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显微镜计数法
【试剂】 白细胞稀释液 冰乙酸 2.0ｍｌ 10g／Ｌ亚甲蓝（源自结晶紫）数滴 蒸馏水加至100ｍｌ
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稀释液中各组分的作用
蒸馏水— 低渗溶解红细胞， 乙 酸— 可加速红细胞溶解，同时乙酸能固 定核蛋白，使白细胞核显现，便于辨 认。 染 料— 使核略着色，且易与红细胞稀释液 区别。
细胞大小、形态 细胞核形态、染色质结构 细胞浆、特异性颗粒
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（一）中性粒细胞
胞体呈圆形，直径10μｍ～15μｍ，约为红细 胞的２倍。胞质量丰富染粉红色，含大量细小 均匀的紫红色中性颗粒。细胞核染色质粗糙不 匀，排列紧密成小块状．染深紫红色。根据核 的形状分为中性杆状（带状）核粒细胞和中性 分叶核（多节核）粒细胞两种。
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白细胞的寿命
粒细胞： 10～15天 淋巴细胞：数天～20余年 单核细胞：数月
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白细胞的归宿
衰老的粒细胞被单核-吞噬细胞系统清除，也 有一部分从口腔、气管、消化道和泌尿生殖道排 出。 B淋巴细胞经抗原刺激后分化为浆细胞，产生 特异性抗体，参与体液免疫。T淋巴细胞经抗原致 敏后，可产生多种免疫活性物质，参与细胞免疫。 粒-单核系祖细胞在骨髓经分化成原始单核细胞 后发育为成熟单核细胞，释放入血液。
按常规取血稀释后数得4个大格共有白细 胞280个，求白细胞计数结果？ 解：WBC＝280/4〓10〓20〓106 ＝14〓109/L
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请您练习
取血40ul加入稀释液0.36ml，镜下计数 了8个大格共有白细胞320个，求其白细胞计 数结果？ 答案：稀释倍数＝（360＋40）／40 ＝10 WBC＝ 320／8〓10〓10〓106 ＝ 4〓109/L
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嗜 酸 性 粒 细 胞
嗜中性粒细胞
嗜碱性粒细胞
淋巴细胞
第二章 白细胞检验
本章目录
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 第六节 第七节 白细胞生理概要 白细胞计数 白细胞分类计数 中性粒细胞常见的形态变化 白细胞计数和白细胞分类计数的临床意义 嗜酸性粒细胞计数 红斑狼疮细胞检验
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第一节 白细胞生理概要
外周血常见白细胞的种类与功能 白细胞的寿命和归宿
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总
结
5. Hb吸管的清洗顺序是：蒸馏水冲洗 →95%乙醇脱水除脂→ 乙醚干燥 6.镜下计数时要遵循一定顺序，对于压 线的白细胞，应采取:数上不数下；数左不数 右（左、上计入，右、下弃去）的原则计数。
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总 结
计算公式
四个大格白细胞数 白细胞数／Ｌ＝————————〓10〓20〓106 4
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（三）嗜碱粒细胞
圆形，直径10μm～1２μm ，较 其他粒细胞小。胞核常被颗粒遮盖， 核染色质粗着色较浅，分叶常不明 显．形态不规则，清楚时可见２叶～ ４叶。胞质量较少，常呈淡红或淡紫 红色，含少量粗大，但大小不均、排 列不规则的紫黑色嗜碱性颗粒，常盖 于核上。嗜碱性颗粒易溶于水，故染 色时易被溶解消失，而呈淡红色空穴 状。
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学习目标
1.叙述白细胞显微镜计数法的原理、试剂组 成、注意事项 2.学会白细胞显微镜计数法的操作方法 3.准确识别外周血常见正常和异常白细胞形 态 4.学会白细胞分类计数方法
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外周血常见白细胞的种类与功能
(一)外周血常见白细胞的种类 1.白细胞的形态： 无色有核，球形，直径7μm～25μm。 2.白细胞的种类（形态分类）： 三类五种--------
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显微镜计数法
3.计数池
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显微镜计数法
3.计数池 各 池刻划有9ｍｍ2面 积的刻度，分为 9 个大方格，每格长、 宽各1ｍｍ，面积1 ｍｍ2，体积为 0.1 ｍｍ３，容量 0.1μl。
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计数白细胞的四个大方格
四个角的大 方格都用单线划 分为16个中方格， 为计数密度小的 （白）细胞用。
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大淋巴细胞：
体积较大直径 10μm ～ 15μm ，胞 核染色质比小淋巴细胞 疏松，胞质量丰富，呈 透明的淡蓝色，常有少 量大小不等的嗜天青颗 粒。
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五种白细胞鉴别要点
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点评
三种粒细胞主要依据胞质中颗粒形态和 染色性质去相互鉴别； 淋巴细胞与单核细胞则重点根据细胞核 的特征去区别。
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（五）淋巴细胞
