CD56、CD117在多发性骨髓瘤中的表达及其与临床病理特征的相关性黄垚;刘烨【摘要】目的探讨CD56、CD117在多发性骨髓瘤(MM)中的表达及其与临床病理特征的相关性.方法选取MM患者80例作为MM组,同期选择体检的健康者80例作为对照组,采用流式细胞仪检测2组入选者血液中的CD56、CD117表达,分析患者的临床病理资料并进行相关性分析.结果观察组的CD56、CD117表达阳性率分别为40.0％和30.0％,对照组分别为8.8％和10.0％,观察组显著高于对照组(P<0.05).CD56、CD117的表达与多发性骨髓瘤的临床分期、IgH重排、M蛋白类型、轻链类型显著相关(P<0.05),与患者年龄、性别无关(P>0.05).Spearman等级相关分析显示CD56表达阳性率与CD117表达阳性率呈显著正相关性(P<0.05).结论 CD56、CD117在MM患者中都呈现高表达状态,与患者的临床分期、免疫特征等显著相关,可作为MM免疫球蛋白分型的指标.【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2019(034)004【总页数】4页(P530-533)【关键词】CD56;CD117;多发性骨髓瘤;临床病理特征;相关性【作者】黄垚;刘烨【作者单位】710054 陕西省西安市第九医院;710054 陕西省西安市第九医院【正文语种】中文【中图分类】R733.3多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一种起源于骨髓浆细胞的恶性疾病，其发病率在血液系统恶性疾病中仅次于淋巴瘤，占全部恶性肿瘤的1%左右，多发病于老年人[1]。
MM被认为是起源于终末分化的B型淋巴细胞，患者的骨髓出现大量的异常浆细胞克隆性增殖，临床表现多样，早期表现无特异性，但是预后比较差，中位生存期在3年左右[2-3]。
当前MM的主要确诊指标包括骨髓细胞学检查，但是最终确诊需要影像学与血清学指标进行联合确诊。
现代研究表明MM患者存在显著的T细胞与B细胞免疫缺陷，特别是随着B细胞向浆细胞的分化成熟，其过程中会丢失大多数的B系表达抗原及膜表面免疫球蛋白[4-6]。
有研究认为CD56、CD117分子在浆细胞上强表达，CD56、CD117可能成为MM单克隆抗体治疗的潜在靶点[7-9]。
随着检测技术的发展，流式细胞术可以准确识别骨髓瘤细胞的免疫表型特点，有利于MM的诊断及微小残留病变的检测[10-11]。
本文具体探讨了CD56、CD117在多发性骨髓瘤中的表达及其与临床病理特征的相关性，现报告如下。
1 材料与方法1.1 一般资料选取2012年8月到2017年2月我院血液科诊治的MM患者80例作为MM组，符合MM的诊断标准(骨髓中浆细胞增多>30%，活检证实为浆细胞瘤，正常免疫球蛋白减少)，其中男性42例，女性38例；年龄最小28岁，最大78岁，平均年龄(67.13±4.28)岁；临床分期：Ⅰ期40例，Ⅱ期20例，Ⅲ期20例；M蛋白类型：IgG型50例，IgA型10例，IgD型20例；轻链类型：Κ链50例，λ链30例；IgH重排：阳性15例，阴性65例。
选取同期在我院进行体检的健康者80例作为对照组，均无肿瘤及自身免疫性疾病，其中男性40例，女性40例；年龄最小30岁，最大80岁，平均年龄(67.78±4.11)岁。
2组入选者一般资料对比无显著差异(P>0.05)。
所有入选者均签署知情同意书，本研究已通过医院伦理委员会审批。
1.2 标本采集与检测所有入选者均于清晨起床前空腹平卧位，采取静脉血3～5 ml，乙二胺四乙酸EDTA抗凝。
血标本用PBS稀释等量稀释，然后加入3～5 ml淋巴细胞分离液，可形成清晰的界面，室温下以2000 rpm，离心20 min。
吸出白膜层，加入10倍体积的PBS洗涤2次，采用PBS调整细胞浓度至1×106个/ml，使用台盼蓝染色记数细胞活力。
分为2管，每管取1×106细胞，一管为对照管，一管为检测管。
分别加入荧光标记的CD56、CD117的抗体及对照抗体各20 μL，4 ℃暗室避光孵育30 min后，加入溶血素3 000 μl，混匀后室温放置10 min，1 000 r/min离心5 min。
PBS洗涤3次，用流式细胞仪以CellQuest软件获取和分析数据。
1.3 观察指标记录2组入选者的性别、年龄等指标，记录MM组患者的临床分期、M蛋白类型、轻链类型、IgH重排等情况。
流式细胞术检测结果以荧光强度<102为阴性，在102～103范围内为弱阳性，荧光强度在103～104范围内为强阳性，检查结果以抗原表达>20%为阳性。
1.4 统计学处理采用SPSS 22.00统计软件包整理录入资料，计数数据采用率、百分比等表示，计数数据以均数±标准差表示，对比方法为卡方χ2分析与t检验等，应用Spearman等级相关分析进行相关性分析，检验显著性水平α为0.05。
2 结果2.1 2组CD56、CD117表达阳性率对比观察组的CD56、CD117表达阳性率分别为40.0%和30.0%，对照组分别为8.8%和10.0%，观察组显著高于对照组(P<0.05)。
见表1。
