ELISA类型
夹心法 间接法测抗体 竞争法 捕获法
捕获法测IgM抗体
血清中针对某些抗原 的特异性 IgM 常 和特异 性IgG同时存在，后者会 干扰IgM 抗体的测定 。 因此测定 IgM 抗 体多用 捕获法
➢ 包被抗体：用抗人μ链抗体包被固相载体上,形成固相抗 人μ链;
➢ 加入病人的血清标本; ➢ 加入特异性抗原试剂;， ➢ 加入针对特异性抗原的酶标抗体， ➢ 加底物显色．
抗HAV总抗体 抗HAV-IgM
临床意义
• 血清中抗HAVIgM出现于感染的早期(发病后数日)抗体的效价很快升 到峰值并持续较长时间(2-4周),经1-2个月后抗体的效价和阳性率明 显不降,于3个月后消失.因此抗HAVIgM阳性,尤其是效价较高时,表明 处于感染的早期,被公认为早期诊断甲肝的依据,是区别是急性感染 还是慢性感染的有力佐证。
甲型肝炎病毒IgM抗体的测定 (捕获法)
黄艳
酶联免疫吸附试验（ELISA法）
将抗体(抗原)包被在固相表面后，按不同的步骤加入 待测抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)，充分反应后用洗涤的方 法，使固相上形成的抗原抗体复合物与其他物质分离，洗 去游离的酶标抗体(抗原)，最后加入底物，根据酶对底物 催化的显色反应程度，而对标本中的抗原(抗体)进行定性 或定量。
操作步骤
1．将微孔条固定在支架上，按顺序编号。 2．分别将待测标本，阴、阳性对照100μl（2滴）加入相应的 孔中，设空白对照孔。置37℃20分钟。 3．洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，共 三次，每次洗后均需扣干。 4．每孔加HA·Ag50μl，酶结合物50μl（空白对照除外），振 荡混匀，置37℃20分钟。 5．洗涤：重复上述3 6．显色：每孔加显色剂A液50μl，再加显色剂B液50μl，振荡 混匀，置37℃15分钟。 7.每孔加终止液50μl
λ型
➢ 正常人κ：λ≈2 ：1
➢ 重链（H链）:根据其抗原性的差异，人类Ig的H链分为
链 链 链 链 链
➢ 重链决定Ig类别
IgG IgA IgM IgD IgE
捕获法
主要用于 血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。
实验原理
• 用抗人μ链抗体包被酶标板，用以捕获血清中IgM类抗体， 然后用特异性HAVAg与IgM抗体结合，再加酶标抗HAV抗体 ，最后加底物显色，显色深浅与HAVIgM的含量成正相关 。
Cut off value(临界值)
Cut off value(临界值)：阴阳性判断值，简称Байду номын сангаасO值。 ➢ 夹心法：若S/CO值>1，为阳性；
S/CO值<1，为阴性； ➢ 竞争抑制法：若S/CO值<1，为阳性；
S/CO值>1，为阴性。
要点： 1. HAV的传播途径(粪—口) 2. HAV的潜伏期(30天±2周) 3. 血清标志物出现的规律 4. 免疫学检测指标—HAV Ag
免疫球蛋白的结构
➢ 基本结构：四肽链结构
由两条相同的轻链 （Light Chain）和 两条相同的重链 （Heavy chain）通 过链间二硫键连结 形成。
分子式为：H2L2
四条肽链两端游离 的NH2和COOH方 向一致分别命名为 N端和C端
（一）轻链和重链
➢ 轻链（L链） κ链
λ链
➢ 轻链决定型别 κ型