5农牧发[2001]38号 动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法-高效液相色谱法
动物性食品中磺胺类药物残留的检测方法动物性食品中磺胺类药物残留的检测方法
--------高效液相色谱法高效液相色谱法
1 1 范围范围范围
本标准规定了动物性食品中磺胺嘧啶（SD）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺
胺地索辛（SDM）、磺胺二甲嘧啶（SM 2）
、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺甲恶唑（SMZ）、磺胺喹恶啉（SQ）单个或混合物残留量检验的制样和高效液相色谱测定方法。

本标准适用于各种动物性食品（鸡肌肉和鸡肝脏）中磺胺嘧啶（SD）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺地索辛（SDM）、磺胺二甲嘧啶（SM 2）、磺胺甲氧嗪
（SMP）、磺胺甲恶唑（SMZ）、磺胺喹恶啉（SQ）单个或混合物残留量检验。

2 2 规范性引用文件规范性引用文件规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。

凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 1.1-20001 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则 (ISO/IEC Directives, Part 3, 1997, Rules for the structure and drafting of International Standards, NEQ)
GB/T 2000 1.4-88 标准编写规则 第4部分：化学分析方法 (ISO 78-2, Chemistry-Layout for standards-Part2: Methods of chemical analysis, MOD) GB/T 8170-87 数值修约规则
GB/T 6682-1992 分析实验室用水规则和试验方法
3 3 制样制样制样
3.1 3.1 样品的制备样品的制备样品的制备
将组织样品解冻，剪碎，置于组织匀浆机中高速匀浆。

3.2 3.2 样品的保存样品的保存样品的保存
- 20℃冰箱中贮存备用。

4 4 测定方法测定方法测定方法
4.1方法提要方法提要
组织样品经乙腈提取，正己烷分配，再经碱性氧化铝SPE 柱净化后，用反相高效液相色谱-紫外检测法在270nm 处检测。

4.2 4.2 试剂和材料试剂和材料试剂和材料
除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T 6682二级用水的规定。

4.2.1 甲醇：色谱纯。

4.2.1乙腈：色谱纯。

4.2.2正已烷：分析纯，经重蒸馏。

4.2.3正丙醇：分析纯，经重蒸馏。

4.2.4磷酸：分析纯。

4.2.5无水硫酸钠：分析纯。

4.2.6碱性氧化铝SPE 柱。

4.2.7磺胺类药物标准品（SD 、SMM 、SDM 、SM 2、SMP 、SMZ 和SQ ）：纯度≥99%。

4.2.8磺胺类药物标准液：用甲醇溶解各个磺胺药为标准原液，再用流动相稀释0.1--0.2µg/mL 的标准溶液。

4.3 4.3 仪器和设备仪器和设备仪器和设备
4.3.1实验室常用仪器、设备。

4.3.2高效液相色谱仪，配紫外检测器。

4.3.3涡动混合器。

4.3.4离心机。

4.3.5电子天平：感量0.01mg 。

4.3.6旋转蒸发仪。

4.3.7振荡器
4.3.8组织匀浆机
4.4 4.4 测定步骤测定步骤测定步骤
4.4.1提取
准确称取5.0g 组织样品匀浆物，置于50ml 聚丙烯离心管中，加无水硫酸钠4g 和乙腈25ml，涡动混合15秒，中速振荡20min，2500rpm 离心5min。

上清液移至分液漏斗中，加入30ml 正己烷，振摇2min 后，静止5min，分离乙腈层。

用25ml 乙腈将沉淀物重复提取1次，乙腈层经同一份正己烷分配，合并乙腈层于100ml 鸡心瓶中，加入正丙醇5mL，50℃减压浓缩至近干。

用3ml 乙腈-水（95＋5,v/v）溶解残留物。

4.4.2净化
将上述样品液通过碱性氧化铝SPE 柱，不收集，用乙腈-水（95＋5,v/v）5ml 洗涤鸡心瓶，并过SPE 柱，吹去柱内滞留的液体。

用5ml 乙腈-水（75＋25,v/v）洗脱待测物至10ml 容量瓶中，用0.017 mol／L 磷酸定容至10mL，过0.45µm 微孔滤膜后，进HPLC 测定。

4.4.3 测定
a) 液相色谱条件：
色谱柱：反相C 18柱：250 ×4.6mm，5µm；
流动相：0.017 mol／L 磷酸-乙腈（80＋20，v/v）；
流速：1ml／min；
检测波长：270nm；
进样体积：50µl。

b) 液相色谱测定：
分别取适量试样溶液和相应浓度的标准工作液，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。

标准工作液及试样液中磺胺类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内，试样液测定过程中应参插注入标准工作液，以便准确定量。

标准品液相色谱图件附录A 中图A1。

4.4.4空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

4.5 4.5 结果计算和表述结果计算和表述结果计算和表述
组织中磺胺类药物的残留量按下式计算：
X =M
V C • 式中：X —试样中磺胺类药物的残留量(µg/g);
C —试样液中对应的磺胺类药物的浓度(µg/ml);
V —试样总体积(ml)。

M––组组织样品重量(g)。

注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后2位。

5 5 检测方法灵敏度检测方法灵敏度检测方法灵敏度、、准确度准确度、
、精密度精密度 5.1灵敏度灵敏度
本方法在鸡肌肉和肝脏组织中的最低检测限为10-20µg/kg。

5.2 5.2 准确度准确度准确度
本方法在以下三个添加浓度水平上的回收率范围如下：
添加浓度mg/kg 回收率 %
0.02 80.9-96.0
0.1 82.3-93.4
0.5 85.2-100.4
5.3 5.3 精密度精密度精密度
本方法的室内变异系数CV 为10.2%，室间变异系数CV 为18.5%。