表1 2组CD56、CD117表达阳性率对比(例，%)组织例数CD56CD117观察组8032(40.0)24(30.0)对照组807(8.8)8(10.0)χ221.19110.000P0.0000.0022.2 CD56、CD117表达与多发性骨髓瘤的临床病理特征的相关性CD56、CD117的表达与多发性骨髓瘤的临床分期、IgH重排、M蛋白类型、轻链类型显著相关(P<0.05)，与患者年龄、性别无关(P>0.05)。
见表2。
表2 MM患者中CD56、CD117表达与临床病理特征参数的相关性(例，%)指标例数CD56阳性表达χ2PCD117阳性表达χ2P年龄≥60岁6024(40.0)0.0001.00018(30.0)0.7200.788 <60岁208(40.0)6(30.0)性别男4217(40.5)0.0080.92713(31.0)0.0380.845 女3815(39.5)11(28.9)临床分期Ⅰ期405(12.5)45.2670.0001(2.5)63.2140.000 Ⅱ期208(40.0)3(15.0) Ⅲ期2019(95.0)20(100.0)M蛋白类型 IgG型507(14.0)40.9560.0003(6.0)43.0000.000 IgA型106(60.0)4(40.0) IgD型2019(95.0)17(85.0)轻链类型Κ链507(14.0)37.5560.0003(6.0)36.5710.000 λ链3025(83.3)21(70.0)IgH重排阳性152(1.3)5.4700.0191(6.7)4.7860.029 阴性6530(46.2)23(35.4)2.3 相关性分析在观察组中，Spearman等级相关分析显示CD56表达阳性率与CD117表达阳性率呈显著正相关性(γ=0.644，P=0.000)。
见表3。
表3 MM组织中CD56与CD117的相关性/例CD56表达CD117表达阳性阴性总计阳性23932阴性14748总计2456803 讨论MM是由单克隆的浆细胞异常增生所致的恶性疾病，以分泌异常单克隆免疫球蛋白的浆细胞在骨髓内大量增生聚集，尿液、血中出现单克隆免疫球蛋白而正常免疫球蛋白受到抑制为特征[12-13]。
MM的临床治疗比较困难，导致预后比较差，进展期MM患者的中位存活期仅为6个月[14]。
而常规化疗的完全缓解率低于5%，有效率为不到50%，中位存活期一般在2年左右。
虽然化疗有一定的效果，但是可伴随有肾功能衰竭、感染、出血，且停药后复发率高[15]。
分子生物学治疗与免疫治疗是延长MM患者缓解期、预防疾病复发的有效方法，通过检测骨髓瘤细胞免疫表型，可为寻找单克隆抗体治疗提供依据[16]。
MM患者瘤细胞表面抗原表达具有高度不均一，正常浆细胞与瘤细胞抗原表达差别很大，可过度表达CD56。
CD117是由c-kit原癌基因编码的跨膜酪氨酸蛋白激酶受体，配体为干细胞因子受体-配体结合后导致酪氨酸磷酸化，进而激活控制细胞的信号传导级联系统，为此CD117的异常表达可能会改变传导通路，持续作用于肿瘤形成的全过程[17]。
本研究显示观察组的CD56、CD117表达阳性率分别为40.0%和30.0%，对照组分别为8.8%和10.0%，观察组都显著高于对照组(P<0.05)。
也有研究检测了48例初诊MM患者、43例MM复发患者中恶性浆细胞CD117的表达情况，提出CD117的表达与MM活动状态相关[18]。
不过MM患者治疗后免疫表型有改变，有研究显示大约1/3的MM初诊患者经过治疗后免疫表型发生改变，CD56、CD117、CD20、CD27的改变都在10.0%左右[19]。
MM的临床特征是骨髓内浆细胞恶性增生、异常免疫球蛋白大量生成与骨质被破坏，在临床上的误诊率接近50.0%。
当前MM的确诊依据主要靠骨髓细胞形态学和免疫蛋白电泳，其中骨髓形态学检查是确诊MM的主要方法，但是部分骨髓瘤细胞与正常浆细胞形态相似，临床诊断困难。
因此寻找到肿瘤细胞特异的免疫标记不仅可以提供确诊MM的佐证，还可有助于研究MM细胞的生物学特性，为寻找治疗靶点提供依据。
本研究显示在观察组中，随着临床分期增加、IgH重排阴性、IgD型、轻链λ链，CD56、CD117的表达阳性率显著增加(P<0.05)，而与患者年龄、性别无关(P>0.05)。
有研究认为，CD56特异的表达于浆细胞，CD56介导骨髓瘤细胞的粘附，且CD56不会在骨髓造血前体细胞和淋巴细胞上表达[20]。
也有研究在人骨髓瘤细胞系及MM患者骨髓中发现有部分细胞亚群不表达CD56，但是具有更强的克隆源性[21]。
从机制上分析，在骨髓瘤细胞分化过程中，CD56可从细胞表面脱失，使骨髓瘤细胞不能与基质细胞相互黏附而进入血浆中，引起骨髓瘤细胞的转移，播散。
有研究结合DNA倍体、FISH检测，多因素分析显示CD117的表达明显与MM患者的超二倍体及较少的易位相关，且总生存期相对缩短。
另有研究表明，结合多发性骨髓瘤临床分期，CD117表达差异有显著性意义，随疾病恶性程度增高，骨髓瘤细胞表面表达CD117增多[22]。
本研究Spearman 等级相关分析显示观察组的CD56表达阳性率与CD117表达阳性率呈显著正相关性(γ=0.644，P=0.000)。
不过骨髓瘤细胞表面抗原表达高度异质，大部分初诊的患者可以发现有异常表型，包括CD117、CD56的过表达[23]，特别是CD56可用来区别恶性和良性的浆细胞，但是骨髓瘤细胞CD56表达的缺失也可能与疾病更强的侵袭性和髓外浸润相关[24]。