5
免疫球蛋白的结构
一、基本结构：四肽链结构
由两条相同的轻链 （Light Chain）和两 条相同的重链（Heavy chain）通过链间二硫 键连结形成。
分子式为：H2L2
四条肽链两端游离的 NH2和COOH方向一致 分别命名为N端和C端
6
（一）轻链和重链
轻链（L链） κ链
λ链
轻链决定型别 κ型
3 ml×1 瓶
• 8 显色剂 B
3 ml×1 瓶
• 9 终止液
3 ml×1瓶
10
操作步骤
• 1．将微孔条固定在支架上，按顺序编号。
• 2．分别将待测标本，阴、阳性对照100μl（2滴） 加入相应的孔中，设空白对照孔。置37℃20分 钟。
• 3．洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔， 静置5秒，共三次，每次洗后均需扣干。
夹心法：若S/CO值>1，为阳性； S/CO值<1，为阴性；
竞争抑制法：若S/CO值<1，为阳性； S/CO值>1，为阴性。
13
HAV HBV 肝炎病毒---- HCV HDV HEV 其他（HGV、TTV）
（SEN、TLMV）
14
甲型肝炎急性期血清标志物出现过程
15
要点： 1. HAV的传播途径(粪—口) 2. HAV的潜伏期(30天±2周) 3. 血清标志物出现的规律 4. 免疫学检测指标—HAV Ag
• 临界值=阴性对照孔 OD 均值 × 2.1( 阴 性对照 OD 小于 0.05 以 0.05 计算)
• 结果判定: S/CO≥1 为 HAV-IgM 阳性，
•
S/CO<1为 HAV-IgM 阴性。
12
Cut off value(临界值)
Cut off value(临界值)：阴阳性判断值，简称 CO值。
λ型
正常人κ：λ≈2 ：1
重链（H链）:根据其抗原性的差异，人类Ig的H链分
为
链 链 链 链 链
重链决定Ig类别 IgG IgA IgM IgD IgE
7
捕获法
• 主要用于 血清中某种抗体亚型成分（如 IgM）的测定。
8
实验原理
• 用抗人μ链抗体包被酶标板，用以捕获血 清中IgM类抗体，然后用特异性HAVAg 与IgM抗体结合，再加酶标抗HAV抗体， 最 后 加 底 物 显 色 ， 显 色 深 浅 与 HAVIgM 的含量成正相关。
9
试剂盒组成
• 1 抗-μ 链包被干板条
4×12 孔
• 2 抗-HAVIgM 阴性对照
1 ml×1 瓶
• 3 抗-HAVIgM 阳性对照
1 ml×1 瓶
• 4 HA-Ag2.6Biblioteka ml×1 瓶• 5 酶结合物
2.6 ml×1 瓶
• 6浓缩洗涤液 20 稀释）
20 ml×1 瓶（用蒸馏水 1：
• 7 显色剂 A
2
ELISA类型
• 夹心法 • 间接法测抗体 • 竞争法 • 捕获法
3
捕获法测IgM抗体
血清中针对某些 抗原的特异性IgM 常和特异性IgG同 时存在，后者会干 扰IgM抗体的测定。 因此测定IgM抗本 多用捕获法。
4
• （1）包被抗体：用抗人μ链抗体包被 固相载体上,形成固相抗人μ链;
• （2）加入病人的血清标本; • （3）加入特异性抗原试剂;， • （4）加入针对特异性抗原的酶标抗体， • （5）加底物显色．
抗HAV总抗体 抗HAV-IgM
16
临床意义
• 血清中抗HAVIgM出现于感染的早期(发病后数 日),抗体的效价很快升到峰值并持续较长时间 (2-4周),经1-2个月后抗体的效价和阳性率明显 不降,于3个月后消失.因此抗HAVIgM阳性,尤其 是效价较高时,表明处于感染的早期,被公认为 早期诊断甲肝的依据,是区别是急性感染还是慢 性感染的有力佐证。
• 4．每孔加HA·Ag50μl，酶结合物50μl（空白对 照除外），振荡混匀，置37℃20分钟。
• 5．洗涤：重复上述3
• 6．显色：每孔加显色剂A液50μl，再加显色剂 B液50μl，振荡混匀，置37℃15分钟。
• 7.每孔加终止液50μl
11
结果判定
• 酶标仪读数：450nm波长630nm副波长读 数，
17
思考题
• 血清的类风湿因子及其它非特异 IGM是影响捕获法检测中的主要 物质，如何避免这些物质的影响？
18
甲型肝炎病毒IgM抗体的测定 (捕获法)
1
酶联免疫吸附试验（ELISA法）
• 将抗体(抗原)包被在固相表面后，按不同 的步骤加入待测抗原(抗体)和酶标抗体 (抗原)，充分反应后用洗涤的方法，使固 相上形成的抗原抗体复合物与其他物质 分离，洗去游离的酶标抗体(抗原)，最后 加入底物，根据酶对底物催化的显色反 应程度，而对标本中的抗原(抗体)进行定 性或定量。