无菌保证水平SAL
无菌保证水平（Sterility Assurance Level）
表示物品被灭菌后的无菌状态 按国际标准，湿热灭菌法的无菌保证值不得低
于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于 百万分之一。
灭菌工艺验证的必要性
灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品 的无菌检验，而是取决于生产过程中采用 合格的灭菌工艺、严格的GMP管理和良好 的无菌保证体系
无菌检验样品的取样
无菌检查
无菌检查的局限性
无菌的定义
理论上：无菌＝没有任何活的微生物 实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在
无法对整批产品进行100%检验
无菌检验的结果只是一个基于“可能性”的判断
无菌检验用培养基有其局限性
只进行细菌和真菌的检验 对实验结果的判定是基于“是否在培养基中生长” 培养条件（如温度和时间）是有限的
能抵御各种恶劣环境，可存活上百万年，因为它
有厚的皮层结构 仅含核酸及少量萌发必需物 含水量极低
休眠体，内生孢子，不可再生（每个细胞只产生 一个芽孢）；真菌孢子属于分生孢子，不具上述 特性。
细菌芽胞（孢）的形成及其特性
成熟芽孢
生长态细胞
孢子壁
母细胞
孢子壁的形成
热对活细胞的作用
有一种可引发克雅氏综合症 (Creutzfekldt- Jakob） 的普里昴 ( prion）病原体，在132℃下加 一小时 才可完全杀灭（克雅氏综合症：俗称人体疯牛病）
最终灭菌注射剂的质量控制
污染微生物的来源
内源性的影响因素
空气净化系统 水 工艺过程 物料
外源性的影响因素
人员
芽孢是关键控制点
G+ G-
微生物无处不在
气源性微生物革兰氏阳性菌较多它 们可形成芽孢，难以杀灭 因此，药品生产需要HVAC
水源性则革兰氏阴性菌居多 不会生成孢子 但会形成细菌内毒素
不能加热的产品 不能除去病毒、支原体等微生物 LRV=log reduction value 过滤对数下降值一 般上游为107下游为1，则LRV=7 由于操作较多，最终产品达到的无菌保证水 平远低于除菌过滤的水平
影响湿热灭菌效果的因素
待灭菌产品中含有微生物的种类和数量 待灭菌产品的包装形式 待灭菌产品的装载方式和装载数量 湿热灭菌工艺条件 湿热灭菌设备
单杂不得过4.0％
从上述调查 看国内灭菌注射剂生产的缺陷
对灭菌的认识不正确 产品研发未考虑灭菌
工艺的可行性 忽视工艺的可行性，
盲目跟风报批 注射剂用原料药的杂
质控制不严 忽视产品的安全性
《中国医药报》 2007年1月4日 A6版
无菌药品常用灭菌工艺的比较
类别 过度 杀灭法
残存 概率法
欣弗事件的发生
2006年7月 安徽华源 克林霉素磷酸酯
葡糖注射液 不良事件报告81
例，涉及10个省 份
欣弗到底怎么了？
克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查
克林霉素磷酸酯氯化钠注射（100ml:0.6g）
采用半无菌工艺生产
灭菌条件 100℃、7分钟
贮存条件 阴凉
有效期
1年
有些企业的处方中含有苯甲醇
流通 蒸汽法
除菌 过滤法
Fo值 微生物存活概率
要点说明
Fo≥12 ≤10-6
8<Fo<12 ≤10-6
热稳定性产品 以杀灭微生物作为实现无菌的手段
热稳定性较差产品 工艺过程将防止产品被耐热菌污染放在首位 而不是依赖最终灭菌去消除污染
不计算Fo ≤10-3
热不稳定产品 加热是除菌过滤的补充手段
LRV>7 ≤10-3
稳定性考察 有一批留样的有关物质为7.9％
有关物质 总杂不得过8.0 ％
单杂不得过5.0％
克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查
克林霉素磷酸酯注射液（2ml:0.3g）
灭菌条件 100℃、3～10分钟
贮存条件 遮光、密闭保存
有效期
2年
处方中含有苯甲醇
有关物质 总杂不得过6.0％（2004年底改 为8.0％）
96.1%
99.8%
30％
99.9%
100.0%
上述无菌测试结果的启示
含有少量微生物污染产 品的批次也有可能“通 过”无菌检验
一批产品的染菌率越低， 根据无菌检验的结果来 判定整批产品的无菌， 其风险就越大
如何用无菌检验来证明整批产品无菌
要求有一个取样计 划来涵盖整个批号
灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件 灭菌工艺经过验证后，方可正式用于生产
国内企业灭菌工艺验证常见缺陷
无包装规格 无装载方式 未对每一种产品每一种包装规格的每一种装载方
式进行验证 采用留点温度计监测温度 无温度探头校准记录 验证的灭菌工艺与实际工艺不一致 未验证最差灭菌条件 设定的验证合格标准达不到无菌保证水平（SAL）
10-6 生物指示剂使用不规范
灭菌工艺检查要点
生产环境和待灭菌产品中含有微生物的种类和数 量研究和监控
待灭菌产品的包装形式、装载方式和装载数量 灭菌工艺条件 灭菌设备
关键控制参数的控制和记录仪表的校准 设备维护和维修
灭菌的记录 灭菌工艺的验证
选用的生物指示剂 热分布试验，找出最冷点位置
需氧菌中的芽孢杆菌属(Bacillus)和厌氧菌中的梭 状芽孢杆菌属(Clostridium)，耐热性较强
它们能产生内源性孢子/芽孢，或胞间休眠体，对 热、干燥及化学消毒剂的耐受性大大增强
这类芽孢的干热灭菌温度一般在100 ~ 170℃，湿 热灭菌的温度则在80 ~ 129℃之间。
从“欣弗”事件谈灭菌工艺
一、什么是芽孢？
当某些细菌遇到不良生存环境条件时，为 保护自身，在细胞内形成一外壁厚而坚硬 的体眠体，该体眠体即称芽孢（Spore） 或孢子。
由于其对不良环境的耐受性远高于生长态 细胞，常被用于挑战灭菌工艺，以确认被 灭菌物品无菌的可靠性。
芽孢的特性
主要产生于Gram+ 细菌的两个属
芽孢杆菌属 Bacillus 梭菌属 Clostridium
我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态
美国非肠道药物学会注射剂无菌测试结果
试验目的：不合格的可能性(%) 试验批量：60,000支 试验方法：按美国药典无菌测试方法
真实的不合格率
测试20支样品 不合格的可能性
测试40支样品 不合格的可能性
1％
18.2%
33.1%
5％
64.2%
87.2%
15％