土壤中分离霉菌
培养基（ms加乳酸和抑菌物质）1ml量
土豆200g蔗糖30g 琼脂20g
大量元素母液50ml铁盐、微量元素、有机成分母液各10ml
乳酸5g氯霉素0.1g
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 1、实验器材的准备与灭菌
*用报纸包扎好所需的培养皿等工具进行灭菌
*加热至160℃～170℃维持2小时
*用高压灭菌锅制备无菌水
*准备好取土的工具及酒精
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 2、药品的称量
*用分析天平准确称量元素和药品
*称量后溶解配制成母液
*在进行少量药品的称量
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 3、其他药品的称量
* 用天平称取土豆100g
*蔗糖30g
*琼脂20g
*放入抑菌物质0.1g
*乳酸5g
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---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 4、培养基的制备
* 取少量的水加入切好的土豆煮沸后过滤
*加入蔗糖和琼脂煮沸至琼脂溶解
*放入取好的大量元素等搅拌
*放入抑菌物质和乳酸
*加水至1L煮沸后即可
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 5.培养基的分装
*把制作好的培养基倒入试管并进行包扎
*共倒入14支即可培养基为1/3到1/2之间
*剩下的倒入锥心瓶中
*包扎好准备灭菌
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 6、灭菌
*打开高压灭菌锅加入适量的水
*把培养基放入锅内
*关闭灭菌锅后调整好压强和温度进行灭菌
*压力0.105pa121度20min
*灭菌后取出培养基
*取出后的试管放斜，锥形瓶中的进行培养皿倾倒
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7、
*台面进行清理及灭菌后打开风扇及照明灯
*从包好的报纸中取出灭菌后的培养皿
*在酒精的火焰旁左手微微打开培养皿左手倾倒
养基
*倾倒完成后待培养基冷却后翻转培养基
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8、无菌检测
*将倾倒好之后的培养皿和斜面放入恒温培养箱
*调节好温度28-30度
*培养1天后检查是否污染
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 9、土样选取
*选三出距离超过200米的取样点
*把铲子和所需要的器具用酒精消毒
*把土壤挖开15厘米以下取一两勺土
*用灭菌后的纸包好
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 10、无菌水分装
*取灭过菌的试管和和移液管进行分装
*在超净工作台上进行分装
*每支试管7ml无菌水
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 11、泥土的稀释
*准确称取1g土样
*放入100ml无菌水中稀释
*震旦30min
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12、菌液的稀释
*在工作台上用移液枪准确移去3ml土壤样液与第一
只试管震旦
*然后从震旦后的试管中移去3ml放入第二支试管震
旦
*依次类推
*直到第七支试管
注意：每次移取后更换枪头
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 13、涂布
*用移液枪移取1ml第七支试管内的溶液滴在培养
皿上
*然后用灭过菌的涂布三角在火焰旁进行涂布
*共涂布三个
*涂布后标记好浓度
*然后在依次涂布下一浓度液体
注意：每次移取后更换枪头
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 14、培养
*放入恒温培养箱内进行培养
*时间为2-3天
*温度28-30度
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 15、培养后观察
*培养2-3天后取出观察
*发现培养基内长满了细菌
*无法分辨菌落
结果：实验失败
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对比
失败（小组试验）成功（文库图片）
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失败原因分析：
1、抑菌药物添加错误
2、选择培养基用错
总结
能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。
在霉菌计数中，主要使用以下几种选择性培养基：
马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基（PDA）：霉菌在PDA培养基上生长良好。
用PDA 作平板计数时，必项加入抗菌素以抑制细菌。
孟加拉红（虎红）培养基：该培养基中的孟加拉红和抗菌素具有抑制细菌的作用。
孟加拉红还可抑制霉菌菌落的蔓延生长。
在菌落背面由孟加拉红产生的红色有助于霉菌菌落的计数。
高盐察氏培养基：粮食和食品中常见的曲霉和青霉在该培养基上分离效果良好，它具有抑制细菌和减缓生长速度快的毛霉科菌种的作用。
所以选用时尽量选取孟加拉红（虎红）培养基，这个培养基对于杂菌的抑制效果较好，且利于后期的观察。
正确选择培养基和正确操作是细菌分离培养的关键。
作者：李莎莎
云南国防职业技术学院
2015年1月4日。