中国生化药物杂志Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｅｈｅｍｊｃａｌ ｐｈａｒｍａｃｃｕｔｉ￣１９９ Ｆ第ｌ７巷整 塑 ｎｏｔ ｂｙ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｆａｔ ｅｘｔｒａｃｔ ａｎｄ ＰＢＳ ａｓ ｃｏｎｔｒｏ１．ＨＰＴＬＣ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｏｍｅｎｔｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｈａｓ ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂａｎｄ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｒｏｍ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｆａｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ·Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｂｓｏｒｂａｎｅｅ ｉｓ ａｂｏｕｌ ２５０ ｎｍ．Ｗｅ ａｌｓｏ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ＬＡＦ ｃａｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｔｈｙｍｅｏｙｔｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ＣｏｎＡ—－ｉｎｄｕｃｅｄ ＩＬ—－２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｌｉｐｉｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｆａｃｔｏｒ，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｔｈｙｍｅｏｙｔｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，１１．，－２
摘 脂质体肝素透皮吸收的初步观察 黄寿吾杨五彪 付朝宏 李惜光 陶元器 扬春雷 洛阳医学高等专科学校附属医院（洛阳４７１００３） ，＾ 欠》７７
要 脂质体肝紊５ ０００ ｕ、１０ Ｏ００ ｕ喷雾于１２名健康自愿者皮肤上，给药后３０ｒａｉｎ、９０ ｗｉｎ，凝血酶凝固时间（ＴＯＴ）比给药前延长，统计学处理有显著差异（尸＜Ｏ．０１～０．００１），同时，ｌ２倒 中５树诉性功能增强。结果表明，车试验所用的脂质体肝紊，通过开放式给药，可 穿遗皮肤，进入 血循环，产生抗凝效果。 关键词脂质体肝紊，透皮吸收
近年来发现，脂质体（１ｉｐｏｓｏｍｅ）作为大分 子药物的载体，有促进透皮吸收的作用。我们 对脂质体包封的肝素，开放式透皮给药，在正 常人皮肤上进行观察。试图初步评价这一肝 素透皮拾药系统的可行性和实用性。 １材料与方法 １．１试剂 １｜１．１凝血酶：５０ ｕ／ｍＪ，上海医科大学华山 医院（批号：９４１０２６），经生理盐水溶解，冰褡 保存。工作浓度：调至空自对照４０．８６ ｓｃｃ。 １．１．２肝素钠的标准液：３５５ ｕ／ｍｌ，美国药 典（ＵＳＰ）标准品，以生理盐水稀释成下列浓 度：０．００５、０．０１、０．０５、０．