樱桃组培快繁技术研究
摘要：以甜樱桃品种高砂、顽童和中国樱桃品种莱阳矮樱为试材，以MS与F14为基本培养基进行组织培养试验。
对增殖率和成苗率等指标进行研究。
结果表明，用F14做培养基3个樱桃品种茎尖组培苗的增殖系数比MS高，F14上高砂、顽童和莱阳矮樱的增殖系数分别是4．17、3．78和5．0，MS上则分别是3．33、3．22和4．17；在F14上，樱桃茎尖组培成苗率莱阳矮樱为83．3％，高砂23．3％，顽童16．7％；在F14添加植物生长调节剂的增殖培养基中，以F14+6-BA 1．0mg／L+IBA 0．5mg／L+GA32．0mg／L对高砂和顽童的茎尖组培苗增殖系数大，以F14+6-BA 1．Omg／L+IBA 0．1mg／L+GA 2．0mg／L对高砂组培苗的增殖系数大，促进节间伸长的效果好：在一步生根法培养基F14+IBA 1．0mg／L上，平均生根率高砂较顽童高；在F14+IBA 1．0mg／L上添加活性炭500～1000mg／L时，可有效提高顽童的生根率。
关键词：樱桃；茎尖；组织培养；快速繁殖
组织培养技术的发展为果树的育种工作带来许多方便，也为长期保存果树种质资源提供了新的手段⋯。
研究表明，通过茎尖外植体进行樱桃组培繁殖，可达到快速繁殖苗木和脱去病毒病的效果。
1 材料和方法
试材为甜樱桃品种高砂、顽童．中国樱桃品种莱阳矮樱，均来自辽阳市农林科学院果树基地。
试验采用F14和Ms 为基本培养基；F14+蔗糖30 L+琼脂7 L为分化培养基；F14+植物生
长调节剂为增殖培养基，添加的植物生长调节剂有6一苄基氨基嘌呤(6．BA)、赤霉素(GA )和吲哚丁酸(IBA)，具体配方见表3；F14+IBA和MS+IBA为生根培养基。
F14+IBA 1．0mg／L为一步生根法培养基。
F14+IBA 1．0mg／L+活性炭为试验活性炭作用的培养基。
培养基的pH值为5．6～5．8，分装在lO0ml三角瓶中，在121℃下灭菌20分钟，在黑暗条件下保存备用。
1．1 试材的预处理
取樱桃芽露绿的一年生成熟枝条，剪成带一个芽、长约2cm的枝段，用刀将芽从枝段上削下来(带些木质部)，剥除芽鳞片，去除茎表皮，用洗洁精浸泡3分钟，在流水中冲洗60～90分钟，在超净工作台上用70％酒精消毒30秒钟，用无菌水冲洗3次(每次1～2分钟)，再用0．1％氯化汞消毒15分钟，置无菌水中浸泡20分钟，用无菌水冲洗4次，待接种。
1．2 试材的接种培养
在超净工作台上将经预处理的试材用镊子剥除芽外部的叶原基，去除木质部，切下1mm大小的茎尖，接种于分化培养基F14+蔗糖3O L+琼脂7 L上培养。
培养温度25±2cC，光强2000～2500K．每天光照l6小时。
1．3 评价指标
微茎尖成苗数=萌发后能正常增殖继代、具有成苗能力的微茎尖数。
成苗率(％)=成苗微茎尖数／接种微茎尖数×100
增殖芽数=接种1个芽25天后增殖的所有芽数
增殖系数=转接后芽数／转接前芽数
生根率(％)=生根嫩梢数／接种嫩梢数×100
2 结果与分析
2．1 不同樱桃品种间茎尖组培成苗率的差异
在F14基本培养基上，接种甜樱桃品种高砂、顽童和中国樱桃莱阳矮樱的茎尖，高砂的成苗率为23．3％，顽童16．7％，莱阳矮樱83．3％(表1)。
在组培中发现，甜樱桃萌发率较低，接种后的第2天伤口处及茎尖边缘褐变，之后有的茎尖周围发生大量愈伤组织，延缓了茎尖的萌发及成苗时间，甚至导致死亡。
而中国樱桃莱阳矮樱则萌发率和成苗率均高，组培容易。
2．2 基本培养基对樱桃组培苗增殖的影响
由表2看出，在F14基本培养基上的高砂、顽童和莱阳矮樱，其组培苗的增殖系数分别比MS培养基上的高0．84、0．56和0．83。
观察发现，在F14上培养的植株形态更接近于露地栽培的甜樱桃形态，叶形正常。
而在MS上的组培苗叶形不正常，叶片狭长，易出现玻璃化苗，有一定程度的黄化。
因此，F14培养基比MS培养基更适合樱桃组培苗的增殖继代培养。
2．3 基本培养基中添加植物生长调节剂对甜樱桃组培苗增殖的影响
