第２ｏ卷第２期 ２Ｏ０６年３月 株洲工学院学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＺｈｌ】ｄ删ｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｄ．２０ Ｎｏ．２
Ｍａｒ．２０ｏ６
茶多酚脂质体体外透皮实验研究 旷英姿 。马全红 。郝小祯 。周华峰 。顾宁 （Ｉ．湖南化工职业技术学院化学工程系，湖南株洲４１２００４；２．东南大学化学化工系，江苏南京２１００９６； ３．东南大学生物医学工程系，江苏南京２１００９６）
摘要：采用Ｆｒａｎｚ扩散法进行离体兔皮渗透实验，考察茶多酚脂质体体外透皮渗透情 况。结果表明茶多酚脂质体能有效地渗透过皮肤，经皮释放药物能在短时间内较快达到一定药 量，随后缓慢持久地释放药物；药物的累积释放药量与药物的浓度、胆固醇的量等因素有关。 关键词：茶多酚；脂质体；累积释放药量；经皮渗透 中图分类号：Ｒ３６２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８—２６１１（２００６）０２—００２５—０４
脂质体（１ｉｐｏｓｏｍｅ）是１９６５年英国学者Ｂａｎｇ— ｌ姗Ｌ１ Ｊ等将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。 磷脂分散在水中形成多层囊泡，每一层均为脂质双分 子层，具有类似生物膜结构。脂质体具有亲水性和疏 水性，可以促进水溶性或难溶药物的经皮吸收。载药 脂质体可改变原形药物的理化性质，使药物直接作用 于病变部位，具有储存作用，使药物持续释放，减少 药物一次性释放引起的局部毒副作用。将脂质体局部 用药，可以逐渐释放活性成分，通过毛细血管吸收进 入体循环，产生全身或局部治疗作用。脂质体透皮给 药为近几年来研究较多、发展较快的给药方式，它避 免了肝脏的首过效应和药物在胃肠道的降解，提高生 物利用度，给药方便无痛苦，患者乐意接受。 茶多酚（Ｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ，１］Ｐ）是茶叶中所含的一 类多羟基酚类化合物的总称，它是一种新型天然抗氧 化剂，具有高效的抗衰老、抗辐射、消除人体过剩的 自由基［２ｌ、去脂减肥、降低血糖、血脂和胆固醇、预 防心血管疾病及抑制肿瘤细胞等多种保健和药理功 能，还有润肤、防皱、美容、吸收紫外线、抑菌、抗 菌、消炎等功效。但１］Ｐ性质不稳定，容易被氧化， 难以维持长期效用。经脂质体包封后，可增加ＴＰ的 稳定性，并使其具有较长的功效。目前国内尚未见有 关茶多酚脂质体的经皮渗透作用的研究报道，为此， 本研究对茶多酚脂质体进行了体外透皮初步实验。
１材料与仪器 实验所用材料为：茶多酚（含量≥９８．０％），无
