个；
2、血糖管橡胶塞×3个； 4、100mL锥形瓶×2个； 6、滤纸×1盒； 8、7200型分光光度计×1台;
血糖管
7200型分光光度计
四、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml） •(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。 •(2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。 2、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。 3、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。 4、碱性硫酸铜溶液
• 然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液， 同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇 动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。
• 一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度 计在420nm波长处比色，以空白管调节零点。
六、结果计算：
按下式计算100ml全血中所含血糖的含量 m=A1/A0×C0÷0.1×100
Folin.氧化供能 2.人体的主要组成成分之一
糖蛋白、糖脂、蛋白多糖、核糖；转化成 脂肪和某些非必需氨基酸等 3.糖代谢紊乱→供能障碍→一系列代谢变化
血糖及血糖水平的概念：
血糖：指血液中的单糖：葡萄糖 血糖水平：血浆中葡萄糖浓度 血糖总维持在恒定水平：3.9∽6.7mmol/L
糖尿病典型的症状是“三多一少”，即多饮、 多尿、多食及消瘦
血糖的测定方法
无机化学法： Folin-Wu法，特异性差
测定 方法
有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯法 干扰因素多
酶法：（1）己糖激酶法（HK）
（2）葡萄糖氧化酶法（GOD法）
特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化 分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵
式中: m=100ml全血中含血糖毫克数 ; C0=标准液葡萄糖含量（ 0.1mg/ml）；A1=样品液光吸收值 ; A0=标准液光吸收值
0.1：1ml无蛋白血溶液相对于0.1ml全血
七、思考题
• 实验过程中那些操作可能影响实验结果的 准确性？
• 实验中，血糖管有什么作用？ • 实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱
• A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水，稀释 定容至1000ml. • B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。 • 临用时，A液：B液=9：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存 （4℃）。
四、实验试剂
5、酸性钼酸盐溶液： • 称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸
Cu2+( CuSO4 )+葡萄糖
Cu+ （Cu2O）
无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应,
Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合 物—钼蓝 。
Cu2O+酸性钼酸试剂 蓝色钼化合物 OD420比色
血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量 与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。
• 用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部 倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤 液相当于1/10ml全血。
2、血糖的定量测定：
• 取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏 水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸 管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
性硫酸铜液反应后的血糖管？
注意事项：
1.加硫酸、钨酸钠时，要边加边摇匀 2.沉淀由鲜红变为暗棕色，是因钨酸钠与硫酸生成钨酸，在 适当酸度时，使血红蛋白变性沉淀，如果沉淀不变暗棕色或 重新过滤后仍混浊，是因为血液中所加抗凝剂过多，可以加 入10％硫酸1-2滴，待暗棕色后再过滤。 3.用定量滤纸过滤后应该得到完全澄清无色之无蛋白血滤液 。 如果得到仍带有红色的血滤液则说明蛋白质未被完全去 除。
一、目的要求
• 掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理 和方法。
• 学会制备无蛋白血滤液。 • 掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理
葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性，
与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧
基，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。
血糖的来源和去路
血糖测定的目的和意义
临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的 主要依据。 科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些 药物的研究中，也涉及血糖的测定。
❖调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高 血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。 ❖血糖水平异常：⑴高血糖及糖尿病； ⑵低血糖
高血糖症：指空腹血糖浓度超过7.3mmol/L,有 生理性和病理性之分，临床上最常见的病理性 高血糖症是糖尿病。
糖尿病：是一种慢性、复杂的代谢紊乱性疾病, 系胰岛素绝对不足或相对不足，以高血糖症为 基本生化特点。同时伴有糖、脂类、蛋白质、 水、电解质和酸碱平衡紊乱，甚至出现一系列 并发症如眼、肾的微血管病变及神经病变等。
糖尿病的诊断标准
症状＋随机血浆葡萄糖≥ 11.1mmol/L,或空 腹血浆葡萄糖≥ 7.0mmol/L。症状不典型者 需另一天再次证实。随机血糖是指一天中的任 一时间采血测得的血糖浓度。