图片简介:本技术属生物技术领域，涉及一种珠芽魔芋花器组培获得再生植株的方法，包括外植体消毒、愈伤组织诱导、拟球茎诱导与增殖、拟球茎萌芽与生根诱导等过程。
本技术工艺简单，操作方便，能耗较低，以魔芋花器为外植体材料诱导获得愈伤组织，再诱导获得拟球茎并进行增殖，增殖效率较高，再将拟球茎培养成完整植株，其获得无性系植株起源于不带病菌和病毒的干净器官，可以规模化高效繁育珠芽魔芋健康种苗(种芋)，解决珠芽魔芋产业发展中健康种芋严重匮乏的问题，对促进魔芋产业发展有现实意义，对开辟魔芋种苗脱毒技术研究新途径具有参考价值。
技术要求1.一种珠芽魔芋花器组培获得再生植株的方法，其特征在于，其步骤如下：1)、外植体消毒：取珠芽魔芋佛焰苞未展花序，去除外层花芽鳞片，用饱和洗衣粉溶液清洗花序表面后冲洗干净，在超净工作台中用75％酒精将整个花序表面均匀擦拭数次后，切开佛焰苞，切取花器；2)、愈伤组织诱导：取珠芽魔芋花器接种到愈伤组织诱导培养基中，在24～28℃下暗培养获得愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基是以改良MS作为基本培养基，并添加：NH4Cl 1000～1200mg/L、KNO3 2400～2600mg/L、Ca(NO3)2 600～630mg/L、NaH2PO4150～170mg/L、MgSO4·7H2O 360～380mg/L、肌醇100～120mg/L、烟酸0.2～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.1～3mg/L、盐酸硫胺素0.5～5mg/L、氨基乙酸1.0～3.0mg/L、2,4-D 1～10mg/L、6-BA 1～3mg/L、琼脂5500～6500mg/L、蔗糖25000～35000mg/L、泛酸钙1～5mg/L、生物素0.05～0.2mg/L，培养基灭菌前调其pH 5.8～6.2；3)、拟球茎诱导与增殖取上述愈伤组织接种到拟球茎诱导培养基中，在24～28℃下暗培养获得拟球茎，获得的拟球茎接种在相同成分的增殖培养基中进行增殖培养；所述拟球茎诱导培养基和增殖培养基均是以改良MS作为基本培养基，并添加：NH4Cl1000～1200mg/L、KNO3 2400～2600mg/L、Ca(NO3)2 600～630mg/L、NaH2PO4 150～170mg/L、MgSO4·7H2O 360～380mg/L、肌醇100～120mg/L、烟酸0.2～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.1～3mg/L、盐酸硫胺素0.5～5mg/L、氨基乙酸1.0～3.0mg/L、TDZ 0.1～1mg/L、琼脂5500～6500mg/L、蔗糖25000～35000mg/L、泛酸钙1～5mg/L、生物素0.05～0.2mg/L，培养基灭菌前调其pH5.8～6.2；4)、拟球茎萌芽与生根诱导取上述经过增殖的拟球茎切成单粒接种到萌芽与生根培养基中，在温度为26～30℃，光照强度为1000～2000xl，光照周期为12h下培养获得再生植株；所述萌芽与生根培养基是以改良MS作为基本培养基，并添加：NH4Cl 1000～1200mg/L、KNO3 2400～2600mg/L、Ca(NO3)2 600～630mg/L、NaH2PO4150～170mg/L、MgSO4·7H2O 360～280mg/L、肌醇100～120mg/L、烟酸0.2～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.1～3mg/L、盐酸硫胺素0.5～5mg/L、氨基乙酸1.0～3.0mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、琼脂5500～6500mg/L、蔗糖25000～35000mg/L、泛酸钙1～5mg/L、生物素0.05～0.2mg/L，培养基灭菌前调其pH 5.8～6.2；所述改良MS是保留微量元素和铁盐，去除其它成分。