锡世纪生物药业有限公司；ＶＥ，江苏春之谷生物制 品有限公司；大豆卵磷脂（Ｓｏｙｂｅａｎ Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ— ｃｈｏｌｉｎｅ，ｓＰＣ），北京双璇微生物培养基制品厂；胆固 醇（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ＣＨ），中国医药集团上海化学试剂 公司；ＫＩ－Ｉ２ＰＯ４（Ａ．Ｒ．），南京化学试剂厂；Ｎａ２ＨＰＯ４・ ｌ２Ｈ２Ｏ（Ａ．Ｒ．），中国医药集团上海化学试剂公司； 氯仿（Ａ．Ｒ．），上海化学试剂有限公司；乙醚 （Ａ，Ｒ．），上海久像化学试剂有限公司；实验用家兔 （雄性，（１．８±０．２）ｋｇ），东南大学动物中心提供； ０．９％生理盐水，南京小营制药厂。 ＲＥ５２－９８旋转蒸发仪，上海亚荣仪器厂：ＫＱ－ ２５０Ｅ型医用超声波仪，昆山市超声仪器有限公司； Ｆｒａｎｚ扩散池，自制；７５２Ｓ紫外一可见分光光度计， 上海棱光技术有限公司；电子恒温不锈钢水浴锅，上 海宝磊仪器有限公司。
２实验方法 ２．１脂质体的制备 采用逆向蒸发法 Ｊ制备。将大豆卵磷脂、胆固醇 和ｖＥ按一定比例加入到茄形瓶中，加入氯仿９ ｍｌ使 其溶解，在旋转蒸发仪上蒸发氯仿，瓶内壁上形成一 层均匀的膜脂，加入乙醚９ ｍｌ，膜脂溶解后，加入含 茶多酚的磷酸盐缓冲液３ ｍｌ，然后在超声仪上进行间 歇超声直至形成稳定的Ｗ／Ｏ型乳剂。将此混合液在 旋转蒸发仪上减压蒸发去除有机溶剂，在瓶壁上形成 凝胶，继续旋转蒸发，使瓶壁上的凝胶脱落，然后再 继续蒸发，得到均匀的脂质体？昆悬液，通氮气直到无
收稿日期：２００５—１０—２６ 基金项目：江苏省自然科学基金创新人才资助项目（Ｂｌ（２０Ｏ２４ｏ４） 作者简介：旷英姿（１９６３一），女，湖南湘潭人，湖南化工职业技术学院副教授，东南大学硕士，主要从事纳米药物载体方 面的研究．
维普资讯 http://www.cqvip.com 株洲工学院学报 ２Ｏ０６焦 醚味，备用。 由于茶多酚芳环上有多个酚羟基，使其较易氧 化，所以加入ｖＥ作为抗氧剂。［引 ， ２．２离体兔皮的制备 取体重（１．８±０．２）ｌ（ｇ健康家兔，处死后立即 仔细剃除腹部的兔毛，剥离腹部皮肤，并去除其皮下 脂肪，即得离体兔皮，选择无肉眼可见伤痕的皮肤供 实验用。离体兔皮用蒸馏水冲洗干净，再用生理盐水 冲洗至无浑浊为止，泡于０．９％生理盐水中，置于 ４℃冰箱冷藏备用。 ２．３标准曲线绘制 称取茶多酚３１．６ ｍｇ，用０．９％ＮａＣ１溶液溶解， 稀释定容至１００ ｍｌ，即得质量浓度为３１６ ／Ｉｌｌｌ的贮 备液。量取贮备液Ｏ．５、１．Ｏ、２．Ｏ、４．０、６．０、８．Ｏ、 ｌＯ．Ｏ、ｌ２．Ｏ Ｉｌｌｌ，用０．９％ＮａＣ１溶液定容至１００ ｍｌ即 得标准液。以０．９％ＮａＣ１溶液作为参比溶液，在２７５ ｎｌｉｌ处用紫外分光光度计测定吸光度Ａ值。以Ａ值对 茶多酚质量浓度ｃ（ Ｉｌｌ１）进行回归，回归方程为 Ａ＝０．０２４ ７ Ｃ＋０．００８ １． ｒ２＝０．９９９ ８，在１．５８～３７．９２ Ｉｌｌｌ范围内线性 关系良好（ｒ为方差）。 ２．４体外透皮吸收实验 用自制Ｆｒａｎｚ扩散池装置（如图ｌ所示）进行体 外透皮吸收实验。 