《卫生检验与检疫》课程实验方案设计表
2014 级专科卫生检验与检疫技术专业 1 班 组号：一、二组；成员：李霞、徐婷婷、鞠林丽、阳青青、张雅菲、李杰 实验日期：2013 年 3 月 7 日 实验名 称 食品中亚硝酸盐的测定 检验依 据 GB/T5009.33-2010
实验原 理
亚硝酸盐的测定选用盐酸萘乙二胺法测定，试剂经沉淀蛋白质、去除脂肪 后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺 偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐的含量（于 540nm 处，以水做 参比测吸光度值） 。
李霞 成员及 分工 徐婷婷
亚硝酸钠标准溶液的配置： 准确称取 0.1000g 亚硝酸钠→溶解于 500ml 容量瓶→加水稀释至刻度 亚硝酸钠使用液的配置：取亚硝酸钠标准溶液 5.00ml→溶解于 200ml 容量瓶→加水稀释至刻度 盐酸萘乙二胺溶液的配置（2g/L） ：称取 0.2g 盐酸萘乙二胺→溶 解于 100ml 水→混匀至棕色瓶，避光保存。 对氨基苯磺酸溶液的配置(4g/L)： 称取 0.4g 对氨基苯磺酸→溶于 100ml20％盐酸→至棕色瓶混匀，避光保存。 亚铁氰化钾溶液的配置：称取 10.6 亚铁氰化钾→用水溶解稀释 至 100ml。 饱和硼砂溶液配置：称取 5.0g 硼酸钠→溶于 100ml 热水→冷却 备用。 乙酸锌溶液的配置： 称取 22.0g 乙酸锌→加 3ml 冰醋酸溶于水→ 稀释至 100ml 样品前处理，比色测定吸光度 辅助测定及记录实验结果并分析计算。
鞠林丽
阳青青 张雅菲 李杰
参考资 料
中华人民共和国国家标准 GB/T5009.33-2003
导师指 导意见
亚硝酸 0 盐的质 量 （ug） 吸光度 值
绘制标准曲线 结果分析计算试样中亚硝酸盐的含量按式（1）进行计算如下：
������ =
A m × v2
v1
C----试样中亚硝酸盐的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）; m----试样质量，单位为克（g）; A----测定用样液中亚硝酸盐的质量，单位为微克（ug） ； V1----试样处理液总体积，单位为毫升（mL） ； V2-----测定用样液体积，单位为毫升（mL） ；
试剂
亚硝酸钠标准溶液准确称取 0.1000g 于硅胶干燥器中干燥 24h 的亚硝 酸钠，加水溶解移入 500ml 的容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，此 溶液每 ml 相当于 200ug 亚硝酸钠。 亚硝酸钠标准使用液临用前，吸取亚硝酸盐标准溶液 5.00ml，置于 200ml 的容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 5.0ug 亚 硝酸钠。 盐酸萘乙二胺（2g/L）称取 0.2g 盐酸萘乙二胺，溶解于 100ml 水中， 混匀后，置于棕色瓶中，避光保存。 对氨基苯磺酸(4g/L)称取 0.4g 对氨基苯磺酸，溶于 100ml20﹪盐酸中， 置棕色瓶混匀，避光保存。 冰醋酸 亚铁氰化钾：称取 10.6g 亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至 100ml。 饱和硼砂溶液:称取 5.0g 硼酸钠，溶于 100mL 热水中，冷却后备用。 乙酸锌溶液： 称取 22.0g 乙酸锌， 加 3ml 冰醋酸溶于水， 并稀释至 100ml。
管号 试样滤 液 NaNO2 标准使 用 液 （ml） 对氨基 苯磺酸 钠 4g/L 盐酸萘 乙二胺 2g/L
各加 40ml 经试样处理后的滤液 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.50 2.00 2.50 ---
各加入 2ml，混匀，静置 3min-5min
各加 1ml，加水至刻度，混匀，静置 15min，用 2cm 比色杯， 零管调零，于 538nm 测吸光度。 1 2 3 4 5 7.5 10 12.5试剂源自 仪器 仪器
小型绞肉机 分光光度计 分析天平、50ml 的量杯、容量瓶、烧杯、电热炉、刻度吸管


操作步 骤
试样处理称取 5.0g 经绞碎混匀试样，置于 50ml 烧杯中，加 12.5ml 硼 砂饱和溶液，搅拌均匀，以 70 摄氏度左右的水约 300ml 将试样洗入 500ml 容量瓶中，于沸水浴加热 15min，取出后冷却至室温，然后一 面转动，一面加 5ml 亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加 5ml 乙酸锌溶液， 以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置 0.5h 除去上层脂肪，清液用 滤纸过滤，弃去初滤液 30ml，滤液备用。 测定吸取 40ml 上述滤液于 50ml 帯塞比色管中，另吸取 0.00、0.20、 0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50ml 亚硝酸钠标准使用液（相 当于 0、1、2、3、4、5、7.5、10、12.5ug 亚硝酸钠） ，分别置于 50ml 帯塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入 2ml 对氨基苯磺酸钠溶 液（4g/L） ，混匀，静置 3min-5min 后各加入 1ml 的盐酸萘乙二胺溶液 （2g/L） ，加水至刻度，混匀静置 15min，用 2cm 比色杯，以零管调节 零点，于波长 538nm 测吸光度，绘制标准曲线比较，同时做试 剂空白。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0