１ ｕ／ｍｌ。 １．１．３脂质体肝素制剂：德国ＲＯＶＩ公司惠 赠腊质体肝索喷剂（Ｌｉｐｅｓｏｍａｌ Ｈｅｐａｒｌｎ Ｓｐｒａｙ Ｇｅ１），直接喷雾使用。批号：４３０５５９。肝素钠 ６０ ０００ ｕ／２５ｇ。喷雾一次约含肝素５００ ｕ。 １．１．４血浆：以３．８ 枸栲酸钠抗凝，按１： ９的比例取正常人静脉血，３ ０００ ｒ／ｒａｉｎ离心 １５ ｍｉｎ，即为新鲜血浆，备用。 １．２观察对象 接受肝素１０ ０００ ｕ者为２名健康男性， ４０岁和６５岁，皮肤部位为阴囊，喷药前、喷 药后０．５．１．５ ｈ分别采取静脉血检测。 接受肝素５ ０００ ｕ者为１０名健康男性， １８～２２岁‘，阴囊和前额（含耳后）皮肤各５ 名，喷药前、喷药后０．５、１．５、２４ ｈ，分别采取 静脉血检测。 试验ｄ ２上午询问和检查受试者有无不 良反应。 １．３辁测方法 采用凝血酶凝固时间（Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｃｌｏｔｔｉｎｇ Ｔｉｍｅ，ＴＯＴ）法［“。
１．洛阳医学高等专科学校生化教研耋２．云南生化制药啦错有限公司 收横日期１９９５－０６—１３修回日期１９９５—１０－３１
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维普资讯 http://www.cqvip.com 中国生化药物杂志Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ＰｈａＴｍａｏ￣ｕｔｉｃｓ １９０６年第ｌ７卷第ｌ期 １．３．１绘制血浆已知肝索浓度与ＴｃＴ法测 得时间的标准曲线，取１０名受试者给药前的 血浆各５ ｍｌ，混合后即戚混合血浆。取内径 １２ １ＴＬｍ的小试管，加混合血浆０．１ ｍｌ，再加肝 素钠标准液２５ （空白管为生理盐水２５ １） 置于３７℃水浴中，立即加凝血酶溶液０．１ ｍ１，开始记录时间，反复摇动试管，至纤维蛋 白丝析出，作为凝固终点。读取凝固时间的秒 数，连作３次，取均值。以已知肝索浓度为横 坐标，凝固时间秒数为纵坐标绘成曲线，即成 肝索换算的标准曲线（表１）。 表１正常人混合血浆中巳知鼾紊傩度与ＴＣＴ的关系 血浆鼾素浓度（ｕ／ｍ】） ０．００５ ０．０１ Ｏ．０５ Ｏ．１ ■ 丽— — 表２ ２名正常人应用脂质体肝奢ｌ０ ０００ ｕ后研的变化 （）内翦罕熏ＴＣＴ比用西前延长的百分比 １．３．２ ＴｃＴ法操作步骤取内径１２１ＴＬｍ的 小试管，加入受试者血浆０．ｉ ｍｊ，再加生理盐 水２５ １，置于３７℃水浴中，立即加凝血酶溶 液０．１ ｍｊ，开始记录时间，反复摇动试管，至 纤维蛋白丝析出，作为凝固终点，读取凝固时 间的秒数，连作３次，取均值。以所测得的 ＴＣＴ，对照标准曲线，即可估算出相应的肝素 浓度。 ２结果 如表２所示，２名接受肝素１０ ０００ ｕ者， ＴｃＴ均延长，比给药前延长２５．５ ～ ３６．５ ，峰值在给药后３０ ｒａｉｎ。 １Ｏ名接受肝素５ ０００ ｕ者，ＴｃＴ均延长 （表３），峰值在３０ ｒａｉｎ者４名，９０ ｒａｉｎ者６ 名，与给药前相比，３０ ｍｉｎ和９０ ｒａｉｎ的延长 值有非常显著差异（ ＞４．８，Ｐ＜０．００１），２４ ｈ 则比给药前缩短；血浆肝素浓度分别为 ０．００３ ５土０．０２８ ｕ／ｍｌ和０．０１８土０．０２８ ｕ／ ｍ１。按皮肤部位分析，阴囊组和前额组ＴｃＴ 均比给药前显著延长，统计学处理，前者￡＞ ｄ．６，Ｐ＜０．０１，后者 ＞８．６，Ｐ＜０．００１。３０ｒａｉｎ 和９０ ｒａｉｎ的血浆肝素浓度，阴囊组分别为 ０．００２土０．００４ ｕ／ｍｌ、０．０２１土０．０３６ ｕ／ｍｌ，前 额组分别为０．００９土０．０ｉ２ ｕ／ｍｌ、０．０２１土０． ０２ｉ ｕ／ｍ！。 接受肝素１０ ０００ ｕ者２名，５ ０００ ｕ者阴 囊组１名，前额组２名，即ｌ２名受试者中５ 名，诉性功能增强 但未发现局部和全身性不 良反应。
