完成期限和预期进度：
2014.12-2015.01相关文献查询，实验设计，实验材料准备与预备试验
2015.01-2015.03毕业论文实验实施，数据处理与分析
2015.04-2015.05毕业论文写作与答辩
相关参考资料：
[1]于美娟，张雅尼，冯善伟，熊符，张成；小鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法的建立[J]；解剖学研究；2009年9月31卷6期424-427.
（3）待细胞贴壁大致完成前加入MTT处理4小时，然后倒掉板子里的液体，加入100-150ul的DMSO,放至摇床摇匀（10分钟），最后用酶标仪检测，得出数据。
2.3数据的整理：
去除不合理数据，求平均数，得出最适的人参总皂苷药剂浓度。
2.4最适浓度的药物处理细胞：
取两瓶同代的小鼠骨髓干细胞系M719细胞，一瓶加入最适浓度的人参总皂苷药剂，另一瓶作为对照，不加人参总皂苷药剂。放入培养箱中培养48小时后用流式细胞仪检测细胞的周期和活性，从而验证试验的结论。
相关研究动态：有关研究人士通过实验得出人参皂苷能促进体外原代培养的小鼠骨髓MSCs及其传代扩增细胞的增殖[3];人参总皂苷不仅能抑制人慢性粒细胞白血病细胞（K562细胞）增殖,还可以诱导其分化,人参总皂苷增殖抑制作用可能与诱导K562细胞凋亡有关[4];中国预防兽医学报上刊登的有关论文得出人参总皂苷对马立克氏病肿瘤细胞系MSB一1细胞的增殖存在抑制作用[5]；还有研究者通过实验表明在一定的浓度,人参三醇组皂苷Rh1和ppt能减低小鼠原代骨髓MSC的集落生成能力,抑制MSC传代细胞的增殖,而Re、Rg对这些细胞的体外增殖无明显影响[6];在环磷酸胺导致的骨髓抑制移植状态下,人参皂苷可促进骨髓造血功能的恢复,增加骨髓细胞总数,提高HSCP、砚犯P及ER二的比例,但是否促进骨髓干细胞的动员或分化还需进一步研究[7]。
药物（人参总皂苷药剂100mmol/ml）、1.25%Et-OH（酒精）、MTT检测试剂、DMSO细胞裂解试剂。
1.3实验设备与器材：小试剂瓶若干，小离心管，细胞培养瓶（新），计时器，移液枪，枪头（5ml、1ml、0.1ml各若干支），血球计数板、超净工作台。
2. 实验流程
2.1小鼠骨髓干细胞系M719细胞的培养
贴壁培养筛选得到的小鼠MSCs，除了具有多能性的干细胞，还可能含有各胚层的原始细胞推测体外诱导分化所观察到的定向分化现象，既可能是多能性细胞被定向诱导分化，也可能是由存在骨髓的各胚层原始细胞在诱导条件下优势增殖的结果，有待进一步的研究证实。
课题的主要内容（观点）、创新之处：
课题的主要内容：
通过对小鼠骨髓干细胞系M719进行人参总皂苷药物处理，并利用酶标检测仪分析软件对小鼠骨髓干细胞系M719进行数据分析，从而探讨本实验室所建小鼠骨髓干细胞系M719在经过药物（人参总皂苷）处理后的增殖影响。
通过建立小鼠干细胞系，培养出生长快速的小鼠干细胞，可以大大降低对小鼠干细胞的研究成本，且为实验取材提供方便。本次实验为求验证所建小鼠骨髓干细胞系M719与原代小鼠细胞在经过药物（人参总皂苷）处理后是否具有促进增殖的作用，可为以后对临床上骨髓移植种子干细胞的体外扩增提供借鉴。
研究方法、设计方案或论文撰写提纲：
2.2药物处理：
（1）取两日内传代的M719细胞，通过胰酶处理，离心去除死细胞，混匀计后配制成4×10^4个/ml的细胞混合液，给96孔板加注100ul细胞混合液备用。
（2）取10个1.5毫升的离心管依次排好，配置含不同浓度的Rb1液，加入NBS和DMEM混匀，给98孔板标上浓度梯度后依次加入药物混合液，每个梯度组滴加8个孔，盖上盖子，标上日期等信息。
1.材料和方法：
1.1实验材料：
小鼠骨髓干细co’s Modified Eagle’s Medium)：DMEM粉(低糖，Sigma公司生产)用三蒸水溶解，培养基加入NaHCO33.7 g/L，调pH至7.2，过滤除菌，4℃保存，使用期2个月以内。
