《生物化学与分子生物学》实验教学大纲（供本科临床医学及临床医学英语班、口腔医学、眼科学、耳鼻咽喉学、麻醉学、病理诊断学、医学心理学、临床药学专业使用）课程名称：生物化学课程编号：实验学时：48 一、本实验课的性质、任务与目的生物化学与分子生物学是一门重要的实验性基础医学学科。

生物化学所阐述的是人体物质组成、物质代谢过程、代谢平衡的调控、物质代谢与生理机能之间的关系等内容，是进一步学习其他基础医学科和临床医学课程必备的基础知识。

理论知识来源于实践研究，生物化学的实验技术和方法不仅为生物化学的迅速发展创立了条件，也为其它基础医学和临床医学的研究奠定了基础。

生物化学实验课是帮助同学掌握基本实验技能、基本实验操作技术，提高独立思考、独立分析和独立解决问题的能力，学会正确的科研思维方法，养成严谨的科学作风，把同学们所学得的生化理论知识和实验内容相结合的重要手段。

近代医学的发展经常运用生物化学理论与技术诊断、治疗和预防疾病，许多疾病的发病机制也需要从分子水平加以探讨。

特别是近年来，随着生物化学与分子生物学的迅速发展促进了人们对许多疾病如恶性肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病、免疫系统疾病等重大疾病的认识，随之出现了基因诊断和基因治疗的方法。

由于生化理论是在科学研究实验基础上高度总结的结
论性观点，所以，生化实验课一方面使学生在实验中验证理论的来源与正确性、加深对理论的理解；另一方面，生物化学实验手段又是生命科学发展的必用手段，生化实验课是培养学生科研能力和素质的必要的、重要的过程。

二、本实验课的基本理论生物化学实验课主要基于如下基本理论：①分光光度法及比色分析法基本原理。

②离心分离原理。

③酶促反应动力学理论④结合酶的作用原理⑤PCR技术及基本原理⑥蛋白质盐析、有机溶剂沉淀蛋白质、凝胶过滤层析和电泳技术等有关第蛋白质分离纯化的基本理论。

⑦生物大分子分离、纯化的一般实验设计相关理论。

⑧实验误差、数据处理、有效数字相关理论。

⑨精密度、标准差、变异系数、回收率概念及理论。

三、实验方式与基本要求实验一生化实验基本操作、蛋白质的盐析作用1．熟记实验室规则和常用生化仪器名称。

2．了解分光光度计、离心机等仪器设备的工作原理，学会正确操作及一般维护。

3．掌握盐析的基本原理、实验方法和应用。

实验二血清蛋白质含量的测定1．掌握Lowry比色法测定蛋白质的基本原理，初步学会实验方法。

2．掌握血清蛋白质含量测定的临床意义。

3. 学会标准曲线的制做。

实验三碱性磷酸酶Km值的测定1．加深酶促反应动力学基本知识的理解和记忆。

2．掌握双倒数法测定酶Km 值的原理，学会实验方法。

3. 掌握碱性磷酸酶（AKP）活性测定的原理和方法实验四血糖含量的测定及激素对血糖浓度
的影响 1．掌握人体血糖的正常范围及生理意义。

2．熟记肾上腺素对血糖浓度的影响并解释其作用机制。

3．了解血糖浓度测定的基本原理、学会测定方法。

实验五乳酸脱氢酶及其辅酶Ⅰ的作用1.掌握结合酶作用特点和原理。

2.学会实验动物的取材方法及组织匀浆制备方法。

实验六血清谷丙转氨酶活性的测定 1.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的原理，学会测定方法。

2.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。

实验七 PCR技术体外扩增DNA及扩增产物鉴定1.掌握PCR技术的原理和方法，了解其应用。

2.掌握琼脂糖凝胶电泳技术分离DNA的原理和方法，了解其应用。

实验八脲酶的凝胶过滤分离纯化 1.掌握凝胶过滤层析法的基本原理及应用。

2．学会利用凝胶过滤层析分离蛋白质的基本方法。

实验九聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 1．熟悉电泳的基本原理和技术。

2．掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的基本原理和方法，了解其应用。

四、实验项目的设置与内容提要序实验实验实验要实验项目内容提要号求学时类型 4 验证必做①学习生化基本操作②学习离1 生化实验基本操作性心机使用③学习蛋白质盐析蛋白质的盐析作用综合必做①分光分析原理和技术②lowry 2 血清蛋白质含量的测定 4 性比色测定蛋白③标准曲线制做综合必做①AKP活性测定②双倒数法测3 碱性磷酸酶Km值的测4 性Km③米氏方程矩形双曲线测Km 定验证必做① Folin—吴氏法测定血糖 4 血糖含量的测定及激素 4 性② 观
察激素对血糖浓度影响对血糖浓度的影响 5 乳酸脱氢酶（LDH）及4 验证必做制备酶蛋白和辅酸I提取液，观其辅酶Ⅰ的作用性察二者共同或单独存在的作用 6 血清谷丙转氨酶活性的 4 验证必做血清谷丙转氨酶活性的测定测定性学习血清转氨酶测定临床意义 7 PCR技术体外扩增DNA 8 综合必做① PCR技术体外扩增DNA 及扩增产物鉴定性② 琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA 8 脲酶的凝胶过滤分离纯 8 综合必做①丙酮粗提大豆脲酶②凝胶过化性滤纯化脲酶③脲酶活性测定9 聚丙烯酰胺凝胶电泳分8 综合必做①学习电泳原理和技术②聚丙离血清蛋白质性烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白五、考核方式与评分办法实验成绩采用综合评定方法确定。

成绩由四部分构成：实验态度，包括出、缺席等情况占10％；平时课堂实验操作技能考核占30％；实验报告成绩占30％；期末实验理论考试成绩占30％。

实验总分100分，实验成绩不及格者，本课程不予通过，并且不准参加生物化学理论考试。

六、本实验课配套教材或实验指导书[1] 生物化学与分子生物学实验教程．锦州医学院生化教研室自编教材． [2] 药立波．医学分子生物学实验技术．北京：人民卫生出版社．2002年10月[3] 杨建雄．生物化学与分子生物学实验技术教程．北京：科学技术出版社．2000年七、其它本实验教学大纲可供本科临床医学及临床医学英语班、口腔医学、眼科学、耳鼻咽喉学、麻醉学、病理诊断学、医学心理学、临床药学专业使用。

执笔人：肖建英教研室：生化教研室系教学主任审核签名：。