图１透皮吸收装置图 释放池为ｌＯ Ｉｌｌｌ一次性注射器改装而成，长９ ｔｉｌｌ，内径１．５ ｔｉｌｌ，接受池为１００ ｍｌ的烧杯，内装５Ｏ Ｉｌｌｌ０．９％ＮａＣ１溶液作为接受液，置于３７℃的恒温水 浴中。在烧杯杯嘴处固定一静脉输液针头，连接５ Ｉｌｌｌ 注射器，用于取样和补液。将预先处理好的兔皮用手 术线固定在释放池下端（角质层朝向释放池），在释 放池内加入ｌ Ｉｌｌｌ茶多酚脂质体（２．１制备），并使兔 皮的真皮层恰与接受池的接受液面接触，透皮面积为 ７．０６５ ｃｍ２。开启电磁搅拌器，保持恒速搅拌。设定 时间取样，取样时间分别为第Ｏ．５、ｌ、２、４、６、８、 ｌＯ、ｌ２、２４ ｈ，每次取样３ Ｉｌｌｌ，取样后补加相同体积 的新鲜接收液。样液经Ｏ．４５／ａｍ微孔滤膜过滤后，用 紫外分光光度计在２７５ ｈｉｌｌ处测定Ａ值，代入回归方 程，求出相应的药物浓度，按以下公式计算累积释放 药量Ｑ：
Ｑ＝ 式中：
ｎ一１ ｃ一× ＋聋（ｃｆ× ）
Ｃ 为第ｎ个取样点测得的药物质量浓度，单位 为ｖｅＶ￣； Ｃ 为第ｆ个取样点测得的药物质量浓度，单位为 ｔ￣ｇ／ｍｌ； 为接受液总体积，本实验取值为５０ ｍｌ； 为第ｆ个取样点取出的接受液体积，本实验取 值为３ ｍｌ； Ａ为透皮面积，本实验取值为７．０６５ ｃｍ２。 以累积释放药量Ｑ对时间ｆ进行线性回归，所 得斜率ｋ为透皮速率常数，单位为 （ｃｍ２．ｈ）。
３结果与讨论 ３．１ ＴＰ溶液和１１Ｐ脂质体的透皮比较 将质量浓度为２０Ⅱ Ｉｌｌｌ的茶多酚溶液以及含２０ Ⅱ Ｉｌｌｌ的茶多酚脂质体，分别进行１２ ｈ离体兔皮透皮 实验，考察脂质体对ＴＰ透皮速率及累积释放药量的影 响。实验数据见表ｌ，不同制剂累积释放药量一时间关 系曲线见图２。 表１ ＴＰ累积释放药量Ｑ ｖｅ，／ｃｍ￣
ｆ方程 Ｑ＝４４．４５ｔ＋ｌ９．７１ Ｑ＝１４．９５ｔ＋５５．８４ 吕 、 蠲
餐 襞
璐 ｌ４
图２ ＴＰ累积释放药量与透皮时间的关系 结果表明，１１Ｐ溶液的透皮速率大于１１Ｐ脂质体； １１Ｐ脂质体累积释放药量随时间上升较１１Ｐ溶液缓慢， 除第０．５ ｈ和第ｌ ｈ外，其余各个时间点均低于１Ｐ溶
维普资讯 http://www.cqvip.com 第２期 旷英姿，马全红，郝小祯，周华峰，顾宁 茶多酚脂质体体外透皮实验研究 ２７ 液累积释放药量，即脂质对ＴＰ透皮有影响，ＴＰ溶液 的累积释放药量大于ＴＰ脂质体，经ＳＰＳＳ１ ２．０软件 进行Ｐａｉｒｅｄ Ｓａｍｐｌｅｓ Ｔ ｔｅｓｔ检验，Ｐ＜Ｏ．０５二者之间有 显著性差异。 ３．２类脂比、茶多酚浓度对透皮的影响 在１］Ｐ质量浓度不同的情况下（分别为ｌ０、２ｏ和 ３０ ｍｇ／ｍ１），将卵磷脂与胆固醇摩尔比分别为１：１、１ ：Ｏ．５和１：０．３的脂质体进行１２ ｈ透皮，可以得到累积 释放药量Ｑ与时间ｔ之间的关系方程，即０４方程， 同时还可以得到透皮速率常数ｋ。实验所得数据及结 果见表２。
表２ ｆ２－ｔ方程和透皮速率