３讨论 肝索是目前最主要的抗凝、抗血栓药物， 但必须非肠道给药才能进入血循环，而且由 于其半衰期短，需要反复给药才能达到预期 效果，用药过量叉易引起出血副作用。为此医 药工作者一直在探索新的给药途径。 随着透皮给药系统的研究进展，已证实 大分子物质以脂质体为载悻，亦可经皮吸收 ｉ９９０年德国Ｒｏｄｉｎｇ对脂质悻的护肤作用作 了深入的研究 ］。１９９１年Ａｒｈ＇ｎａｎｎ，Ｒｏｄｉｎｇ 等报 ，以脂质体包封的分子量为２５ ０００ ５０ ０００的蛋白质（单克隆抗体）可透过幼 猪表皮进入耀层皮下组织，他们亦观察到脂 质体肝素制剂可显著促进肝素透皮吸收，与 对照组相比，皮下组织中肝素高ｌ０倍，肾清 除率高３０倍，表明脂质体可促进肝素（平均 分子量ｉ５ ０００）透皮吸收，提高血药浓度。 ＫＪｍ等【 发现进入血循环的脂质悻肝素能明 显延长动物抗凝作用的持续时间。 Ｒｏｄｉｎｇ认为，开放式的经皮给药系统， 脂质体液态环境中水分蒸发可认为是一种药 物透皮的主要动力，与传统的封闭式给药装 置相比，生物利用度更高。他们成功地开发了 脂质体肝素喷剂，喷雾于皮肤上，使其形成凝 胶膜，以促进肝素透皮吸收，这是透皮给药系 ９一
维普资讯 http://www.cqvip.com 国生化药物杂志Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｈａｌ 堕！ 塑 ！ ！型坚 塑 芏蔓 ！鲞墨 统的一个全新概念。 为证明脂质体肝素开放式透皮给药能否 吸收进入血循环，我们对１２名健康男性自愿 者进行了试验，结果不论脂质体肝素１０ ０００ ｕ或５ ０００ ｕ，均在３０～９０ ｒａｉｎ引起ＴＣＴ延 长，与给药前相比，具有统计学意义，而且有 ５倒性功能增强，表明肝素透皮吸收良好，一 般认为 每次∞肝索５ ０００ ｕ，不引起凝血参 数改变。我们以肝素钙５ ０００ ｕ ｓｃ，ＴＣＴ等凝
收，进入血循环发挥抗凝作用。 ＴＣＴ法检测血循环中的肝素活性和浓 度，已被公认为筒单而敏感的方法，可检出血 浆肝素浓度０．０１～０．００５ ｕ／ｍ１ ］，我们亦证 实该方法的实用价值是肯定的 ］，所以我们 采用这一方法检测。至于皮肤部位，找们选用 文献中认为吸收作用较强的阴囊、前额和耳 后 ］，结果表明前额和耳后皮肤对吸收脂质 体肝素优于阴囊。脂质体肝素本身是美容制 血参数亦无变 。而ＲＯＶ１公司研制的脂 剂 ” ，不污染皮肤，并有改善微循环的作用。 质体肝素喷剂，经皮开放式给药，可经皮吸 因此用于前额、耳后还有护肤效果。 表３脂质体肝素５ ＯＯＯ ｕ喷雾于皮肤后ＴＣＴ和血装肝裹浓度的检穗结果
与绐葑前相比；ｌ： ＞４．６．Ｐ＜０．０ｈ ２： ＞８．６ Ｐ＜ ００１，３： ＞４．８ Ｋ０．００ｌ ｅｆｓ｛１ｓｔ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ＱｕａｌｉｔａＩｉｖｅｉｎ ｖｉｖｏｉｎｖ￣ｔｉｇａ＋
参考文献
ｌ Ｒｅｄｌｎｇ Ｊ．１．．ｉｐｏｓｏｍｅｓ．Ｓ０Ｆｗ，１９９９，ｌ｛：５０９ ２ Ａｒ∞ｍ Ｃ，Ｒｏｄ／ｒｉｇ Ｊ，Ｏｈｙｃｚｙ Ｍ．ｅｃ ａ１．Ｌｉｐ０ｓ∞ｅｓ ｆｒｏｍ ｓｏｙａ ｐｂｏ￣ｐｈｏｌｉｐｉｄｓ ａｓ ｐ￣ｃｕｔａｎｏｏｕｓ ｄｒｕｇ ｃａｒｄ一 １０～
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