晚期妊娠时，先扪清胎先露，然后上推先露 部，在先露部下方穿刺；也可在胎儿颈背部空隙 处或胎儿肢体侧空隙处穿刺。
取材
4、确定穿刺部位后，以20～21号腰椎穿刺 针垂直刺入腹壁，通过腹壁及宫壁两次阻力，当 有落空感时即进入羊膜腔，抽出芯针，见羊水溢 出，接上注射器，顺利抽得清亮羊水，再次证实 在羊膜腔内后，可注射药物。如欲做羊水检查， 则抽取羊水20ml立即送检。
结果判断
纯合型
嵌合型
易位型
结果判断
(3)易位型
约占全部病例的2.5%～5%，多为罗伯逊易 位，即着丝粒融合，其额外的21号染色体长臂易 位到另一近端着丝粒染色体上。最常见为D/G易 位，D组中以14号染色体为主，核型为46，XX （或XY）-14，+ t（14q;21q），少数为15号染 色体。另一种为G/G易位，是由于G 组中两个21 号染色体发生着丝粒融合，形成等臂染色体，核 型为46，XX（或XY）-21，+ t（21q；21q）。
四、实验步骤
取材 ↓ 体外细胞培养 ↓ 制片 ↓ 显带 ↓ 核型分析
取材
1、腹部备皮，排光膀胱，平卧位常规消 毒后铺无菌洞巾。
2、麻醉，一般不必需要，精神紧张者或 可用普鲁卡因或利多卡因麻醉。
取材
3、选择穿刺部位，经B超胎盘定 位后避开胎盘。
中期妊娠时，一般选择在耻骨联合上3横指 相当于子宫下段处，于腹中线或其左右侧旁，扪 及囊样感的部位做穿刺；也可于宫底与耻骨联合 连线中点或左右任何一侧穿刺。
四、实验步骤
取材 ↓ 体外细胞培养 ↓ 制片 ↓ 显带 ↓ 核型分析
制片
培养6-7d后，倒置显微镜下观察细胞生长情况，有若干梭
形型细胞克隆生长，每个克隆细胞状态较好且形成细胞岛， 更换新鲜培养液，每天观察，2-3d后，每个细胞岛已长成 一个个较大克隆且细胞融合度达70%-80%，并出现数目 不等的较多圆形，类圆形透亮细胞时，可进行细胞收获， 收获前一天或当天更换培养液，加入秋水仙素，终浓度为 0.1微克每毫升，作用4-4.5h,镜下观察有大量“鱼眼样” 透明细胞出现时，即可收获。吸取培养上清至一新离心管， 加入0.25%胰酶，37℃消化2min，1000r/min离心10min， 弃上清，加入0.075 mol/L KCl 低渗液，37℃12-13min， 用3:1甲醇/冰醋酸预固定和固定后，滴片，常规G显带。
显带

3、在Giemsa 染液中染色10min， 自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片。

4、镜检：在显微镜高倍目镜下检 查显带标本，在染色体上若出现清晰 的深浅相间的带型，即为可取标本， 可供摄像分析
四、实验步骤
取材 ↓ 体外细胞培养 ↓ 制片 ↓ 显带 ↓ 核型分析
结果判断
纯合型
嵌合型
易位型
结果判断
二、实验原理
1. 羊水中有一定数量胎儿脱落细胞，通过
羊膜穿刺获取羊水中的胎儿细胞，经体外 培养后通过G显带实验进行核型分析，判断 染色体是否畸形，诊断是否患有21三体综 合征。
2. G显带是指以 Giemsa 染料染色后，
使染色体显带的技术。Giemsa染料是 由噻嗪和曙红组成的，着色时DNA先 于2个噻嗪分子结合，然后再与一个曙 红分子结合，形成沉淀物，而DNA的 某些部位对染料不敏感，由此形成明 暗相间的条带。
(1)标准型
占患者总数的92.5%，患儿体细胞染色 体有47条，有一条额外的21号染色体，核 型为47，XX（或XY）+21。其发生机制为 亲代（多为母亲）的生殖细胞在减数分裂 时染色体不分离所致。
核型分析
纯 合 型
结果判断
纯合型
嵌合型
易位型
结果判断
(2)嵌合型
仅占21-三体综合征的2.5%-5%，是指受精卵 在有丝分裂期间染色体不分离而导致的，因此只 是部分而不是所有的细胞存在缺陷。患儿体内含 有正常和21-三体细胞二种细胞株，形成嵌合体， 核型为46，XX（或XY）/47，XX（或XY）+21， 其临床表现随正常细胞所占百分比而定。嵌合型 的患儿的智商较其它两型高，临床并发症的发生 率也相对较少。
三、实验材料、试剂及器材
（1）器材：离心管，离心机，天平，37℃
温箱，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，光 学显微镜，标本板，玻璃铅笔，定时钟， 染色缸，直柄虹膜镊，滴管。
（2）药品：pH6.8 PBS，Giemsa，
0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化钠100ml， 加0.25%胰蛋白酶1ml）。
四、实验步骤
取材 ↓ 体外细胞培养 ↓ 制片 ↓ 显带 ↓ 核型分析
显带