按其个体可有大小之分。 小淋巴细胞：呈圆形，直径6μm ～10μm 。胞核圆形。偶见 凹陷，染色质粗糙紧密，排列 均匀，无空隙。常有隐约成块现象，核周常有染色 质浓集，核膜明显，有时可见潜在核仁。 胞质量极少，仅在核的一侧出现一线天蓝或深 蓝色，有的甚至完全不见。胞质中一般无颗粒 存在，偶见几颗大小不等的紫红色嗜天青颗粒。
根据统计学研究，白细胞在计数池内的 随机分布符合泊森分布。 从计算公式中可以看出计数范围越大， 计数的细胞越多，计数域误差越小。
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注意事项
1、稀释液要过滤使用，试管、计数板等均须清 洁。 2、计数池内细胞分布要均匀。 总数在参考范围内，每个大方格间白细胞数不 得相差8个以上，两次重复计数误差不得超过10%， 否则要重新充液计数。 3、遇白细胞数太低者、白细胞数太高者稀释倍 数应灵活掌握。 4、当外周血出现大量有核红细胞时应予以校正 除去。
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稀释倍数的确认
稀释倍数＝（溶质＋溶剂）/溶质 注意：体积单位需一致后方能运算。
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请您练习
求以下操作的稀释倍数： 稀释液（ml）＋血液（µl）稀释倍数 20 0.38 20 25 0.48 20 40 0.39 10 201 2.00 10
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请您练习
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粒细胞
中性粒细胞（N） 嗜酸粒细胞（E） 嗜碱粒细胞（B）
白细胞
淋巴细胞 （L）
单核细胞 （M）
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白细胞的发育
起源于骨髓多能造血干细胞。
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白细胞的功能
中性粒细胞：具有较强的运动能力和吞噬活性。胞 内酶有复杂的杀菌系统。 嗜酸粒细胞：可作变形运动，吞噬抗原抗体复合物， 灭活组织胺减轻过敏反应。 嗜碱粒细胞：与IgE具有较强的结合力，脱粒释放组 胺导致速发性变态反应。 淋巴细胞：参与体液免疫和细胞免疫。 单核细胞：有强大的吞噬功能，传递抗原信息。
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显微镜计数法
【器材】 1.显微镜（目镜10〓；物镜10〓） 2.微量吸管（Hb吸管） 传统的Hb吸管玻璃 上有10µl和20µl（误差＜〒1%）两个刻度。 使用前应经严格校正。橡胶乳头提供负压
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Hb吸管的消毒清洗
每次使用后，应 经2ｇ/Ｌ过氧乙酸浸 泡2ｈ消毒。然后依 次用蒸馏水冲洗， →0.95Ｌ/Ｌ乙醇除 脂脱水，→乙醚干燥 后，才能再次使用。 注意清洗的顺序不可 颠倒。
容量： 0.1μl/大方格
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计数红细胞的五个中方格
中央的一个大方格， 用双线划分为25个 中方格，每个中方 格又被单线划分为 16个小方格，共有 400个小方格，供 计数密度大的（红） 细胞用。
容量： 0.1μl/大方格 0.004μl/中方格
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４.盖玻片
特制的计数池专用盖片，要求玻璃表面 平整光滑，有一定重量，不被细胞悬液所抬 浮，厚度应为0.4ｍｍ～0.7ｍｍ。盖玻片两 面的平整度是：0.002ｍｍ以内， 大小: 24mm〓20mm〓0.6mm。
操作
４.充液 将计 数板和盖玻片擦净，盖 片盖在计数池上，用毛 细滴管或玻璃棒取已混 匀的细胞悬液1滴，充 入计数池与盖玻片间的 缝隙中，静臵2min～ 3min，待白细胞下沉。
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镜下白细胞形态
似成熟蚕卵， 中央核深染， 胞质色淡。
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显微镜计数法
5.计数方法 用低倍镜依次计数四 角的四个大格内的白细胞 数。对于压线的白细胞， 应采取数上不数下；数左 不数右（左、上计入，右、 下弃去）的原则，保证计 数域的一致性，使计数准 确。
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显微镜计数法
【操作】 １．取小试管１支，加入白细胞稀释液0.38ｍｌ。 ２．用微量吸管准确吸取外周血20ul。 ３．擦去管尖外部余血，立即将吸管插入盛有稀释液的 试管底部，轻轻将血放出，并吸取上清液漱洗吸管２次～３ 次，注意每次不能冲浑稀释液，最后用手振摇试管混匀。
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白细胞计数计数误差
1.技术误差: 由于操作不正确和仪器不精 确造成的误差。 2.固有误差: 因每次白细胞分布不可能 完全相同所造成的偏差属固有误差，也称计 数域误差。
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常见技术误差：
血液凝固 稀释倍数不准 充液不当 识别错误 器材不符合要求
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固有误差(计数域误差)
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（四）单核细胞
呈不规则的圆或椭 圆形，为外周血中最大 的细胞．直径15μm ～ 25μm 。细胞核大呈不 规则圆形、肾形、马蹄形， 或不规则分叶有时折叠卷曲。染色质细致疏松如网 状，染淡紫红色。胞质量丰富．染淡蓝、灰蓝色不 等，常呈毛玻璃样半透明。胞质内含有大量细小灰 尘样紫红色嗜天青颗粒。核凹陷处胞质染色较 淡．偶见无颗粒胞质是伪足样伸出。
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