中国组织工程研究与临床康复第 15卷第 3期 2011– 01– 15出版Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research January 15, 2011 Vol.15, No.3 ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH465 1Biological Science and Engineering College, South China University of Technology, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China; 2Research Institute of Tsinghua University in Shenzhen, Shenzhen 518057, Guangdong Province, ChinaZhang Wen-qiang★ , Master, Biological Science and Engineering College, South China University of Technology, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China; Research Institute of Tsinghua University in Shenzhen, Shenzhen 518057, Guangdong Province, Chinayywenzi23@Correspondence to: Huang Yue-shan, Doctor, Associate professor, Biological Science and Engineering College, South China University of Technology, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China Received: 2010-08-07 Accepted: 2010-12-07低相对分子质量透明质酸脂质体的制备及透皮性能★张文强 1,2,黄岳山 1Preparation of low-molecular-weight hyaluronan liposomes and their percutaneous penetration Zhang Wen-qiang1,2, Huang Yue-shan1AbstractBACKGROUND:Hyaluronic acid is a versatile polymer material, in practical applications, due to its large molecular weight,percutaneous absorption effect is not satisfied, the use of liposomes as a carrier can improve its transmission effect, with a goodapplication prospect.OBJECTIVE: To study the percutaneous penetration of the liposomes carrying low-molecular-weight hyaluronic acid.METHODS: Low-molecular-weight hyaluronan liposomes were prepared through thin films. Orthogonal experiment was design,and percutaneous penetration was study by snake slough.RESULTS AND CONCLUSION: The low-molecular-weight hyaluronan liposomes could enwrap more hyaluronic acid when thetemperature is 35 ℃ , the ratio of cholesterol and lecithin is 0.15∶ 1, the ratio of hyaluronic acid and lecithin is 0.03∶ 1, and thepH of hydration medium PBS is 7.5. Hyaluronic acid could penetrate the snake slough more easily when they were enwrapped byliposome, and the percutaneous penetration of hyaluronic acid was improved.Zhang WQ, Huang YS.Preparation of low-molecular-weight hyaluronan liposomes and their percutaneous penetration. ZhongguoZuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(3:465-467.[ ]摘要背景:透明质酸是一种用途广泛的高分子材料,在实际应用中,由于其相对分子质量较大,透皮吸收效果不理想,利用脂质体作为其载体可以改善其传输效果,具有较好的应用前景。