由表3可看出，F14培养基添加植物生长调节剂后，高砂和顽童组培苗的增殖系数均比单纯用FI4 的大。
适宜的培养基依次为F14+6一BA 1．0mg／L+IBA 0．5mg／L+GA32．0mg／L，F14+6-BA 1．0mg ／LF14+6一BA 1．0mg／L+GA32．0mg／L，F14+6一BA 1．0mg／L+IBA 0．1mg／L。
上述4种培养基中，高砂表现增殖能力均较强，顽童较差
2．4 增殖培养基中添加不同浓度的GA。
对甜樱桃高砂组培苗增殖的影响
用F14+6一BA 1．0mg／L+IBA 0．1mg／L作为增殖培养基，添加不同浓度的GA，，比较甜樱桃高砂的茎尖组培增殖效果。
结果表明，添加的GA，浓度由2．0mg／L增至4．0mg／L时，高砂组培苗的增殖系数由4．13下降到3．27。
由此认为，上述增殖培养基中添加2．0mg／L GA。
对高砂组培苗的增殖效果最佳。
试验中发现，随添加的GA。
浓度逐渐增大，组培苗表现出节问过度伸长、苗细弱、叶片形态不正常等现象。
2．5 F14和MS基本培养基中添加IBA对樱桃组培苗生根的影响
由表4可以看出，F14和MS基本培养基加入不同浓度IBA对3个樱桃品种组培苗生根的影响差别较大，接种25天后，加入1．0mg／L IBA的培养基樱桃组培苗生根率均较高；莱阳矮樱生根容易，生根多，根系健壮，生根率远远超过高砂和顽童，高砂的生根能力强于顽童。
F14基本培养基添加IBA 1．0mg／L较MS基本培养基添加IBA 1．0mg／L对组培苗生根效果好。
2．6 不同甜樱桃品种组培苗生根能力的差异
用F14+IBA 1．0mg／L作生根培养基，甜樱桃高砂与顽童茎尖接种25天后，组培苗的生根情况见表5，高砂较顽童平均生根率高，每株生根组培苗的根数多，但根长不及顽童。
2．7 生根培养基中添加活性炭对甜樱桃顽童组培苗生根的影响
在F14+IBA 1．0mg／L一步生根法培养基中，加人不同浓度的活性炭，接种甜樱桃顽童茎尖25天后，调查组培苗的生根率，结果见表6
由表6看出，在F14+IBA 1．0mg／L生根培养基中添加活性炭浓度为500～1000mg／L时，甜樱顽童的组培苗生根较好，平均生根率为60％～66．7％，浓度过高或过低会降低生根率。
3 小结与讨论
以甜樱桃品种高砂、顽童和中国樱桃品种莱阳矮樱为试材，进行茎尖组织培养研究表明：基本培养基F14比MS对樱桃茎尖组培苗增殖系数高，在F14培养基上高砂、顽童和莱阳矮樱的增殖系数分别是4．17、3．78和5．0，而在MS培养基上则分别是3．33、3．22和4．17；在F14基本培养基上，樱桃茎尖组培成苗率高砂为23．3％，顽童16．7％，莱阳矮樱83．3％；在F14添加植物生长调节剂的增殖培养基中，以F14+6一BA 1．0mg／L+IBA 0．5mg／L+GA 2．Omg／L对甜樱桃茎尖组培苗增殖系数大；在FI4+6一BA 1．0mg／L+IBA 0．1 mg／L+CA，2．0mg／L时，对高砂的增殖系数为高，促进甜樱桃组培苗节间伸长效果好，随GA 浓度的增大组培苗表现出节间过度伸长、苗细弱和叶片形态不正常现象；基因型影响组培苗的增殖继代和生根，在一步生根法培养基F14+IBA 1．0mg／L上，甜樱桃平均生根率高砂比顽童高；在F14+IBA 1．0mg／L添加活性炭浓度为500～1000mg／L时，可有效提高甜樱桃顽童组培苗的生根率。
代红艳研究表明，通过预备试验的两步生根法可提高甜樱桃组培苗的生根率 J，如顽童在两步生根法的所有处理中，生根率均为100％。
本试验采用～步生根法与两步生根法比较，找到了最佳的处理方法，能提高组培苗的生根系数。
试验表明，在F14基本培养基中添加IBA 1．0mg／L有利于根的伸长生长，但愈伤组织大量形成，与两步生根法相比，难于达到商品化微繁的要求。
通过前人试验研究，本试验也证明了在甜樱桃生根培养基中添加500—1000mg／L的活性炭可提高植株的生根率，而且可保持根系的正常生长，
防止根系老化，使根系健壮。