本科生毕业论文(设计)开题报告书
题目人参总皂苷对小鼠骨髓干
__细胞M719的影响研究_
学生姓名曾平文
学号201113010107
专业班级生科11101
指导老师唐琳
2015年01月10日
论文（设计）题目
人参总皂苷对小鼠骨髓干细胞M719的影响研究
课题目的、意义及相关研究动态：
目的意义：通过体外贴壁培养法培养的小鼠骨髓干细胞系M719并利用药物对其进行处理，验证人参总皂苷是否对其有促进增殖的作用；为临床上骨髓移植种子干细胞的体外扩增提供借鉴。
指导教师意见：
签名：年月日
开题报告会纪要
时间
地点
与
会
人
员
姓名
职务（职称）
姓名
职务（职称）
姓名
职务（职称）
会议记录摘要：
会议主持人：
记录人：
年月日
系工作小组意见
负责人签名：
年月日
人参总皂苷(Total Ginsenoside Ginseng Root)，又名人参总皂甙，是人参提取物的主要成分。人参提取物可使皮肤光滑，柔软有弹性，延缓衰老，还可以抑制黑色素的产生。用在护发产品中，可以提高头发的强度，防止脱发，白发，长期使用可使头发乌黑亮泽。
骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived Mesenchymal stemcells，骨髓MSCs）是骨髓内除造血干细胞（hematopoietic stem cells，HSC）之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，在体内外均具有支持和调控造血的作用。因其比较容易贴壁，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。骨髓间充质干细胞由于其来源广泛，易于分离培养，并且具有较强的分化潜能和可自体移植等优点，越来越受到学者们的青睐，被认为是不久即将被引入临床治疗的最优干细胞。
[5]付本懂，许小琴，申海清，王春元，王鲁，褚秀玲礴，韦旭斌人参总皂苷对MSB一1细胞的增殖抑制作用及其机理初探[J]；中国预防兽医学报；2007年6月29卷6期471-474.
[6]朱海林；人参三醇组皂昔对小鼠骨髓MSC体外生长的影响及相关实验技术的研究[D]；2009年5月.
[7]徐尚福，余丽梅，方宁，刘杰，吴芹；人参皂苷Rg1对小鼠骨髓干细胞不同亚群增殖的影响[N]；吉林农业大学学报；2008年8月（专辑）.
创新之处：
在哺乳类实验动物中，由于小鼠体小，饲养管理方便，易于控制，生产繁殖快，研究最深，有明确的质量控制标准，已拥有大量的近交系、突变系和封闭群，因此在各种实验研究中，用量最大，用途最多。但是以活鼠做实验，成本较高，通过建立小鼠干细胞系，培养出生长快速的小鼠干细胞，可以大大降低对小鼠干细胞的研究成本，且为实验取材提供方便。
[2]周进明，邹仲敏，郭朝华，何颖，张勇，王劲，王蒙，罗成基，程天民;小鼠骨髓间质干细胞的生物学特点及分化潜能鉴定[J]；第三军医大学学报；2002年1月24卷1期58-61.
[3]吴晶晶；人参皂苷对小鼠骨髓MSC体外增殖及成骨分化的影响[D]；2010年4月.
[4]雷翠蓉,姜 蓉,王红宁,何 轩,左国伟,陈地龙,官 涛,王建伟；人参总皂苷对K562细胞的增殖抑制及诱导分化作用[J]；激光杂志；2011年32卷2期69-73.
胎牛血清(FBS)：杭州四季青公司产品（批号：20070704、20070616、20070510、20061024、），56℃灭活30min，分装后-20℃贮存。
胰蛋白酶溶液：取0.25g胰蛋白酶溶于100 ml PBS缓冲液(pH8.0)中，充分溶解，过滤除菌。
磷酸盐生理盐水缓冲液(PBS)：取NaCl8.00 g，KCl0.20 g，Na2HPO4 H2O1.56 g，KH2PO40.20 g，用三蒸水溶解，定容至1 L，高压灭菌，4℃保存备用。