ELISA检测方法
ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学检测方法，广泛应
用于医学、生物科学及环境科学等领域。

该方法利用抗体和酶的相互作用，能够检测和测定特定抗原或抗体的存在和浓度。

下面将详细介绍ELISA的
原理、步骤、应用以及优缺点。

ELISA的原理主要基于抗原-抗体结合的原理。

首先，在固体表面
（晶髓酶标板等）上吸附或共价结合抗原，形成抗原固相。

然后，将待测
样品加入酶标板孔中与固定的抗原发生反应，形成抗原-抗体复合物。

随
后加入特异性的酶标记抗体，使其与复合物形成二抗三重复合物。

最后，
通过添加底物，酶催化底物产生可检测的色变反应，测定抗原或抗体的浓度。

1.抗原固定：将已知浓度的抗原加入酶标板中，并使其吸附在固体表面，形成抗原固相。

固相吸附通常通过物理吸附或共价结合实现。

2.试样加入：将待测样品加入酶标板中与固定抗原发生反应，形成抗
原-抗体复合物。

通常需要对样品进行初步处理，如稀释、加入染色剂等。

3.二抗加入：将特异性酶标记的二抗加入酶标板中，与复合物发生特
异性反应，形成二抗三重复合物。

4.清洗：通过洗涤剂将非特异性结合物洗去，以减少干扰。

5.基质加入：加入特定底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯二胺）
或ABTS（2,2'-联氨基二（2-甲基丙酰氧）乙烷磺酸铵），酶催化产生彩
色反应。

6.反应停止：用酸、碱或金属离子等停止反应，阻断底物的氧化反应，维持产色稳定。

7.反应测定：使用光度计测定产生的色素的吸光度或荧光。

ELISA具有广泛的应用。

在医学领域，ELISA常用于检测血液中的抗
体和抗原，从而诊断传染病、自身免疫疾病等。

在生物科学研究中，ELISA可用于测定细胞因子、蛋白质等生物大分子的浓度。

此外，ELISA
也可以用于检测环境样品中的污染物，如重金属、农药等。

1.灵敏度高：ELISA可以检测到较低浓度的抗原或抗体，常常超过其
他方法的敏感度。

2.特异性强：ELISA利用特异性抗体进行识别，可准确检测特定的抗
原或抗体。

3.操作简单：ELISA的操作相对简单，可以批量进行，且不需要显微
镜观察。

4.实验时间短：ELISA一般在数小时内完成，速度较快。

5.可定量分析：由于ELISA基于酶活性产生的色素反应，可以通过光
度计或荧光计进行定量测定。

1.受杂质影响：ELISA对杂质较为敏感，杂质可能导致结果的误差。

2.受交叉反应影响：一些样品中存在多种交叉反应的物质，可能导致
结果的偏差。

3.需要标准物质：ELISA的结果通常需要与标准曲线相对照，需要制
备标准物质进行校正。

总结来说，ELISA作为一种常用的免疫学检测方法，具有许多优点，如高灵敏度、特异性强、操作简单、实验时间短和可定量测定等。

它在医学、生物科学及环境科学等领域有着广泛应用。

然而，ELISA也存在一些缺点，如受杂质和交叉反应的影响，以及需要标准物质的要求。

因此，在使用ELISA时需要注意这些问题，以确保准确的检测结果。