从表２可见，当类脂比相同时，ＴＰ质量浓度在 １Ｏ一２０ ｍｇ／ｍｌ范围内，透皮速率变化不大；而当１１Ｐ 质量浓度增加至３０ ｍｇ／ｍｌ时，透皮速率有所增大。 同一ＴＰ质量浓度下，改变卵磷脂与胆固醇的比例， 从１：１—１：０．５（摩尔比），即减少胆固醇的量，对透 皮速率的影响较小，但是当继续减少胆固醇的量，至 卵磷脂与胆固醇的比为１：０．３，则对透皮速率有一定 的影响，透皮速率将增大。将透皮速率ｋ对ＴＰ质量 浓度Ｃ作图，从图３中可更清晰地看到类脂比和茶多 酚质量浓度对渗透速率的影响。
）：ｎ（胆周醇）＝ｌ：１ ）：ｎ（胆固醇）＝ｌ：Ｏ．５ ）：ｎ（胆圈醇）＝ｌ：Ｏ．３
ＴＰ质量浓度ｃ／ｍｇ．ｍｌ。。 图３类脂比和茶多酚质量浓度对渗透速率的影响 由于在不同类脂比下，渗透速率随１１Ｐ质量浓度 的变化基本一致，我们选择其中一种比例的类脂比， 如卵磷脂与胆固醇的摩尔比为１：０．３时，将１１Ｐ质量 浓度为１Ｏ、２ｏ和３０ ｍｇ／ｍｌ的脂质体分别进行透皮吸 收，进一步观察１１Ｐ质量浓度对透皮累积释放药量的 影响。累积释放药量与时间关系曲线见图４。
４ ６ ８ ｌＯ ｌ２ ｌ４ 透皮时间
图４累积释放药■与时间关系曲线
从表２，图４中可见，ＴＰ质量浓度为１Ｏ和 ２０ ｍｇ／ｍｌ的脂质体透皮速率接近，而１１Ｐ质量浓度为 ３０ ｍｇ／ｍｌ的脂质体透皮速率较大。ＴＰ质量浓度为１Ｏ 和２０ ｍｇ／ｍｌ的脂质体累积释放药量在同一时间较接 近，二者经Ｐａｉｒｅｄ Ｓａｍｐｌｅｓ Ｔ ｔｅｓｔ检验，无显著性差异 （Ｐ＞０．０５）；而 ＴＰ质量浓度为３０ ｍｇ／ｎｄ的脂质体第 ２ ｈ后，在同一时间累积释放药量较前两种脂质体要 大，经Ｐａｉｒｅｄ Ｓａｍｐｌｅｓ Ｔ ｔｅｓｔ检验，１１Ｐ质量浓度为３ｏ ｍｇ／ｍｌ的脂质体累积释放药量与其余两种具有显著性 差异。
４结论 １）体外透皮实验显示，ＴＰ脂质体混悬液透过皮 肤进入接受池的药物量除第０．５ ｈ和第１ ｈ时高于相 同质量浓度的ＴＰ溶液，其他时间点均低于相同质量 浓度的ＴＰ溶液，说明药物经包封后，能穿透皮肤， 在短时间内较快达到一定药量，然后缓慢持久地释放 药量，即作用迅速持久，使药物在病变部位缓慢释 放，增加局部药物浓度，从而提高治疗效果。 ２）１１Ｐ质量浓度对脂质体体外透皮有一定的影 响，但１０～２０ ｍｇ／ｍｌ之间无显著性差异，提示在此 １１Ｐ质量浓度范围内不能通过简单的增加剂量以增加 疗效，而应该从其它途径对制剂进行优化，以期得到 更好的透皮效果。 ３）在一定范围内减少胆固醇的量，对透皮渗透 几乎没有影响，但当再进一步减少胆固醇的量，会使 得透皮速率增大。Ｍ．Ｃ６ｃｅｒａ等［５］研究表明，随着胆 固醇量的增加，不饱和卵磷脂脂膜的流动性降低，反 之流动性增加。这是否可以认为脂质的流动性增加， 则脂膜的刚性降低，透过的药量将增加呢？Ｍ．Ｃ６ｃｅｒａ 等认为，脂质的流动性与透皮的直接关系还不能清楚 地说明。影响药物透皮的因素有多个，除了与脂膜的 流动性有关，还与药物的性质、透皮时温度和皮肤的 质量等多种因素有关，有关问题还需作进一步的研究 和探讨。