2.根据权利要求1所述的珠芽魔芋花器组培获得再生植株的方法，其特征在于：所述花器是雄蕾或雌蕾。
3.根据权利要求1所述的珠芽魔芋花器组培获得再生植株的方法，其特征在于：所述拟球茎诱导培养基和增殖培养基中添加有NAA，添加量在2mg/L以下。
技术说明书一种珠芽魔芋花器组培获得再生植株的方法技术领域本技术属生物技术领域，涉及一种植物组织培养获得再生植株的方法，具体是一种珠芽魔芋花器组培获得再生植株的方法。
背景技术魔芋属天南星科魔芋属多年生单子叶草本植物，具发达的地下球茎,是植物界中迄今发现唯一能大量合成葡甘聚糖的高等植物，其膨大的地下球茎富含葡甘聚糖、淀粉、蛋白质等，其加工制成的魔芋粉具备很好的凝胶性、持水性、复配性、高粘性以及稳定性等，被广泛应用于食品、保健、医药、建筑、日化、石油钻探等领域，具有极高的开发利用价值。
我国魔芋已有两千多年栽培历史，其中花魔芋是栽培比较广泛的品种，但其繁殖系数低、生长周期长及规模化种植病害严重，尤其不适于在热带高温高湿多雨生态区种植，严重制约着我国魔芋产业的发展。
珠芽魔芋起源于热带雨林，是一类可以在植株主茎与分枝交叉点、分枝与分枝交叉点、分枝与叶片交叉点上生长出气生珠芽球茎的魔芋，主要分布在北纬19°～26°、东经92°～100°之间和赤道线附近的印度尼西亚热带雨林中，喜高温高湿的环境，具抗病能力强、产量高、葡甘聚糖含量高等特性，是魔芋属中适宜于热带、亚热带低海拔地区高温高湿环境的半阴性经济作物，具有良好的产业开发与市场前景，有望成为推动我国热区乃至全国魔芋产业快速发展的发动机。
但目前在珠芽魔芋产业化发展过程中存在种苗供应不足与用种需求量较大的矛盾，而传统的切块繁殖和珠芽繁殖方式远不能满足与日俱增的用种需求，且该繁殖方式易于传播病害，难以保证种苗质量，会严重影响和限制珠芽魔芋的产品品质和产业化发展。
植物花器为不带病菌和病毒的干净器官，在规模化高效组培快繁健康种苗方面具有先天优势，国内目前尚未有利用珠芽魔芋花器进行组织培养的研究报道。
技术内容本技术的目的是针对现有技术的不足而提供一种珠芽魔芋花器组培获得再生植株的方法，利用珠芽魔芋花器进行组培快繁，可以规模化高效繁育珠芽魔芋健康种苗(种芋)，解决珠芽魔芋产业发展中健康种芋严重匮乏的问题，对促进魔芋产业发展有现实意义，对开辟魔芋种苗脱毒技术研究新途径具有参考价值。
本技术所采用的技术方案：一种珠芽魔芋花器组培获得再生植株的方法，其步骤如下：1、外植体消毒：取珠芽魔芋佛焰苞未展花序，去除外层花芽鳞片，用饱和洗衣粉溶液清洗花序表面后冲洗干净，在超净工作台中用75％酒精将整个花序表面均匀擦拭数次后，切开佛焰苞，切取花器。
2、愈伤组织诱导：取珠芽魔芋花器接种到愈伤组织诱导培养基中，在24～28℃下暗培养获得愈伤组织。
所述愈伤组织诱导培养基是以改良MS作为基本培养基，并添加：NH4Cl 1000～1200mg/L、KNO3 2400～2600mg/L、Ca(NO3)2 600～630mg/L、NaH2PO4150～170mg/L、MgSO4·7H2O 360～380mg/L、肌醇100～120mg/L、烟酸0.2～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.1～3mg/L、盐酸硫胺素0.5～5mg/L、氨基乙酸1.0～3.0mg/L、2,4-D 1～10mg/L、6-BA 1～3mg/L、琼脂5500～6500mg/L、蔗糖25000～35000mg/L、泛酸钙1～5mg/L、生物素0.05～0.2mg/L，培养基灭菌前调其pH 5.8～6.2。
