（ 200905109，20090936 ） ； 吉 林 省 教 育 厅 项 目 （ 2009D206， 2011 － 187） 作者简介：桂语歌（ 1986 － ） ，女，吉林长春人，硕士研究生，研究方向： 天 然产物化学。 通讯作者：李丽（ 1969 － ） ，女，吉林人，副教授，博士，硕士研究生，研究 方向： 天然产物化学。
辽宁中医杂志 2011 年第 38 卷第 9 期
·1867·
超声提取 2 次，提取时间为 30min，过滤，合并滤液，减 压回收溶剂至干，用 4mL 甲醇溶解，得样品。 1. 2. 2 不同提取方法 精密称取生地和熟地药材粉 末 4 份，每份约 2g，80% 乙醇 50mL 为提取溶剂，分别 采用回流、常温超声，冷浸 3 种提取方法提取 2 次，提 取时 间 为 30min，过 滤，合 并 滤 液； 另 一 份 样 品 采 用 ASE 快速溶剂萃取方法提取，以 80% 乙醇作为提取溶 剂，提取温度 40℃ ，提取时间 5min，静态提取 2 次，过 滤，合并滤液。将过滤后的样品减压回收溶剂至干，分 别用 4mL 甲醇溶解，得样品。 1. 3 样品总多酚含量测定
生地和熟地药材购于长春仁德医药； Folin － Ciocalteu 试剂，没食子酸标准品，2，2 － diphenyl － 1 － picrylhydrazyl （ DPPH ·） 试 剂 购 自 Sigma Chemical Co. 公司 （ St. Louis，Mo） ； 实验所用试剂均为分析纯，购于 北京北化精细化学品有限责任公司； 水为超纯水 18. 2 ΩPa。 1. 2 样品制备 1. 2. 1 不同溶剂提取 精密称取生地和熟地药材粉 末 5 份，每份约 2g，置于具塞锥形瓶中，分别加入乙酸 乙酯、正丁醇、丙酮、无水乙醇、80% 乙醇 50mL，常温下
DPPH 自由基（ 二苯代苦味肼基自由基，2 － 2 － diphenyl － 1 － picry － hydrazyl radical） 是一种稳定的以氮 为中心的质子自由基，其甲醇或乙醇溶液呈紫色，在波 长 515 nm 处有强烈吸收。在有自由基清除剂存在时， 自由基清除剂提供 1 个电子与 DPPH 的孤对电子配对 而使其褪色，褪色程度与其接受的电子呈定量关系，在 波长 515nm 处的吸光度变小，其变化程度与自由基清 除程度呈线性关系，即自由基清除剂的清除自由基能 力越强、吸光度越小［5 － 6］。
地和熟地 ASE 提取物的总多酚含量高。在 DPPH 实 验中，生地正丁醇提取物和熟地丙酮提取物的清除自 由基的能 力 最 强，ASE 法 提 取 样 品 均 具 有 很 好 清 除 DPPH 自由基能力。 1 实验部分 1. 1 实验设备与材料
DU800 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 （ Beckman ） ； SHB － Ⅲ循环水式多用真空泵（ 郑州长城科工贸有限 公司） ； BS － 124S 电子天 平 （ Sartorius AG，Sartorius） ； 加样枪（ Germany） ； 旋转蒸发仪（ 上海爱郎仪器有限公 司） ，ASE － 150 快速溶剂萃取仪（ Dionex） 。
关键词：生地； 熟地； 总多酚； DPPH 中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1000 － 1719（2011）09 － 1866 － 03
Analysis and Determination Scavenging Free Radical of the Capacity of Raw Rehmanniae and Processed Radix Rehmanniae by DPPH
Key words： Raw Rehmanniae； Processed Radix Rhmannia； total phenolics； DPPH
地黄为玄参科植物地黄 （ Rehmannia glutinosa Libosch） 的新鲜或干燥块根。根据炮制方法不同分为鲜 地、生地和熟地 3 种。鲜地是秋季采挖，除去芦头、须 根及泥沙，直接药用； 生地是将鲜地缓缓烘焙至八成 干； 熟地是将生地酒炖至酒吸尽，取出，晾晒至外皮黏 液稍干，取出晒至八成干时，切厚片或块，干燥。药理 研究表明： 生地黄具有清热凉血、养阴生津的作用； 而 熟地黄具有滋阴补血，益精填髓的功效［1 － 2］。另具报 道，地黄具有抗衰老的作用［3］。
如表 1 所示，采用正丁醇、无水乙醇、乙酸乙酯、 80% 乙醇及丙酮 5 种不同溶剂提取生地和熟地中总多 酚物质，生地不同样品的总多酚含量分别为 408. 98， 399. 75，244. 76，200. 51，166. 3mg 没食子酸 / g 样品，熟 地不 同 样 品 的 总 多 酚 含 量 分 别 为 300. 04，398. 49， 220. 45，240. 24，196. 57 mg 没食子酸 / g 样品。可见， 生地正丁醇提取的样品总多酚最高； 而熟地无水乙醇 提取的样品总多酚含量最高。 2. 1. 2 不同提取方法样品总多酚含量测定 如表 2