1、将制好的染色体标本，置 72℃～75℃烤箱中烤片3h。

2、放入预温至37℃的0.025%胰 酶溶液中（pH=7.2～7.4）消化1min左 右，每次的作用时间并不完全相同， 可先试一张片子，再根据显带效果调 整胰酶作用时间。
21，三体综合征产前诊断
泸州医学院第三组满分 PPT
案例
张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎
儿不正常，前来进行遗传咨询。经询问得知，张某的一表 姐曾生育一智力低下儿子，经某医院诊断为先天愚型，但 具体核型不详。张某孕前检查各项优生指标均正常，孕前 无感冒服药史，无有毒有害物质接触史。张某的丈夫，32 岁，司机，有烟酒嗜好，在妻子怀孕前半年已戒酒，减少 吸烟量。两人核型检查均正常，家族中其他特殊疾病患者。 根据张某的情况，作中孕期唐氏筛查，结果张某血清的 AFP , hCG 和uE3检查结果阳性，再进行B超检查胎儿情 况，证实胎儿胎龄正确，发育正常。根据上述资料，张某 所孕胎儿具有21三体综合症的高风险，建议进行产前诊断。
五、注意事项
（1）胰蛋白酶浓度和处理时间随气温高低有所不
同。一般规律是标本存放时间越长，在胰蛋白酶 当中处理时间越长。太新鲜的标本，染色体会出 现毛茸现象。片龄很长的标本往往会导致斑点状 的染色体。 （2）胰蛋白酶温度：温度越高，反应的速度就越 快，一般是室温，但温度必须稳定至少20min。 （3）胰蛋白酶处理的时间：如果细胞呈紫蓝色， 说明胰蛋白酶的作用时间不够，如果细胞呈桃红 色，说明作用时间刚好。
5、穿刺完毕后拔出穿刺针，局部压迫5分 钟，穿刺部位敷以无菌纱布，胶布固定。
四、实验步骤
取材 ↓ 体外细胞培养 ↓ 制片 ↓ 显带 ↓ 核型分析
细胞体外培养
无菌超净台上将羊水注入50ml无菌离心管
内，1500r/min常温离心10min，移去上清， 留约0.5ml上清液，枪尖混匀，分装吸取至 3个60mm培养皿（falcon），每皿添加4ml 羊水完全培养基，37℃ 5%CO2培养箱中培 养6-7d。
综上总结给与遗传建议： 若出现上述情况则为21三体综合症。就目
前的医疗水平而言，21-三体综合征既没有 方法治愈也没有方法预防，建议该孕妇不 宜生育该患儿。如果核型为46，XX(XY) 则 没有21三体综合症， 可以生下小孩。

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产前诊断
定义
对象
方法
产前诊断方法
1.X线检查 2.超声波检查 3.胎儿镜 4.羊膜穿刺术 5.绒毛吸取术 6.脐带穿刺术 7.孕妇外周血分离胎儿细胞 8.植入前诊断
产前诊断
定义
对象
方法
一、实验目的
掌握遗传病的产前诊断过程，通过对21三
体综合征的诊断设计，培养运用遗传学现 代技术解决医学实际问题的能力。
孕妇就诊
常规筛查
综合分析风险值
孕期检查
进一步确诊
羊膜穿刺
产前诊断
定义
对象
方法
产前诊断
产前诊断在遗传咨询的基础上，主要通过遗传
学检测和影像学检查，对高风险胎儿进行明确诊 断，通过对患胎的选择性流产达到胎儿选择的目 的，从而降低出生缺陷率，提高优生质量和人口 素质。产前诊断又称宫内诊断。它是为了了解胎 儿在子宫内的健康情况，有无先天性畸形或遗传 病，用某些特殊检查方法在子宫内对胎儿进行诊 断，以便及早采取措施避免残疾儿的出生，提高 出生人口的素质，是有生学的重要组成部分。
产前诊断
定义
对象
方法
案例
张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎
儿不正常，前来进行遗传咨询。经询问得知，张某的一表 姐曾生育一智力低下儿子，经某医院诊断为先天愚型，但 具体核型不详。张某孕前检查各项优生指标均正常，孕前 无感冒服药史，无有毒有害物质接触史。张某的丈夫，32 岁，司机，有烟酒嗜好，在妻子怀孕前半年已戒酒，减少 吸烟量。两人核型检查均正常，家族中其他特殊疾病患者。 根据张某的情况，作中孕期唐氏筛查，结果张某血清的 AFP , hCG 和uE3检查结果阳性，再进行B超检查胎儿情 况，证实胎儿胎龄正确，发育正常。根据上述资料，张某 所孕胎儿具有21三体综合症的高风险，建议进行产前诊断。