目的:观察包裹低相对分子质量透明质酸脂质体的透皮性能。
方法 :采用薄膜法制备低相对分子质量透明质酸脂质体,设计正交实验,采用蛇蜕研究其透皮吸收性能。
结果与结论:温度 35 ℃、胆固醇与卵磷脂的比例为 0.15∶ 1,透明质酸与卵磷脂的比例为 0.03∶ 1、水合介质 PBS 的 pH 值为 7.5,可制备包封率较高的低相对分子质量透明质酸脂质体;脂质体包裹低相对分子质量透明质酸,能有效得提高透明质酸透过蛇蜕的能力,达到了提高透明质酸透皮吸收率的作用。
关键词:低相对分子质量;透明质酸;脂质体;透皮吸收;包封率doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.03.021张文强, 黄岳山 . 低相对分子质量透明质酸脂质体的制备及透皮性能 [J].中国组织工程研究与临床康复, 2011, 15(3:465-467.[ ]0 引言透明质酸,又名玻璃酸,是一种独特的线性大分子酸性黏多糖,由葡萄糖醛酸和 N -乙酰氨基葡萄糖的双糖单位反复交替连接而成,广泛分布于动物和人体结缔组织细胞外基质中, 在眼玻璃体、脐带、皮肤、软骨和滑液中含量较高。
透明质酸为白色、无定形粉末,有吸湿性,不溶于有机溶剂,易溶于水,具有良好的保湿性、润滑性、黏弹性、非免疫原性和生物相容性,是一种用途广泛的高分子材料,在临床治疗、诊断和化妆品基质等方面发挥其独特的作用 [1-2]。
在实际应用中,由于透明质酸相对分子质量较大,不能透过皮肤表面角质层。
脂质体是磷脂分子亲水头部插入水中,疏水尾部伸向空气,搅动后形成双层脂分子的球囊,可将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体 [3]。
本实验选用适当低相对分子质量透明质酸, 制备包裹低相对分子质量透明质酸脂质体, 并采用正交实验设计优选透明质酸脂质体的制备处方,考察其对蛇蜕的透皮效果,为其应用提供一定的实验依据。
1 材料和方法设计:体外观察实验。
时间及地点:于 2009-03/07在华南理工大学生物科学与工程学院生物材料实验室完成。
材料:低相对分子质量透明质酸 (自制 ; 透明质酸酶 (Alfa Aesar公司 ; 大豆卵磷脂 (上海源聚生物科技有限公司 ; 胆固醇 (上海伯奥生物科技有限公司 ;磷酸盐缓冲溶液 (PBS,自配 ; 药物透皮扩散试验仪 (上海优浦科学仪器有限公司 ;紫外-可见光谱仪 (美国热电公司。
张文强,等 . 低相对分子质量透明质酸脂质体的制备及透皮性能P .O. Box 1200, Shenyang 110004 466www.CRTER .org1华南理工大学生物科学与工程学院, 广东省广州市 510061; 2深圳清华大学研究院, 广东省深圳市 518057张文强★, 男, 1985年生,陕西省大荔县人 ,汉族, 硕士, 主要从事生物医用材料研究。
yywenzi23@ 通讯作者:黄岳山, 博士, 副教授, 华南理工大学生物科学与工程学院, 广东省广州市 510061中图分类号 :R318 文献标识码 :B文章编号 :1673-8225 (201103-00465-03收稿日期:2010-08-07 修回日期:2010-12-07 (20090807002/M•Y实验方法:脂质体的制备 :称取一定量卵磷脂、胆固醇,溶解于体积比为 2︰ 1的乙醚 /甲醇混合溶剂 50 mL中, 与适量低相对分子质量透明质酸水溶液一起加入梨形烧瓶中, 于 40 ℃恒温水浴中减压旋转蒸发除去有机溶剂,使卵磷脂等成膜材料在烧瓶壁上形成均匀的薄膜。
然后往烧瓶中加入 PBS 溶液 15 mL, 旋转洗膜即得柔性脂质体粗制混悬液。
将制得的柔性脂质体粗制混悬液在冰水浴超声混合 30 min后, 过 0.50 µm微孔滤膜,即得到脂质体混悬液。
包封率的测定 :精密称取脂质体混悬液 0.5 mL, 用 PBS 稀释 3倍后上柱 , 采用 SephadexG-50凝胶柱, 用 PBS 洗脱, 控制流速 1 mL/min,收集游离透明质酸,水解,用紫外分光光度法测定葡萄糖醛酸含量 (550 nm,换算成透明质酸浓度。
另外再取 0.5 mL脂质体混悬液,加入体积比为 2︰ 1的乙醚 /甲醇混合溶剂将其溶解,提取透明质酸,按上述方法测得透明质酸总量。
包封率根据下式计算:包封率 (%=(m 总 -m 游 /m 总 ×100%。
式中 m 总、 m 游分别表示脂质体混悬液中总的透明质酸的质量和游离的透明质酸的质量。
体外透皮扩散试验:自购蛇蜕,浸泡于生理盐水中 30 min后,保存于 4 ℃ PBS溶液中 12 h后备用。
剪取合适大小皮肤块固定于药物透皮扩散试验仪 (扩散面积为 1.0 cm2, 接受池容积为 8.5 cm3中, 蛇蜕外表面面向供给室。
接受池为 PBS 缓冲溶液。
温度为 37 ℃,搅拌,于固定时间取样 0.5 mL,取样后同时补入等量接受液。
实验结束后将所取的样品溶液适当稀释后过 0.50 µm微孔滤膜,水解,用紫外分光光度法测定 550 nm处吸光度 [4-5]。