·1866·
辽宁中医杂志 2011 年第 38 卷第 9 期
DPPH 法分析测定生地和熟地清除自由基的能力
桂语歌，宗晓菲，王晶，刘春明，李丽
（ 长春师范学院中心实验室，吉林 长春 130032）
摘 要：目的： 采用不同提取溶剂、不同提取方法提取生地和熟地，并对其进行抗氧化活性研究。方法： 采用 Folin － Ciocalteu 方法测定生地和熟地不同提取物的总多酚含量，利用 DPPH 测定样品清除自由基的能力。结果： 生地正丁醇提 取物，熟地无水乙醇提取物的总多酚含量最高，ASE 提取总多酚含量高。在 DPPH 实验中，生地正丁醇提取物和熟地丙 酮提取物的清除自由基的能力最强，ASE 法提取样品均具有很好清除 DPPH 自由基能力。结论： 生地和熟地清除 DPPH 自由基能力的强弱与样品中的总多酚含量无关。
表 1 不同溶剂提取生地和熟地中的总多酚含量
样品
正丁醇提取 无水乙醇提取 乙酸乙酯提取 80% 乙醇提取
丙酮提取
总多酚含量（ mg 没食子酸 / g 样品）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
生地
熟地
408. 98
300. 04
399. 75
398. 49
244. 76
220. 45
200. 51
240. 24
166. 30
196. 57
采用 Folin － Ciocalteu 方法测定样品总酚含量［4］， 结果表示为每克样品中含有相当没食子酸的毫克数。 吸取 0. 2 mL 一定浓度（ 使吸光度值落在标准曲线上） 的没食子酸标准品或样品溶液，分别加入 1mL 0. 5N 的 Folin － Ciocalteu 试剂，0. 8 mL7. 5% 的碳酸钠溶液，充 分混合，室温下放置 0. 5h，然后在 765nm 下测吸光度。 以没食子酸溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标得标 准曲线方程为 y = 9. 5623x － 0. 1332（ R2 = 0. 9999） ，没食 子酸质量浓度范围为 0. 02 ～ 0. 2 mg / mL。 1. 4 DPPH 分析
［DPPH·］REM = ［DPPH· ］T /［DPPH· ］T = 0 × 100%
其中［DPPH·］T 为自由基清除过程中某一时刻 ［DPPH·］的质量浓度，［DPPH·］T = 0 为［DPPH·］的 原始质量浓度。
根据［DPPH·］残留率与相应地黄提取物的添加 量，制作二者的关系曲线，通过线性回归分析可以得到
GUI Yu-ge，ZONG Xiao-fei，WANG Jing，LIU Chun-ming，LI Li （ The Central Laboratory，Changchun Normal University，Changchun 130032，Jilin，China）
Abstract： Objective： To study antioxidant activity of Raw Rehmanniae and Processed Radix Rehmannia extracted by different solvents and methods． Methods： The samples were measured by Folin － Ciocaileu method and the free radical 2，2 － diphenyl － 1 － picrylhydrazyl （ DPPH ˙） assay． Results： The n － butanol extract of Raw Rehmanniae showed highest total phenolic contents （ TPCs） ，however，the TPCs of ethanol extract Raw Rehmannia showed the highest TPCs． The TPCs of Raw Rehmanniae and Raw Rehmannia is the highest by the ASE method of extract． In DPPH experiment，the n － butanol extract of Processed Radix Rehmanniae and acetone extract of Processed Radix Rehmannia exhibited strong antioxidant activity，and the extracts of Processed Radix Rehmanniae and Processed Radix Rehmannia by ASE have strong antioxidant activity． Conclusion： The TPCs of of Processed Radix Rehmanniae and Processed Radix Rehmannia didn’t affect the antioxidant activities．