3、拟球茎诱导与增殖取上述愈伤组织接种到拟球茎诱导培养基中，在24～28℃下暗培养获得拟球茎，获得的拟球茎接种在相同成分的增殖培养基中进行增殖培养。
所述拟球茎诱导培养基和增殖培养基均是以改良MS作为基本培养基，并添加：NH4Cl 1000～1200mg/L、KNO3 2400～2600mg/L、Ca(NO3)2 600～630mg/L、NaH2PO4 150～170mg/L、MgSO4·7H2O 360～380mg/L、肌醇100～120mg/L、烟酸0.2～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.1～3mg/L、盐酸硫胺素0.5～5mg/L、氨基乙酸1.0～3.0mg/L、TDZ 0.1～1mg/L、琼脂5500～6500mg/L、蔗糖25000～35000mg/L、泛酸钙1～5mg/L、生物素0.05～0.2mg/L，培养基灭菌前调其pH 5.8～6.2。
4拟球茎萌芽与生根诱导取上述经过增殖的拟球茎切成单粒接种到萌芽与生根培养基中，在温度为26～30℃，光照强度为1000～2000xl，光照周期为12h下培养获得再生植株。
所述萌芽与生根培养基是以改良MS作为基本培养基，并添加：NH4Cl 1000～1200mg/L、KNO3 2400～2600mg/L、Ca(NO3)2 600～630mg/L、NaH2PO4150～170mg/L、MgSO4·7H2O 360～280mg/L、肌醇100～120mg/L、烟酸0.2～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.1～3mg/L、盐酸硫胺素0.5～5mg/L、氨基乙酸1.0～3.0mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、琼脂5500～6500mg/L、蔗糖25000～35000mg/L、泛酸钙1～5mg/L、生物素0.05～0.2mg/L，培养基灭菌前调其pH 5.8～6.2。
所述改良MS是保留微量元素和铁盐，去除其它成分。
本技术进一步的方案是，所述花器是雄蕾或雌蕾。
本技术进一步的方案是，所述拟球茎诱导培养基和增殖培养基中添加有NAA，添加量在2mg/L以下。
本技术是以魔芋花器为外植体材料诱导获得愈伤组织，再诱导获得拟球茎并进行增殖，再将拟球茎培养成完整植株，其获得无性系植株起源于不带病菌和病毒的干净器官。
本技术工艺简单，操作方便，能耗较低，增殖效率较高，可以规模化高效繁育珠芽魔芋健康种苗(种芋)，解决珠芽魔芋产业发展中健康种芋严重匮乏的问题，对促进魔芋产业发展有现实意义，对开辟魔芋种苗脱毒技术研究新途径具有参考价值。
附图说明图1珠芽魔芋花器愈伤组织(A雄蕾愈伤组织；B雌蕾愈伤组织)。
图2珠芽魔芋拟球茎。
图3珠芽魔芋完整植株。
具体实施方式下面结合实施例，对本技术的具体实施方式作进一步详细描述。
以下实施例用于说明本技术，但不用来限制本技术的范围。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。
本技术中，所采用的培养基均是将常规MS培养基进行改良，并添加其它成分。
改良MS培养基保留了微量元素和铁盐，但去除其它成分。
实施例一1、外植体消毒：取珠芽魔芋佛焰苞未展花序，去除外层花芽鳞片，用饱和洗衣粉溶液清洗花序表面后，自来水冲洗3遍，在启动20min以上的超净工作台中，用75％酒精将整个花序表面均匀擦拭3遍后，切开佛焰苞，切取雄蕾。