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植物生理学实验-3

实验报告
课程名称:植物生理学及实验实验类型:探索、综合或验证实验项目名称:
叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定学生姓名:专业:农业资源与环境学号:
同组学生姓名:
指导老师:
实验地点:实验日期:2019年10月9日
一、实验目的和要求
掌握植物中叶绿体色素的提取分离和性质鉴定、定量分析的原理和方法
二、实验内容和原理
以青菜为材料,提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。

原理如下:
1.叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂.常用95%的乙醇或80%的丙
酮提取。

2.皂化反应。

叶绿素是二羧酸酯,与强碱反应,形成绿色的可溶性叶绿素盐,就可与有机
溶剂中的类胡萝卜素分开。



线
3.取代反应。

在酸性或加温条件下,叶绿素卟啉环中的Mg2+可依次被H+和Cu2+取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。

H+取代Mg2+, Cu2+ (Zn2+)取代H+。

4.叶绿素受光激发,可发出红色荧光,反射光下可见红色荧光。

透射光下呈绿色,反射光下呈红色。

5.光谱分析。

叶绿素吸收红光和兰紫光,红光区可用于定量分析,其中645和
663用于定量叶绿素a,b及总量,而652可直接用于总量分析。

三、主要仪器设备
1.天平(万分之一)、可扫描分光光度计(UV-1240)、离心机
2.研具、各种容(量)器、酒精灯等
四、操作方法与实验步骤
1.定性分析
a)称取鲜叶3-5g,并逐步加入乙醇15ml,磨成匀浆
取匀浆过滤,并倒入三角瓶中,同时观察荧光现象。

b)取三角瓶中约1ml溶液于小试管。

加KOH数片剧烈摇均,加石油醚
O 1ml分层后观察。

1ml和H
2
c)取代反应:加醋酸约
1ml,取1/2加醋酸铜粉加热。

观察颜色变化。

2.叶绿素和类胡萝卜素的吸收光谱测定:
a)取皂化反应的上层黄色石油醚溶液→稀释(470nm OD 0.5-1)
b)取下层绿色溶液(留1/3),反复用石油醚粹取,直到无类胡萝卜素,离
心得叶绿素(盐)→稀释(663nm OD 0.5-1)
c)两者在400-700nm处扫描光谱,分别测定类胡萝卜素和叶绿素的吸收

3.叶绿素定量分析:
鲜叶0.1g,加1.9mlH
2
O,磨成匀浆,取2份0.2ml 加95%酒精4.8ml,摇匀,8000转离心5min,上清液在645,652,663测定OD,计算Chla,Chlb 和Chl总量的值。

五、实验数据记录和处理
1、定性分析:
观察荧光现象,透射光为绿色,反射光为红褐色光。

皂化反应(3ml) :上层呈黄色,为类胡萝卜素,吸收蓝紫光。

下层呈绿色,为叶绿素,吸收红光和蓝紫光。

2、叶绿素和类胡萝卜素的吸收光谱测定:
图表4
图表1
图表3
图表2。

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