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目录
1 免疫检测技术的发展 2 电化学发光系统及其原理 3 电化学发光技术的优势
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一.免疫检测技术的发展
电化学发光
放免
1959
酶免 荧光免疫 化学发光
1970~80‘S
2000‘S
免疫检测技术三个重要的历程
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放射免疫分析
1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了 免疫测定的敏感度，这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域 。
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酶免疫测定法
1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫测定方法（ELISA），这种非放 射标记免疫测定在临床检验，特别是感染性疾病的诊断中取得了广泛应用。 缺点 试剂制备困难。 操作步骤复杂，耗时长。 影响因素多，质量控制难以保证。 最后测定的是颜色的光密度，其精密度和敏感性不如发光免疫技术。
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电化学发光免疫技术
电化学发光免疫测定法（ECLIA）发展于 1996年，它在 发光反应中加入了电化学反应，是继放射免疫、酶免疫、 化学发光免疫测定之后的新一代标记免疫测定技术，是 电化学和免疫测定相结合的产物。
世界公认的 最先进 的临床免疫检测技术
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二.电化学发光技术的发展史及其原理 1.发展历程
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化学发光免疫测定法
化学发光免疫测定法出现于20世纪90年代初。由于最后测定的是光子的量， 不但对检测者无害，其敏感度和精密度均优于RIA，而且试剂较稳定，并可 进行全自动分析。
缺点
采用标记催化酶（如辣根过氧化物酶）或化学发光分子（如鲁米诺）的方 法，其化学反应一般不稳定，为间断的、闪烁性发光，而且在反应过程中 易发生裂变，导致反应结果不稳定。 检测时需对结合相与游离相进行分离，操作步骤多。 反应原理相对落后。（间接发光）
1996年德国宝灵曼公司推出Elecsys 2010系统 世界上第一台 应用电化学发光技术的全自动免疫分析仪 1998年罗氏公司收购宝灵曼公司 2001年罗氏推出电化学发光免疫模块E 170 罗氏是全球唯一 应用电化学发光免疫技术制造仪器的厂商 2006年罗氏推出电化学发光免疫模块e601 2007年罗氏推出电化学发光免疫模块e411
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7 测量池中的工作电极采集光信号
数字信号转化成浓度，报结果。The end！
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总结
双抗体夹心法： 1）测定大分子抗 原 2）测定成正比： 信号低＝浓度低， 信号高＝浓度高
检测有多个结合 位点的抗原，如 TG，TSH，PRL， FSH，LH等。
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竞争法： 1）测定小分子抗 原 2）测定成反比： 信号低＝浓度高， 信号高＝浓度低
[Ru(bpy)3]2+－e¯→ [Ru(bpy)3]3+（强氧化剂）
TPA·+ [Ru(bpy)3]3+ → [Ru(bpy)3]2++ TPA
ↆ γ光子（620nm）
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电化学发光原理
底物：三联吡啶钌[Ru(bpy)2+3] N羟基琥珀酰胺酯(NHS) 三丙胺(TPA)
在电极阳极表面，以上两种电化学活性物质同时失去电子发生氧 化反应，2价的[Ru(bpy)2+3] 标记物被氧化成3价的[Ru(bpy)3+3] 的标 记物，TPA被氧化成阳离子自由基TPA+* ， TPA+* 很不稳定，自发地失 去一个质子而形成自由基TPA* ，其为强还原剂，将一个电子给3价的 [Ru(bpy)3+3] ，使其成为激发态的Ru(bpy)2+3 ，而TPA自身被氧化成氧 化产物。激发态的Ru(bpy)2+3衰减时发射一个波长620nm的光子，重新 形成基态的Ru(bpy)2+3 。这一过程在电极表面周而复始进行，产生许 多光子。使得光信号增强。
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电化学发光的反应步骤
① 双抗体夹心法
② 竞争法
两种方法在反应原理上并没有什么不同，最后都是检测钌标记回到基态 所释放的光信号。只不过竞争法多加入了一种竞争物，和放射免疫分析 有异曲同工之处。
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双抗体夹心法
1 试剂/样本加入反应杯
第一抗体标记生物素（与微磁珠结合） 第二抗体标记钌Ruthenium（产生光信号）
4个结合位点
3.高稳定性 ↆ
亲和常数高， 解离常数很低。
4 最终在反应杯里形成磁颗粒连接的抗原抗体复合物
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5 反应杯中的复合物被转移至测量池
测量池中启动磁场，吸附磁颗粒连接的免疫复合物。 加入Procell溶液，去除反应体系杂质并提供三丙胺TPA 。
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6 在测量池电场环境下TPA提供电子，激发钌发出光信号
检测仅一个结合 位点的抗原，如 FT3，FT4，TT3， TT4，TG-Ab，TRAb，E2，孕酮， 睾酮等。
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电化学发光技术的优势
与其它几种标记免疫测定技术相比，电化学发光具有更多的优点： 1. 高灵敏度，检测下限达pmol； 2. 线形范围宽，达7个数量级； 3. 快速，出第一个结果的时间仅需数分钟； 4. 应用范围广，可以同样的灵敏度和线性范围检测各种物质，包括DNA； 5. 试剂稳定，无污染和衰变问题； 6. 自动化程度高。
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2.电化学发光反应原理
顾名思义，电化学发光（ECL）是电场参与化学发光所产生的结果，是指通过施加一定的电压进行电 化学反应：
[Ru(bpy)3]2+：三联吡啶钌，是一种电化学发光剂 TPA：三丙胺，电子供体。
失电子
(阳离子自由基,不稳定) ↆ
TPA－e¯→TPA+·－ H+ → TPA·（强还原剂）
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2 两种抗体皆能与靶抗原特异性结合，生成抗原抗体复合物
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3 加入链霉亲和素包被的磁珠
磁珠直径2.8um， 表面凸凹，链霉亲和素包被，与生物素结合，生 物素-链霉亲和素特异亲和作用是目前已知的最牢固的非共价生物结 合作用。
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生物素-亲和素放大系统
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特点
1.高特异性 ↆ
高度特异性结 合
2.高敏感性 ↆ
缺点 半衰期短，试剂货架期不长。 标记物不断变化，试剂批间、批内变化大，标准曲线不能保存。 反应时间长，操作步骤很难自动化。 使用放射性核素，对人体有一定的危害性。 分析的限度为 10 mol/ml 或 10 g/ml。
放射免疫分析技术开创了体液微量物质定量分析的新领域，并为其他标记免疫分析奠定了基础。放 射免疫技术是临床实验室l重要检测手段，已广泛应用于激素、维生素、药物、肿瘤标志物、病原 微生物抗原(抗体)的定量分析。