12．用台盼蓝拒染法测定细胞存活率。（参见实验1）
结果
1．本实验回收的细胞中多形核白细胞占90-100%（存活率＞90%）。单个核细胞占0-5%，血小板＜0.5%，红细胞占0-5%。
2．所得多形核白细胞数大约占初始细胞数目的40-80%。
实验要点
1．如果实验过程中能与血或细胞悬液直接接触，请遵守操作规则进行无菌操作。
7．用2g/LNaCl溶液替代冰的无菌水，重复前述溶解红细胞的步骤。
8．用等体积（1ml）的20g/LNaCl溶液恢复等渗。
9．用290×g离心6分钟，使多形核白细胞沉积，弃上清液。
10．将细胞重新悬浮于PBS液中（含1-5%胎牛血清），290×g离心6分钟，弃上清液。
11．根据需要将细胞重新悬浮于适当的培养基中。
第二节多形核白细胞的分离
基本原理
本实验是根据不同的细胞之间其密度不同的原理，通过速度沉降法对外周血多形核白细胞进行分离。
试剂与器材
·抗凝血
·葡聚糖T500（商品）
·聚蔗糖（密度d=1.077g/ml，商品）
·胎牛血清（56℃，30分钟加热灭活）
·2g/L、9g/L、20g/LNaCl溶液
·含1-5%胎牛血清的PBS液（无Ca2+）
2．选择最适宜的抗凝剂（枸橼酸钠，肝素，EDTA等）。
3．抽血后在2小时内使用。
4．注意将稀释后的血小心地铺在聚蔗糖液面上，避免破坏其界面。
5．在一个较大容积（50ml）的试管中洗涤细胞，以便更好地去除多余的聚蔗糖和血小板。
6．多形核白细胞分离液可购买商品。若用商品请按商品说明书进行操作。
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3．将聚丙烯管置于室温中45分钟进行红细胞自然沉降。
4．将富含白细胞的上清液转移至另一个50ml的管中。
5．室温，200×g离心10分钟。
6．弃去上清，将细胞重悬于30ml的PBS液中（含1-5%的胎牛血清）
二．多形核白细胞的分离
1．使用10ml的吸管吸取30ml的细胞悬液轻轻地铺在15ml的聚蔗糖液面上。（图2）
·4g/L台盼蓝染液（溶解在PBS液中）
·50ml聚丙烯圆锥管
·毛细吸管
·有旋转桶转子装置的离心机
·10ml吸管，吸球
·光学显微镜，细胞计数板
·超净台（如果需要无菌条件）
操作步骤
一．红细胞的沉降
1．将葡聚糖T500用9g/LNaCl溶液配成30g/L的溶液（W/V）。（图1）
2．将25ml的抗凝血与等体积的30g/L葡聚糖溶液在聚丙烯管中混匀。
图2
2．18-20℃在旋转转子中800-1000×g离心20-30分钟。（慢慢增加速度，无制动停转）。
3．弃上清液（含单个核细胞）。
4．将含有多形核白细胞和红细胞的沉淀重新悬浮在1ml冰的无菌水中30秒，溶解红细胞。
5．立即加入等体积（1ml）的20g/LNaCl溶液充分沉积，弃上清液。